식품의약품안전처 고시 제2019-57호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2019. 7. 3.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2019-57호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

도시락에 포함되는 밥을 용기에 담기전 냉장의 온도로 냉각하는 경우, 밥이 덩어리져 도시락 용기에 담는 작업이 어려워지므로 밥은 냉장온도이하로 냉각하지 아니하고 용기에 담을 수 있도록 도시락의 제조·가공기준을 합리적으로 개정하고자 함

다양한 식품의 개발·생산에 따라 제품의 특성을 반영할 수 있도록 건조한 가공두부의 보존·유통온도을 합리적으로 개선하고, 분쇄육과 분쇄가공육제품의 냉장 보존·유통 온도기준을 강화하여 식중독 안전관리를 강화하고자 함

국제 공인기구에서 식용 근거가 확인된 수산물(6종) 및 미생물 2종을 식품원료 목록에 추가하고, 안전성에 우려가 있는 벨벳빈의 열매를 식품원료 목록에서 삭제하고자 함

국내외에서 사용되는 식품원료(가는잎미선콩) 중 사용조건 및 기준이 명시된 포몹신과 루핀 알칼로이드의 분석법을 확립하여 검사의 신뢰성을 확보하고자 함

미생물 시험법을 현장에서 적용이 용이하도록 개선하고, 국제적으로 공인된 분자생물학적 시험법을 도입하여 장염비브리오, 리스테리아 모노사이토제네스의 신속한 검출이 가능하도록 하며, 클로스트리디움 퍼프린젠스의 집락 산출 시, 평균 집락수를 계수하도록 명확히 하고자 함

사카린나트륨 시험법 중 시료추출방법 및 미생물 정량시험 중 확인시험 적용대상 개선, 말토올리고당 시험법 중 표준물질 추가와 기기분석 조건 변경, 비타민B1 시험법 중 효소정제과정과 효소반응조건 및 마비성 패독 시험방법 중 분석원리와 계산식을 개선하여 검사의 효율성과 정확성을 확보하고자 함

사료, 환경오염 등으로 인해 축·수산물에 비의도적으로 잔류되는 농약성분의 잔류허용기준 및 시험법을 신설하여 축·수산물의 안전관리기반을 마련하고, 떡류에 대한 사카린나트륨 및 소스류에 대한 타르색소 규격에 식품첨가물의 기준규격 개정사항을 반영하고자 함

2. 주요 내용

가. 도시락의 제조·가공기준 개정[안 제2. 2. 26)]

1) 밥을 용기에 담기전 냉장의 온도로 냉각하는 경우, 밥이 덩어리져 도시락 용기에 담는 작업이 어려워지므로 밥의 냉각온도 개선 필요

2) 밥은 냉장온도이하로 냉각하지 아니하고 용기에 담을 수 있도록 제조·가공기준 개정

3) 밥의 특성을 고려한 합리적인 제조·가공기준 개선으로 현장애로 사항을 해소하고 간정간편식 시장의 활성화에 기여

나. 보존 및 유통기준 개정[안 제2. 4. 7) ③ 및 제2. 4. 10)]

1) 제품의 특성을 반영한 보존·유통온도 기준 개정 필요

2) 가공두부 중 건조제품에 대하여 실온보관이 가능하도록 단서조항 추가

3) 분쇄육, 분쇄가공육제품의 냉장 보존 및 유통온도를 -2∼5℃로 개정

4) 보존 및 유통기준이 적용되는 대상 중 제품의 특성을 반영한 온도기준 설정으로 현장의 애로사항 해소 및 식중독 안전관리 강화

다. 수산물의 규격 중 식용복어 명칭 및 학명 명확화[안 제2. 3. (2) ③]

1) 식용 가능 복어 21종 중 8종(검자주복, 금밀복, 흰밀복, 검은밀복, 삼채복, 브리커가시복, 쥐복, 노란거북복)에 대한 명칭 수정

2) 현재 사용되지 않는 학명(Fugu 속, Liosaccus 속) 13종 삭제

3) 외국에서는 국내와 다른 학명으로 사용되어 복어 식용가능 여부에 혼선을 야기하는 5종 복어에 대해 외국에서 사용되는 식용복어의 학명을 추가하여 병기(복섬, 흰점복, 흰밀복, 검은밀복, 강담복)

4) 식용가능한 복어 판단에 대한 해석상의 혼란 방지

라. 식품원료 목록 개정 등[안 제1. 3. 28), 제5. 12. 12-1 3) (2), 제5. 14. 14-5 3) (1), 별표 1 및 별표 2]

1) 식품에 사용할 수 있는 원료 범위 및 명칭 등을 명확히하고, 식용근거가 확인된 원료에 대한 식품원료 목록 등재 필요

2) ‘식품에 사용할 수 없는 원료’에 한시적 기준·규격에서 전환된 원료가 포함되지 않도록 정의 개정

3) 섭취에 따른 부작용 사례 및 위해정보가 보고된 벨벳빈의 열매를 식품원료 목록에서 삭제

4) 유럽가자미(Pleuronectes platessa) 등 수산물 6종을  [별표 1] 식품에 사용할 수 있는 원료 목록에 추가

5) 생강나무의 꽃, 오크칩(바), 미생물 2종(Penicillium nalgiovense,  Gluconobacter oxydans)을 [별표 2] 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료의 목록에 추가

6) 오크칩(바)를 [별표 2] 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료의 목록에 추가하고, 식초와 과실주의 제조·가공기준에서 삭제

7) 식품에 사용가능한 원료의 품목 정비로 국민에게 안전한 식품을 공급하고, 다양한 제품 개발 등 식품산업 활성화에 기여

마. 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 6 중 (92) 카탑, (98) 티오사이클람 및 (99) 에톡시퀸]

1) 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준 중 잔류물의 정의 및 잔류허용기준이 동일한 물질의 통합 관리 및「사료관리법」에 의해 사용이 허가된 농약을 사용한 사료 및 환경오염 등으로 인해 축·수산물에 비의도적으로 잔류되는 농약성분의 잔류관리를 위한 잔류허용기준 신설 필요

2) 카탑 및 티오사이클람 개별 잔류허용기준을 ‘카탑/티오사이클람’ 으로 통합

3) 사료를 통해 잔류될 가능성이 있는 수산물 중 에톡시퀸의 잔류허용기준 신설

4) 기준·적용의 혼선을 방지하고 합리적인 기준·규격 관리로 식품안전관리 제고 및 축·수산물 중 농약 성분의 잔류허용기준을 과학적인 근거에 의해 신설함으로써 국민에게 안전한 식품 공급

바. 일반시험법 개정 등[안 제7. 3. 11), 제8. 2. 2.2 2.2.1 2.2.1.1 나. 2) 나), 제8. 2. 2.2 2.2.2 2.2.2.2 나, 제8. 3. 3.2 3.2.1, 제8 3. 3.2, 3.2.2, 제8. 4. 4.1 4.1.2 나, 제8. 4. 4.4 4.4.1 26), 제8. 4. 4.4 4.4.1 39), 제8. 4. 4.4 4.4.1 74), 제8. 4. 4.4 4.4.1 83), 제8. 4. 4.4 4.4.1 89), 제8. 4. 4.4 4.4.1 100), 제8. 4. 4.5 4.5.1 가. 4), 제8. 4. 4.7 4.7.1 가. 3), 제8. 4. 4.7 4.7.1 나, 제8. 4. 4.8 4.8.2 가. 1), 제8. 4. 4.8 4.8.2 가. 3) 가), 제8. 4. 4.14 4.14.2 다, 제8. 4. 4.15 나, 제8. 4. 4.26 다, 제8. 6. 6.2 6.2.1 마, 제8. 7. 7.3 7.3.2.29, 제8. 8. 8.3 8.3.9, 제8. 8. 8.3 8.3.26, 제8. 8. 8.3 8.3.41, 제8. 9. 9.8. 9.8.2, 제8. 11. 11.1 및 제8. 11. 11.3]

1) 시험결과의 정확성 및 효율성을 제고하고, 기준 신설 및 개정에 따른 시험법 마련 필요

2) 미생물 검사를 위한 시료채취 시 검체채취결정표를 따르지 않아도 되는 대상 명확화

3) 비타민 B1 및 말토올리고당 및 시험법 개정

4) 사카린나트륨의 액체크로마토그래프 분석시 물로 추출하여 시험할 수 있도록 시험법 개선 및 용어 개정

5) 위생지표균 정량시험 시, 추정시험에서 계수된 집락수가 규격 이하인 경우 확인시험을 생략할 수 있도록 시험법 개선

6) 국제적으로 공인된 선택배지 추가 및 식육의 세균수 재료 채취 용량과 원유·식육·식용란 시험법 상 채취용량이 상이한 부분 통일

7) 대장균군 완전시험시, 추정시험 반복확인 부분 삭제 및 배양기 교정 시 배양온도 편차허용 범위 확대

8) 클로스트리디움 퍼프린젠스 정량시험 시, 평균 집락수를 계수하도록 문구 명확화

9) 장염비브리오 및 리스테리아 모노사이토제네스에 국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입

10) 축·수산물의 잔류물질 안전관리를 위한 축·수산물 잔류물질 잔류허용기준 신설에 따라 관련 시험법 신설

11) 최신 분석기술을 이용한 잔류동물용의약품 시험법 개선

12) 마비성 패독 시험법의 정확성 및 효율성 개선

13) 식품원료 중 사용조건 및 기준이 명시된 포몹신(Phomopsins 5ug/kg이하)과 루핀알칼로이드(Lupin alkaloids 200mg/kg이하)의 시험법 신설

14) 과학적인 시험법 개정으로 검사 신뢰도를 제고함으로서 국민에게 안전한 식품 공급

사. 「식품위생법」 등 타법령 개정사항 반영[안 제2. 1. 1) (8), 제5. 1. 5) ∼ 6) 및 제5. 12. 12-2 5) (4)]

1) 「식품위생법」 및 「식품첨가물의 기준 및 규격」 개정사항 반영 필요

2) 원료등의 구비요건 중 유전자변형식품에 대한 「식품위생법」의 개정내용 반영

2) 떡류에 대한 사카린나트륨 불검출 규격 삭제

3) 소스류에 대한 타르색소의 식품첨가물의 기준·규격 개정사항 반영

4) 기준·규격 적용에 따른 혼란을 방지하므로써 식품안전관리의 신뢰도 제고

아. 식품의약품안전처 고시 제2018-98호 부칙 개정[고시 제2018-98호 부칙]

1) 특수용도식품 이외에 식품을 영·유아용으로 제조·판매할 수 있도록 ‘제3. 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품의 기준 및 규격’의 시행일 조정 필요

2) 식품제조․가공업자, 축산물가공업 영업자 또는 수입업자가 식약처 고시 제2018-98호로 개정된 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품의 기준 및 규격을 미리 적용받길 원할 경우에 한하여 개정된 사항을 미리 적용받을 수 있도록 부칙을 개정

3) 영·유아 특성에 맞는 안전한 식품이 유통되어 식품산업 활성화 및 소비자의 안심 보장

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 공고 제2018-487호, 2018. 11. 29.(2019. 11. 29. ～ 2019. 1. 30.)

나) 공고 제2019-171호, 2019. 4. 2.(2019. 4. 2. ∼ 2018. 6. 3.)

2) 식품위생심의위원회

가) 식품위생심의위원회 위생제도분과 심의: 2019. 6. 18.

나) 축산물위생심의위원회 잔류물질분과 심의 : 2019. 6. 18.

다) 식품위생심의위원회 유해오염물질분과 심의: 2019. 6. 19.

라) 식품위생심의위원회 미생물분과 심의 : 2019. 2. 21, 6. 24.

3) 규제심사

가) 국무조정실 규제심사 대상여부

(1) 규제심사 대상(국조실 접수번호 제2018-3847호, 2018.11.28.)

(2) 규제심사 대상(국조실 접수번호 제2019-1005호, 2019.4.1.)

나) 식약처 자체규제심사(2019.4.4. ～ 4.5, 원안의결)

다) 법제처 심사: 법령위반 및 위임범위 일탈 없음(2019.4.10.)

라) 국무조정실 규제개혁위원회 예비심사: 비중요규제(682회, 2019.6.14.)

식품의약품안전처 고시 제2019-57호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2019-31호, ‘19. 4. 26.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2019년  7월  3일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 3. 28) 중 “(6)과 (7)에서”를 “(6), (7) 및 (8)에서”로 한다.

제2. 1. 1) (8) 중 “생물의 유전자 중 유용한 유전자만을 취하여 다른 생물체의 유전자와 결합시키는 등의 유전자변형기술을 활용하여”를 “인위적으로 유전자를 재조합하거나 유전자를 구성하는 핵산을 세포 또는 세포 내 소기관으로 직접 주입하는 기술, 분류학에 따른 과(科)의 범위를 넘는 세포융합기술 등 생명공학기술을 활용하여”로 한다.

제2. 1. 1) (16) 중 “청정해역의 기준에”를 “지정해역 수준의 수질 위생기준에”로 한다.

제2. 2. 26) 중 “냉장온도 이하로”를 “냉장온도(단, 밥은 제외)로”로 한다.

제2. 3. 17) (2) ③을 다음과 같이 한다.

	명 칭	학 명
1	복섬	Takifugu niphobles, Takifugu alboplumbeus
2	흰점복	Takifugu poecilonotus, Takifugu flavipterus
3	졸복	Takifugu pardalis
4	매리복	Takifugu snyderi
5	검복	Takifugu porphyreus
6	황복	Takifugu obscurus
7	눈불개복	Takifugu chrysops
8	자주복	Takifugu rubripes
9	참복	Takifugu chinensis
10	까치복	Takifugu xanthopterus
11	민밀복	Lagocephalus inermis
12	은밀복	Lagocephalus wheeleri, Lagocephalus spadiceus
13	흑밀복	Lagocephalus gloveri, Lagocephalus cheesemanii
14	불룩복	Sphoeroides pachygaster
15	황점복	Takifugu flavidus
16	강담복	ChiLomycterus affinis, ChiLomycterus reticulatus
17	가시복	Diodon holocanthus
18	리투로가시복	Diodon liturosus
19	잔점박이가시복	Diodon hystrix
20	거북복	Ostracion immaculatus
21	까칠복	Takifugu stictonotus

제2. 4. 7) ③ 중 “양념젓갈류 및 가공두부(멸균제품 제외)”를 “양념젓갈류”로 하고, ④를 다음과 같이 신설한다.

④ 가공두부(멸균제품 또는 수분함량이 15% 이하인 제품은 제외)

제2. 4. 중 10) 중 “가금육 및 가금육 포장육 제품”을 “가금육, 가금육 포장육, 분쇄육, 분쇄가공육제품”으로 한다.

제5. 1. 5) 중 (3)을 삭제하고, (4) ∼ (15)를 각각 (3) ∼ (14)로 한다.

제5. 1. 6) 중 (3)을 삭제하고, (4) ∼ (15)를 각각 (3) ∼ (14)로 한다.

제5. 7. 7-3 6) 중 (7) ∼ (10)을 각각 (8) ∼ (11)로 하고, (7)을 다음과 같이 신설한다.

(7) 조지방

제8. 6.3.1.2 조지방에 따라 시험한다.

제5. 12. 12-1 3) 중 (2)를 삭제한다.

제5. 12. 12-2 5) (4) 중 “타르색소”를 “허용외 타르색소”로 한다.

제5. 14. 14-5 3) 중 (1)을 삭제한다.

제7. 3. 중 11)을 다음과 같이 한다.

11) 미생물 검사를 위한 시료채취는 검체채취결정표에 따르지 아니하고 제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격, 제3. 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품의 기준 및 규격, 제4. 장기보존식품의 기준 및 규격, 제5. 식품별 기준 및 규격에서 정하여진 시료수(n)에 해당하는 검체를 채취한다.

제8. 2. 2.2 2.2.1 2.2.1.1 나. 2) 나) 중 “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질”을  “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법”으로 한다.

제8. 2. 2.2 2.2.2 2.2.2.2 중 나.를 다음과 같이 한다.

나. 고속액체크로마토그래프에 의한 정량법

1) 장치

액체크로마토그래프-형광검출기(Fluorescence Detector, FLD)를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 4 M 초산나트륨용액 : 16.4 g의 초산나트륨을 물에 녹여 50 mL로 한다.

나) 다카디아스타제(Takadiastase) 용액 : 다카디아스타제를 물에 녹여 2%로 하고 원심분리한 후 상층액을 사용한다. 사용 시 조제한다.

다) 10% 삼염화초산 용액

라) 0.1 M 제일인산나트륨 용액

마) 0.01% 페리시안화칼륨·15%(w/v) 수산화나트륨 용액 : 수산화나트륨 150 g을 물에 녹여 1 L로 하고 이에 페리시안화칼륨(Potassium ferricyanide, K3[Fe(CN)6]) 100 mg을 녹인다. 사용 시 조제한다.

바) 표준용액의 조제 : 비타민B1염산염을 비타민B1으로 100 μg/mL가 되도록 10% 삼염화초산용액에 녹여 표준원액을 만든다. 표준원액을 0.1∼1.0 μg/mL가 되도록 희석한다. 희석한 비타민B1 용액, 4 M 초산나트륨, 2% 다카디아스타제 용액을 20 : 3 : 1의 비율로 혼합한 용액을 표준용액으로 한다.

3) 시험용액의 조제

가) 일반적 검체

검체 1 g(액상의 경우 5 g)을 정밀히 달아 10% 삼염화초산용액 5 mL를 넣고 균질기로 2분간 균질화시킨다. 균질화한 용액을 10% 삼염화초산용액으로 10 mL로 한 후 고속원심분리관에 넣고 2000 ⨯g 이상에서 30분간 원심분리한다. 이 상층액에 4 M 초산나트륨, 2% 다카디아스타제 용액을 각각 20 : 3 : 1의 비율로 혼합하고 1시간 초음파 추출한 후 상등액을 취하여 0.45 μm의 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

나) 난용성 비타민B1 염류 및 비타민B1 유도체 강화검체

2.2.2.2 비타민B1 가. 브롬시안에 의한 티오크롬 형광법 4) 시험용액의 조제에 따라 전처리된 시험용액을 사용한다.

4) 시험방법

가) 고속액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 250 mm, 충전제 Octadecylsilica) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1 M 제일인산나트륨용액

(3) 유속 : 0.7 mL/min

(4) 반응액 : 0.01% 페리시안화칼륨·15%(w/v) 수산화나트륨용액(유속 : 0.7 mL/min)

(5) 검출기 : 형광검출기(여기파장 : 375 nm, 측정파장 : 450 nm)

5) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

6) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 20 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 칼럼에서 분리 용출시킨 비타민B1을 반응액 송액펌프에서 보내진 반응액과 자동적으로 혼합시켜 형광물질(티오크롬)로 변환한다. 이 형광물질을 형광검출기로 보내 얻어진 표준용액 피크 면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 이용하여 시험용액의 비타민B1 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 비타민B1의 함량(mg/100 g)을 계산한다.

가) 계산방법

비타민B1의 양(mg/100 g) = S × (a×b)/검체채취량(g) × 100/1,000

S : 시험용액 중의 비타민B1의 농도(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 시험용액의 희석배수

제8. 3. 3.2 3.2.1을 다음과 같이 한다.

3.2.1 사카린나트륨

가. 박층크로마토그래프에 의한 정성

1) 분석원리

식품 중의 사카린나트륨을 물로 추출한 후, 용매추출 등을 통하여 정제하고 농축한 다음 박층크로마토그래프로 정성분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 폴리아미드 또는 실리카겔 박층

폴리아마이드 또는 실리카겔G(박층크로마토그래프용)에 이소프로판올 또는 물을 가하여 잘 섞어서 호상(풀모양)으로 하여 일반적인 방법에 따라 0.25 ㎜의 박층을 만들고 이를 바람에 말린 다음 60～70℃(실리카겔은 110℃)에서 30분간 건조하여 사용한다.

나) 전개조

3) 시약 및 시액

가) 사카린나트륨표준용액：사카린나트륨 100 mg을 물 25 mL에 녹인 후 에탄올을 가하여 50 mL로 한다.

나) 전개용매

(1) 헥산․초산에틸․개미산 (5：10：5)

(2) 헥산․초산에틸․개미산 (10：7：3)

(3) n-부탄올․암모니아수 (9：1)

(4) 초산에틸

4) 시험용액의 조제

가) 액상검체：검체 20 g을 취하고 물을 가하여 30 mL로 한 다음 분액깔때기에 옮긴다. 다만, 탄산 또는 알콜을 함유한 것은 수욕상에서 가온하여 날려보내고 분액깔때기에 옮긴 다음 물을 가하여 약 50 mL로 한다. ★ 이 액에 10% 염산을 가하여 산성으로 한 다음 초산에틸 50 mL씩으로 2회 추출한다. 추출액을 합하여 포화염화나트륨용액 10 mL씩으로 2회 씻은 다음 무수황산나트륨을 가해 탈수하고 감압농축하여 잔류물을 에탄올 0.5〜1 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

나) 반유동상 또는 고체검체 : 검체 20 g을 취하여 균질화한 후 물 50 mL를 가한 다음 삼각플라스크에 옮기고 끓는 수욕상에서 5분간 가열한다. 식힌 후 분액깔때기에 옮기고 가) 액상검체 ★ 이하의 조작에 따라 추출한다.

다) 유지를 함유한 검체：검체 20 g을 분액깔때기에 넣고 헥산 50 mL 및 1% 수산화나트륨용액을 가하여 약알카리성으로 한 물 100 mL를 가하여 진탕혼합한 후 정치하여 하층을 다른 분액깔때기에 옮긴다. 이액을 가) 액상검체 ★ 이하의 조작에 따라 추출한다.

5) 시험방법

폴리아미드 또는 실리카겔 박층의 하단부터에서 2 cm 일직선상에 표준용액 및 시험용액을 1～30 μL씩을 찍고 말린다. 폴리아미드 박층에서는 전개용매 (1)을 이용하여 전개한 후 0℃에서 30분간 말리고, 실리카겔 박층에서는 전개용매 (2), (3) 또는 (4)를 이용하여 전개한 후 100℃에서 20분간 말린 다음 자외선(253.6 nm)조사하에서 관찰하면 표준용액과 동일한 위치에 형광의 반점이 나타난다.

나. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 분석원리

식품 중의 사카린나트륨을 물로 추출한 후 여과하거나 여과액을 역상계 및 강음이온교환형 카트리지로 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) 정제용 카트리지

(1) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

(2) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

3) 시약 및 시액

가) 표준용액：사카린나트륨을 120에서 4시간 건조시킨 후 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

나) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15% 페로시안화칼륨용액, 제2액 30% 황산아연용액

4) 시험용액의 조제

가) 액상검체

검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70℃의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

나) 고체 또는 반고체검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

다) 단백질 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제2액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

라) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 상기 가)～라)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 마) 정제에 따라 시험한다.

마) 정제

여과한 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.1% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3 N 염산 5 mL로 용출시킨 액을 시험용액으로 한다.

5) 시험방법

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector), 210 nm

(2) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

(3) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropylammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(30：70)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(30：70) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

(4) 이동상유량：1.0 mL/min

(5) 주입량 : 10～20 μL

6) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 사카린나트륨의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 사카린나트륨의 함량을 산출한다.

제8. 3. 3.2 3.2.2를 다음과 같이 한다.

3.2.2 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

가. 분석원리

식품 중의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출 후 여과하거나 여과 액을 아세설팜칼륨(acesulfame K)과 사카린나트륨은 역상계 및 강음이온교환형 카트리지, 아스파탐은 강양이온교환형 카트리지로 각각 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

나. 장치

1) 정제용 카트리지

가) 역상계 카트리지：Sep-pak C18 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

나) 강음이온교환형 카트리지：Sep-pak QMA 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

다) 강양이온교환형 카트리지：Bond Elut SCX 또는 이와 동등한 것(사용전에 메탄올 5 mL 및 물 5 mL를 차례로 흘려 보낸 후 사용한다).

다. 시약 및 시액

1) 혼합표준용액：사카린나트륨을 120℃에서 4시간 건조시킨 후, 아세설팜칼륨(acesulfame K) 및 아스파탐은 그대로, 각각 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

2) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15% 페로시안화칼륨용액, 제2액 30% 황산아연용액

라. 시험용액의 조제

1) 액상검체

검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70℃의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

2) 고체 또는 반고체검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

3) 단백질 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제2액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

4) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 상기 1)～4)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 5) 정제에 따라 시험한다.

5) 정제

가) 아세설팜칼륨(acesulfame K) 및 사카린나트륨

여과한 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.5% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 약 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

나) 아스파탐

여과한 액 5 mL를 강양이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL를 사용하여 세척한 후 15% 염화나트륨용액 : 메탄올(50:50) 혼합액 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

마. 시험방법

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector), 210 nm

나) 칼럼：Nova-Pak C18 또는 이와 동등한 것

다) 칼럼온도 : 25～40℃의 일정온도

라) 이동상：10% TPA-OH(Tetrapropyl ammonium hydroxide) 20.3 mL를 메탄올：물(20：80)의 혼합액 약 900 mL에 녹이고 인산으로 pH를 4.0으로 조정한 다음 메탄올：물(20：80) 혼합액으로 전량을 1,000 mL로 한다.

마) 이동상유량：1.0 mL/min

바) 주입량 : 10～20 μL

바. 정성시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐의 피크는 어느 측정조건에서도 혼합표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

사. 정량시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐의 함량을 산출한다.

제8. 4. 4.1 4.1.2 나. 중 “식중독균 정량검사 시”를 “대장균, 대장균군 및 식중독균 정량검사 시”로 한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 26) 중 “Cloheximide”를 “Cycloheximide”로 한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 39) 중 “Thyprose”를 “Tryptose”로 한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 74) 중 “15파운드에서”를 “121℃에서”로 한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 83) 중 “시험관에 분주하여”를 삭제한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 89) 중 “DMagnesium Chloride, Anhydrous”를 “Magnesium Chloride, Anhydrous”로 한다.

제8. 4. 4.4 4.4.1 중 (100)을 다음과 같이 신설한다.

100) ALOA 한천배지(Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti)

Enzymatic Digest of Animal Tissues     18.0 g

Enzymatic Digest of Casein              6.0 g

Yeast Extract                           10.0 g

Sodium Pyruvate                         2.0 g

Glucose                                 2.0 g

Magsesium Glycerophosphate             1.0 g

Magesium Sulfate(anhydrous)             0.5 g

Sodium Chloride                         5.0 g

Lithium Chloride                        10.0 g

Disodium Hydrogen Phophate(anhydrous)  2.5 g

5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucopyranoside  0.05 g

Agar                                    12.0-18.0 g

위 성분을 증류수 930 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃정도로 식히고 다음의 추가성분을 가한다. Supplement ①∼④는 여과 멸균하여  각 5 mL씩 가하고, Supplement ⑤는 121℃에서 15분간 멸균하여 50mL을 가한다.

ALOA agar Supplement: ① Nalidixic acid solution(0.02 g/5 mL), ② Ceftazidime solution(0.02 g/5 mL), ③ Polymyxin B solution(76700 IU/5 mL), ④ Cycloheximide solution(0.05 g/50% Ethanol 5 mL) ⑤ L-α-phosphatidylinositol solution(2 g/50 mL)

※ ④ Cycloheximide solution 대신 Amphotericin B solution(0.01 g/1M HCl 2.5 mL과 Dimethylformamide 7.5 mL 혼합용액)을 사용할 수 있다. 단, Amphotericin B solution을 사용할 경우 위의 배지 성분을 증류수 925 mL에 녹인다.

제8. 4. 4.5 4.5.1 가. 4) 중 “25(재료 채취 용량)”을 “40(재료 채취 용량)”으로 한다.

제8. 4. 4.7 4.7.1 가. 3) 중 “대장균군의 존재를 완전히 증명하기 위하여 위의 평판상의 집락이 그람음성, 무아포성의 간균임을 확인하고, 유당을 분해하여 가스의 발생 여부를 재확인한다.”를 삭제한다.

제8. 4. 4.7 4.7.1 나. 중 “1～0.1 mL를”을 “1 mL와 0.1 mL를”로 한다.

제8. 4. 4.8 4.8.2 가. 1) 중 “44.5±0.2℃ 항온수조에서”를 “44±1℃에서”로 하고, “배농도의”를 “2배 농도의”로 한다.

제8. 4. 4.8 4.8.2 가. 3) 가) 중 “44.5℃에서 24시간”을 “44±1℃에서 24±2시간”으로 한다.

제8. 4. 4.14 4.14.2 다. 중 “10-4에서 85개의 전형적인 집락이 계수되었고,”를 “10-4에서 평균집락수가 85개이었고,”로 한다.

제8. 4. 4.15 나. 중 “ PALCAM 한천배지(배지 65)에 접종하여”를 “PALCAM 한천배지(배지 65) 또는 ALOA 한천배지(배지 100)에 접종하여”로 한다.

제8. 4. 4.26 중 다.를 다음과 같이 신설한다.

다. 장염비브리오 시험법

1) 주형 유전자 준비

증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

2) Real-time PCR 프라이머 염기서열

Target gene	염기서열(5‘→3’)
toxR	Foward	GAA CCA GAA GCG CCA GTA GT
	Reverse	AAA CAG CAG TAC GCA AAT CG
	Probe	FAM-TCA CAG CAG AAG CCA CAG GTG C-TAMRA

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix	1x	2x	12.5 μL
toxR 프라이머(F)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL
toxR 프라이머(R)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL
toxR 프로브(P)	500 nM	10 pmol/μL	1.25 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
증류수	-	-	5.75 μL
총량	-	-	25 μL

4) Real-time PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	95℃	10분	-
변성(Denaturation)	95℃	15초	45
결합(Annealing)	60℃	1분

※ 상기 Real-time PCR 반응액 조성 및 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 장염비브리오 불검출  로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 장염비브리오로 동정되면 검출로 판정한다.

제8. 4. 4.26 중 라.를 다음과 같이 신설한다.

라. 리스테리아 모노사이토제네스 시험법

1) 주형 유전자 준비

증균 배양액(1~2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

2) Real-time PCR 프라이머 염기서열

Target gene	염기서열(5‘→3’)
iap	Foward	CTA AAG CGG GAA TCT CCC TT
	Reverse	CCA TTG TCT TGC GCG TTA AT
	Probe	FAM-CCT CTG GCG CAC AAT ACG CTA GCA CT- TAMRA

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix	1×	2×	12.5 μL
iap 프라이머(F)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
iap 프라이머(R)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
iap 프로브(P)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
총량	-	-	25 μL

4) Real-time PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	50℃	2분	-
	95℃	10뷴	-
변성(Denaturation)	95℃	15초	40
결합(Annealing)	60℃	1분

※ 상기 Real-time PCR 반응액 조성 및 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 리스테리아 모노사이토제네스 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 리스테리아 모노사이토제네스로 동정되면 검출로 판정한다.

제8. 5. 5.1 5.1.2 나. 중 “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질”을  “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법”으로 한다.

제8. 5. 5.3 5.3.1 나. 중 “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질”을  “제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법”으로 한다.

제8. 6. 6.2 6.2.1 중 마.를 다음과 같이 한다.

마. 말토올리고당

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(refractive index detector, RI)

2) 시약 및 시액

가) 67% 아세토니트릴(Acetonitrile)

나) 물: HPLC용

다) 표준당

삼당류(DP3)-Maltotriose

사당류(DP4)-Maltotetraose

오당류(DP5)-Maltopentaose

육당류(DP6)-Maltohexaose

칠당류(DP7)-Maltoheptaose

팔당류(DP8)-Maltooctaose

구당류(DP9)-Maltononaose

십당류(DP10)-Maltodecaose

3) 표준용액의 조제

각 중합도(중합도 3∼7은 500 mg씩, 중합도 8∼10은 50 mg씩)의 말토올리고당을 정확하게 달아 증류수 20 mL로 녹이고 이동상으로 50 mL로 정용하여 표준원액으로 한다. 중합도 3∼7은 625∼10,000 μg/mL, 중합도 8∼10은 62.5∼1,000 μg/mL가 되도록 이동상으로 용해하여 표준용액으로 사용한다.

4) 시험용액의 조제

시료 4 g을 달아 증류수 20 mL로 녹이고 이동상으로 100 mL 정용한다. 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

5) 시험방법

가) 고속액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼: Shodex HILICpak VN-50 4D 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 30℃

(3) 이동상: 67% 아세토니트릴

(4) 유속: 0.3 mL/min

(5) 검출기: 시차굴절계(RI)

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 5 μL 씩 주입하여 얻은 표준용액  피크면적 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 말토올리고당 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 말토올리고당의 함량(%)을 계산한다. 다만, DP3 ∼ DP7의 함량이 40% 이상인 경우, DP8 ∼ DP10의 시험은 생략할 수 있다.

가) 계산방법

말토올리고당 함량(%) = [eqn: {(A+B+C+D+E+F+G+H)} over {시료채취량`(g)}]   ˟ a ˟ b ˟ [eqn: {100} over {1,000,000}]

DP3   Maltotriose        A(μg/mL)

DP4   Maltotetraose      B(μg/mL)

DP5   Maltopentaose     C(μg/mL)

DP6   Maltohexaose      D(μg/mL)

DP7   Maltoheptaose     E(μg/mL)

DP8   Maltooctaose      F(μg/mL)

DP9   Maltononaose     G(μg/mL)

DP10  Maltodecaose     H(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 시험용액의 희석배수

제8. 7.3 7.3.2 7.3.2.29을 다음과 같이 신설한다.

7.3.2.29 에톡시퀸(Ethoxyquin)

가. 시험법 적용범위

수산물 등에 적용한다.

나. 분석원리

시료 중의 에톡시퀸과 에톡시퀸다이머를 아세토니트릴로 추출하고 QuEChERS시약을 이용하여 지방을 제거한 다음,  PSA, C18 MgSO4로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각각의 표준품을 정밀히 달아 메탄올(에톡시퀸) 또는 아세토니트릴(에톡시퀸 다이머)에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

4) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액을 100 mg/L 농도로부터 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

5) 10 mM 개미산 암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

6) 아스코르브산 및 아스코르브산 나트륨 혼합용액(AA혼합용액) : 100 mL 용량플라스크에 아스코르브산 7.5 g과 아스코르브산 나트륨 7.5 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

7) QuEChERS시약 : QuEChERS pouch (Sodium citrate 1 g, NaCl 1 g, MgSO4 4 g, Sodium sesquihydrate 0.5 g) 또는 이와 동등한 것

8) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

각각의 시료를 균질화하여 2 g 을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 시험관에 취하고 AA혼합용액 500 μL를 첨가하여 가볍게 진탕한다. 물 5 mL와 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 진탕한 다음 QuEChERS 시약 6.5 g을 넣어 1분간 진탕한 후 4,700 G, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 상층액을 150 mg PSA, 150 mg C18과 900 mg MgSO4가 담겨진 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 1분간 진탕하고 4,700 G, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 원심분리한 상층액 1 mL를 취하여 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼 : C18(Capcell Core, 2.1 × 150 mm, 2.7 µm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 10 mM 개미산 암모늄 용액

(2) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	40	60
1	40	60
8	0	100
9	0	100
9.5	40	60
12	40	60

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary temperature : 350℃

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (Retention time, min)	분자량 (Molecular weight)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
에톡시퀸 (Ethoxyquin)	3.62	217	218	148	20
				134	20
				176	18
에톡시퀸 다이머 (Ethoxyquin dimer)	8.92	432	433	216	25
				188	35
				375	29

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

사. 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율이 허용범위(± 20∼30%) 이내에서 일치하여야 한다주1). 확인시험의 경우, 음성대조시료(Negative control sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

1) 표준품 크로마토그램

그림 1. 에톡시퀸 표준품(3.62분, 0.01 mg/L)의 크로마토그램

그림 2. 에톡시퀸 다이머 표준품(8.92분, 0.01 mg/L)의 크로마토그램

아. 정량시험

1) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당물질이 검출되지 않은 음성대조시료(Negative control sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

2) 정량한계

에톡시퀸(Ethoxyquin) : 0.01 mg/kg

에톡시퀸 다이머(Ethoxyquin dimer) : 0.01 mg/kg

제8. 8. 8.3 중 8.3.9를 다음과 같이 한다.

8.3.9 도라멕틴(Doramectin), 아바멕틴(Abamectin), 이버멕틴(Ivermectin), 에프리노멕틴(Eprinomectin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(5:1, v/v)으로 추출하고 황산마그네슘과 C18 분말, PSA(Primary secondary amine)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 20 mM 개미산 암모늄 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 소고기, 가금류고기, 알

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg와 C18 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 돼지고기

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg와 PSA(Primary secondary amine) 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg, PSA(Primary secondary amine) 50 mg, C18 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 개미산암모늄용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	70	30
1.0	70	30
2.5	5	95
8.0	5	95

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃
(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 3.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	첨가 생성 이온	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	도라멕틴 (Doramectin)	5.4	[M+NH4]+	899.1	916.5	219.2	26
						331.2	26
						593.3	14
2	아바멕틴 B1a (Abamectin B1a)	5.1	[M+NH4]+	873.1	890.5	305.2	22
						567.3	10
						711.4	8
3	에프리노멕틴 B1a (Eprinomectin B1a)	4.7	[M+H]+	914.1	914.6	154.1	20
						186.1	16
						330.2	10
4	이버멕틴 B1a (Ivermectin B1a)	6.2	[M+NH4]+	875.1	892.5	307.2	24
						569.3	12
						713.5	10
※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임 ※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

가) 표준품 크로마토그램

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(1) 도라멕틴(5.4분)

(2) 아바멕틴 B1a(5.1분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(3) 에프리노멕틴 B1a(4.7분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(4) 이버멕틴 B1a(6.1분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 10 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

도라멕틴 : 0.005 mg/kg

아바멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

에프리노멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

이버멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

제8. 8. 8.3 8.3.26 1) 중 “축산물”을 “축·수산물”로 한다.

제8. 8. 8.3 중 8.3.41을 다음과 같이 한다.

8.3.41 이소메타미디움(Isometamidium)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 염화나트륨, 개미산 암모늄과 아세토니트릴로 추출하고 무수황산마그네슘(MgSO4), PSA(Primary secondary amine)와 C18 분말로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 1 M 염화나트륨(Sodium chloride) 용액 : 100 mL 용량플라스크에 염화나트륨 5.84 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 200 mM 개미산암모늄(Ammonium formate) 용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.3% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 초산암모늄 0.771 g을 넣어 100 mL 물에 녹이고, 초산 3 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 알

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 1 M 염화나트륨 용액을 1 mL 첨가한 후 1분간 진탕하여 혼합한다. 200 mM 개미산암모늄 용액 0.2 mL와 물 2 mL를 가하여 1분간 진탕한 뒤 아세토니트릴 10 mL를 가하여 10분 간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 900 mg 무수황산마그네슘(MgSO4)과 150 mg PSA(Primary secondary amine) 분말을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮긴다. 10분간 진탕하고 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50℃ 수욕상에서 약 4 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알을 제외한 식품

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 1 M 염화나트륨 용액을 1 mL 첨가한 후 1분간 진탕하여 혼합한다. 200 mM 개미산암모늄 용액 0.2 mL와 물 2 mL를 가하여 1분간 진탕한 뒤 아세토니트릴 10 mL를 가하여 10분 간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 900 mg 무수황산마그네슘(MgSO4), 150 mg PSA(Primary secondary amine)와 150 mg C18 분말을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮긴다. 10분간 진탕하고 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50℃ 수욕상에서 약 4 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.3% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 메탄올과 아세토니트릴(8:2 v/v) 혼합액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4.0	5	95
8.0	5	95
8.1	90	10
10	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 1.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	첨가 생성 이온	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이소메타미디움 (Isometamidium)	4.8	[M]+	460.6	460.3	269.2	50
					298.2	22
					313.2	18

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험이 필요한 경우, 반드시 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 이소메타미디움(4.8분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

이소메타미디움 : 0.01 mg/kg

제8. 9. “식품 중 유해물질”을 “식품 중 유해물질 시험법”으로 한다.

제8. 9. 9.8 9.8.2를 다음과 같이 한다.

9.8.2 마비성 패독

가. 시험법 적용범위
패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림, 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품에 적용한다.

나. 분석원리
균질화한 검체를 0.1 N 염산으로 가온 추출한 뒤 상층액을 마우스 복강 내에 주사하여 그 치사시간으로부터 MU(Mouse Unit)*을 구한 후 이를 마비성 패독으로 환산한다.

* MU(Mouse Unit): 체중이 20 g인 마우스를 15분에 사망에 이르게 하는 독량을 1 MU로 정의한다.

다. 장치

1) 정제용 칼럼 : 크로마토그래피용 활성탄(100 mesh) 50 mL를 안지름 20 mm의 유리칼럼에 충전하여 사용하거나 또는 이와 동등한 것을 사용할 수 있다.

2) pH 측정기：표준완충액 pH 4.0, pH 7.0, pH 10.0으로 표준화 시킨 것

라. 시약 및 시액

1) 물 : 2차 증류수 및 이와 동등한 것

2) 표준용액 : 삭시톡신 표준물질에 3.0 mM 염산을 가하여 1 μg/mL 농도가 되도록 조제한다.

3) 1% 초산 함유 20% 에탄올용액 : 1 L 메스플라스크에 에탄올 200 mL를 넣고 물 500 mL를 섞은 후 초산 10 mL를 넣고 표시선까지 물로 채운다.

4) 5 N 염산 : 물 50 mL에 염산 47.5 mL을 가하고 물을 가해 100 mL로 한다

5) 0.1 N 염산 : 5 N 염산을 물로 50배 용량으로 희석하거나 물 50 mL에 염산 0.95 mL을 가하고 물을 가해 100 mL로 한다.

6) 0.01 N 염산 : 0.1 N 염산을 물로 10배 용량으로 희석하거나 물 100 mL에 염산 0.475 mL을 가하고 물을 가해 500 mL로 한다.

7) 3 mM 염산 : 물 50 mL에 0.1 N 염산 3 mL를 가하고 물을 가해 100 mL로 한다.

8) 0.1 N 수산화나트륨용액 : 수산화나트륨 0.40 g을 물을 가하여 녹인후 100 mL로 한다.

9) 기타 시약 : 특급

마. 시험용액의 조제

1) 검체의 손질

가) 패류, 피낭류
패류 및 피낭류의 외부를 물로 깨끗이 씻고 10개체 이상 또는 껍질을 제거한 육이 200 g 이상이 되도록 손질 한다.(패류의 경우 패각을 열고 내부의 모래나 이물질을 제거하기 위해 물로 씻은 후 칼로 패육을 취한다.) 이때 가열하거나 약품을 사용해서는 아니 된다. 육 전량을 표준체(20 mesh)에 얹어 5분 동안 물을 뺀 후 균질기로 균질화한다.

나) 패류 및 피낭류 통조림
내용물 전량을 취해 균질화한다(대용량인 경우 표준체(20 mesh)에 얹어 2분간 고형물과 액체를 분리한 후 고형물과 액체의 중량을 측정하고 그 비율에 따라 200 g 이상을 취하여 균질화한다).

다) 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품
검체 일정량을 분말로 만들거나 가늘게 잘라 균질화한다.

2) 추출

가) 패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림
균질화한 검체 100 g을 비커에 달아 0.1 N 염산 100 mL를 가하고 교반하면서 5 N 염산이나 0.1 N 수산화나트륨용액으로 pH를 3.0으로 조정한다. 강염기성이 되면 독이 파괴되기 때문에 0.1 N 수산화나트륨용액으로 pH을 조정할 때에는 부분적인 파괴를 방지하기 위하여 격렬히 교반하면서 소량씩 적가한다. 혼합액을 5분간 끓이고 실온에서 식힌 후, pH가 3.0이 되도록 조정하고 물을 가하여 200 mL이 되게 한다. 비커에 옮긴 후 교반하고 상층부가 투명해질 때까지 정치하여 상층액을 시험용액으로 한다. 만약, 필요하면 원심분리(예: 1,200 G에서 5분간)하여 얻은 상층액을 시험용액으로 사용하여도 된다.

나) 패류 및 피낭류 염장품, 패류 및 피낭류 건조가공품
균질화한 검체 20 g을 비커에 달아 0.1 N 염산 100 mL를 가하여 패류의 추출방법에 따라 추출한다. 추출액 중 상층액 25 mL를 분취하여 pH 4.5～5.5로 조정한 다음 분당 3 mL 이하의 유속으로 정제용 유리칼럼을 통과시킨다. 물 100 mL로 칼럼을 세척한 후 1% 초산함유 20% 에탄올용액 150 mL로 용출시킨다. 용출액을 감압 농축하고 잔류물을 0.01 N 염산 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작(마우스 시험)

1) 마우스
ICR계의 또는 ddy계 동일계통의 생후 4주된 19～21 g의 건강한 수컷을 사용한다. 시험에 사용한 마우스는 표 2를 이용하여 마우스체중에 대해 보정한다.

2) 시험
시험용액 1 mL을 2마리의 마우스 복강 내에 주사하고 주사 후부터 사망까지의 시간을 초단위로 기록한다. 사망 시에는 3마리 이상의 마우스를 취하여 복강 내에 주사하여 치사시간을 구한다. 다만, 마우스가 5분 이내에 사망한 경우 5～7분 정도에서 사망하도록 희석하여 치사시간을 구한다. 희석시에는 0.1 N 또는 0.01 N 염산으로 pH 2.0～4.0 되게 조정하여 사용한다.

사. 계산

1) CF(Conversion Factor) 산출
표준용액 10 mL에 3.0 mM 염산을 10, 15, 20, 25 및 30 mL을 각각 가하여 희석한 용액(이 액은 pH가 2.0～4.0이어야하며, 4.5를 넘어서는 안된다) 1 mL씩을 각각 3마리 마우스에 복강 내 주사하고 주사 후부터 사망까지의 시간을 초단위로 기록하여 치사시간이 5～7분 사이가 되는 용액의 농도를 선택한다. 선택된 농도에 첨가되는 3.0 mM 염산의 양을 1 mL씩 증감하여 세 농도의 희석표준용액을 제조한다(표준용액 10 mL에 3.0 mM 염산 25 mL로 희석한 액이 선택된 경우, 표준용액 10 mL에 3.0 mM 염산 24 mL, 25 mL 및 26 mL을 각각 가하여 제조한다) 이 세 농도의 희석표준용액 1 mL 씩을 각각 10마리의 마우스 복강 내에 주사하여 치사시간을 구한다. 표 1에 의한 치사시간에 따른 MU와 표 2에 의한 마우스의 체중에 따른 MU를 곱한 보정된 MU들을 구하고, 이 보정된 MU들의 중앙값을 희석표준용액의 MU로 한다.

CF는 각 희석표준용액의 CF를 평균하여 구한다.

CF	=	희석표준용액의 농도(ug/mL)
		MU

2) CF를 이용한 마비성 패독 계산
시험용액 1 mL를 마우스에  주사하고 살아남은 것을 포함한 각 마우스의 치사시간으로부터 표 1에서 1 mL 당 MU를 구하고, 표 2에서 각 마우스체중에 대한 MU를 보정한 후 중앙값을 구한다(중앙값을 구할 때 60분 이상 살아있는 마우스의 치사시간에 대한 MU는 0.875이하로 간주).

CF에 마우스체중을 보정한 1 mL당 MU의 중앙값을 곱하여 1 mL당 μg의 마비성 패독으로 환산하고 다음 식에 의해 검체 중의  마비성 패독을 구한다.

마비성 패독(mg/kg) = CF × 치사시간 및 체중보정에 의한 MU × 최종부피(mL) × 희석배수 / 검체량(g)

표 1. 마비성 패독의 치사시간-MU 환산표(Sommer 표)

치사시간 (분:초)	MU	치사시간 (분:초)	MU	치사시간 (분:초)	MU
1:00	100.0	4:00	2.500	5:25	1.770
1:10	66.20	4:05	2.440	5:26	1.764
1:15	38.30	4:10	2.380	5:27	1.758
1:20	26.40	4:15	2.320	5:28	1.752
1:25	20.70	4:20	2.260	5:29	1.746
1:30	16.50	4:25	2.210	5:30	1.740
1:35	13.90	4:30	2.160	5:31	1.735
1:40	11.90	4:35	2.120	5:32	1.730
1:45	10.40	4:40	2.080	5:33	1.725
1:50	9.330	4:45	2.040	5:34	1.720
1:55	8.420	4:50	2.000	5:35	1.715
		4:55	1.960	5:36	1.710
2:00	7.670			5:37	1.705
2:05	7.040	5:00	1.920	5:38	1.700
2:10	6.520	5:01	1.914	5:39	1.695
2:15	6.060	5:02	1.908	5:40	1.690
2:20	5.660	5:03	1.902	5:41	1.686
2:25	5.320	5:04	1.896	5:42	1.682
2:30	5.000	5:05	1.890	5:43	1.678
2:35	4.730	5:06	1.884	5:44	1.674
2:40	4.480	5:07	1.878	5:45	1.670
2:45	4.260	5:08	1.872	5:46	1.664
2:50	4.060	5:09	1.866	5:47	1.658
2:55	3.880	5:10	1.860	5:48	1.652
		5:11	1.854	5:49	1.646
3:00	3.700	5:12	1.848	5:50	1.640
3:05	3.570	5:13	1.842	5:51	1.636
3:10	3.430	5:14	1.836	5:52	1.632
3:15	3.310	5:15	1.830	5:53	1.628
3:20	3.190	5:16	1.824	5:54	1.624
3:25	3.080	5:17	1.818	5:55	1.620
3:30	2.980	5:18	1.812	5:56	1.616
3:35	2.880	5:19	1.806	5:57	1.612
3:40	2.790	5:20	1.800	5:58	1.608
3:45	2.710	5:21	1.794	5:59	1.604
3:50	2.630	5:22	1.788
3:55	2.560	5:23	1.782	6:00	1.600
		5:24	1.776	6:01	1.596
치사시간 (분:초)	MU	치사시간 (분:초)	MU	치사시간 (분:초)	MU
6:02	1.592	6:39	1.450	11:00	1.075
6:03	1.588	6:40	1.447	11:30	1.060
6:04	1.584	6:41	1.443
6:05	1.580	6:42	1.440	12:00	1.050
6:06	1.576	6:43	1.437
6:07	1.572	6:44	1.433	13:00	1.030
6:08	1.568	6:45	1.430
6:09	1.564	6:46	1.427	14:00	1.015
6:10	1.560	6:47	1.425
6:11	1.556	6:48	1.422	15:00	1.000
6:12	1.552	6:49	1.419
6:13	1.548	6:50	1.417	16:00	0.990
6:14	1.544	6:51	1.414
6:15	1.540	6:52	1.411	17:00	0.980
6:16	1.536	6:53	1.409
6:17	1.532	6:54	1.406	18:00	0.972
6:18	1.528	6:55	1.403
6:19	1.524	6:56	1.401	19:00	0.965
6:20	1.520	6:57	1.398
6:21	1.516	6:58	1.395	20:00	0.960
6:22	1.512	6:59	1.393
6:23	1.508			21:00	0.954
6:24	1.504	7:00	1.390
6:25	1.500	7:15	1.350	22:00	0.948
6:26	1.496	7:30	1.310
6:27	1.492	7:45	1.280	23:00	0.942
6:28	1.488
6:29	1.484	8:00	1.250	24:00	0.937
6:30	1.480	8:15	1.220
6:31	1.477	8:30	1.200	25:00	0.934
6:32	1.473	8:45	1.180
6:33	1.470			30:00	0.917
6:34	1.467	9:00	1.160
6:35	1.463	9:30	1.130	40:00	0.898
6:36	1.460
6:37	1.457	10:00	1.110	60:00	0.875
6:38	1.453	10:30	1.090

표 2. 마우스체중-MU 보정표

마우스 체중(g)	MU	마우스 체중(g)	MU
10.00	0.500	19.10	0.973
11.00	0.560	19.20	0.976
12.00	0.620	19.30	0.979
13.00	0.675	19.40	0.982
14.00	0.730	19.50	0.985
14.50	0.760	19.60	0.988
15.00	0.785	19.70	0.991
15.50	0.810	19.80	0.994
16.00	0.840	19.90	0.997
16.50	0.860	20.00	1.000
17.00	0.880	20.10	1.003
17.10	0.885	20.20	1.006
17.20	0.890	20.30	1.009
17.30	0.895	20.40	1.012
17.40	0.900	20.50	1.015
17.50	0.905	20.60	1.018
17.60	0.910	20.70	1.021
17.70	0.915	20.80	1.024
17.80	0.920	20.90	1.027
17.90	0.925	21.00	1.030
18.00	0.930	21.10	1.032
18.10	0.934	21.20	1.034
18.20	0.938	21.30	1.036
18.30	0.942	21.40	1.038
18.40	0.946	21.50	1.040
18.50	0.950	21.60	1.042
18.60	0.954	21.70	1.044
18.70	0.958	21.80	1.046
18.80	0.962	21.90	1.048
18.90	0.966	22.00	1.050
19.00	0.970	23.00	1.070

주1) 마비성 패독이 함유된 재료를 조작시에는 고무장갑을 사용할 것

제8. 9. 9.18을 다음과 같이 신설한다.

9.18 포몹신 A(Phomopsin A) 시험법

가. 시험법의 적용범위

루핀콩 및 루핀 가공품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)용액으로 추출하고 원심분리 한 후 상층액을 증류수로 희석한 다음 막여과지로 여과한 여액을 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 용량플라스크에 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

5) 추출 용액 : 아세토니트릴 80 mL, 증류수 19 mL, 초산 1 mL을 넣고 혼합하여 추출 용액으로 사용한다.

6) 5 mM 개미산암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 315.3 mg을 넣고 정제수로 표시선까지 채운다.

7) 5 mM 개미산암모늄 95% 메탄올 용액 : 개미산암모늄 315.3 mg을 넣고 메탄올 950 mL, 정제수 50 mL을 혼합하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 추출용액(아세토니트릴/증류수/초산(80:19:1, v/v/v)) 20 mL을 가하여 60분간 진탕한 후, 상온에서 3,500 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 증류수와 1:1(v/v) 비율로 희석한다. 막여과지(PTFE filter 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18 (Atlantis T3, 3 mm ｘ 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 5 mM 개미산암모늄용액

(2) 이동상 B : 5 mM 개미산암모늄 95% 메탄올용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
1	90	10
9	0	100
11	0	100
11.1	90	10
15	90	10

다) 유속 : 0.4 mL/min

라) 칼럼온도 : 35℃

마) 주입량 : 10 μL

2) 질량분석기 조건

가) Ionization : ESI (Positive)

나) Collision gas : N2(질소)

다) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분 (Compound)	분자량 (M.W.)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
포몹신 A (Phomopsin A)	789.236	789.2	323.1	35
			226.1	47

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 표준품 크로마토그램

포몹신 A (6.65분)

그림 1. 포몹신 A 표준용액(5 ug/L)

4) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	± 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	± 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	± 30 %

5) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체(blank sample)에 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

제8. 9. 9.19을 다음과 같이 신설한다.

9.19 루핀알칼로이드 시험법(Lupinine, 13-hydroxylupanine, Lupanine, Sparteine, Angustifoline)

가. 시험법 적용범위

루핀콩 및 루핀 가공품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 분석대상물질에 메탄올/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)용액을 첨가한 후 초음파를 사용하여 추출하고 원심분리 한 후 상층액을 막여과지로 여과한 여액을 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

라 시약 및 시액

1) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 루피닌(Lupinine), 루파닌(Lupanine), 13-하이드록시루파닌(13-hydroxylupanine), 스파테인(Sparteine), 안구스티폴린(Angustifoline)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,250 mg/L가 되도록 하며, 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

4) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올에 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

5) 추출 용매 : 메탄올, 정제수, 초산을 각각 80:19:1의 부피 비율로 혼합하여 시료 추출 용액으로 사용한다.

6) 0.1% HFBA(heptafluorobutyric acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 HFBA 1mL을 넣고 3차 증류수로 표시선까지 채운다.

7) 0.1% HFBA 메탄올용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 HFBA 1mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 검체 0.5 g을 취한다. 추출용매(메탄올/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)) 50 mL를 가하여 120분간 초음파 추출을 한 후 상온에서 3,500 G로 20분간 원심분리한다. 상층액을 취한 후 추출용매로 5배 희석한 후 막여과지(RC filter 0.2 µm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 가스크로마토그래프 조건

가) 칼럼 : C18 (Atlantis T3, Waters, 2.1 mm ｘ 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% HFBA 용액

(2) 이동상 B : 0.1% HFBA 메탄올용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	유속(mL/min)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	0.5	95	5
0.5	0.5	95	5
4.0	0.5	0	100
4.5	0.5	0	100
5.0	0.5	95	5
10.0	0.5	95	5

다) 칼럼온도 : 35℃

라) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 조건

가) Ionization : ESI (Positive)

나) Collision gas : N2(질소)

다) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석성분 (Compound)	분자량 (M.W.)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
루피닌 (Lupinine)	169.268	170.20	124.0	24
			136.0	28
13-하이드록시루파닌 (13-hydroxylupanine)	264.369	265.30	152.0	26
			69.9	36
루파닌 (Lupanine)	248.370	249.25	136.0	25
			69.9	35
스파테인 (Sparteine)	234.387	235.20	134.0	27
			97.9	33
안구스티폴린 (Angustifoline)	234.343	235.20	193.0	18
			112.0	28

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 표준품 크로마토그램

루피닌(2.47분)

13-하이드록시루파닌(2.50분)

루파닌(2.64분)

스파테인(3.08분)

안구스티폴린(1.79분)

그림 1. 루피닌, 13-하이드록시루파닌, 루파닌, 스파테인, 안구스티폴린 표준용액(각 100 μg/L)의 크로마토그램

4) 정성 및 정량시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

제8. 11. 11.1 중 “삭카린나트륨”을 “사카린나트륨”으로 한다.

제8. 11. 11.3 중 “삭카린표준용액” 및 “삭카린나트륨”을 각각 “사카린표준용액” 및 “사카린나트륨”으로 한다.

[별표 1] 1. 중 A가013900을 다음과 같이 한다.

A가013900	검은딸기	블랙베리, Black berry, Brame berry, Hooked-thorn raspberry	Rubus fructicosus / Rubus croceacanthus / Rubus spp.	잎, 열매

[별표 1] 1. 중 A가042700을 다음과 같이 한다.

A가042700	다시마	곤포, Sea tangle, Kelp, Sea cabbage	Saccharina japonica / Saccharina angustata / Laminaria japonica Areschoung	-

[별표 1] 1. 중 A가052100을 다음과 같이 한다.

A가052100	드럼스틱	Drumstick-tree, 모링가	Moringa oleifera Lam.	줄기, 잎, 열매, 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가058700을 다음과 같이 한다.

A가058700	로케트	Rocket, Arugula	Eruca Sativa Mill. / Eruca vesicaria subsp. sativa (Miller) Thell. / Brassica eruca L.	잎, 꽃

[별표 1] 1. 중 A가060400을 다음과 같이 한다.

A가060400	마	참마, East Asian mountain yam	Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg / Dioscorea pokystachya	뿌리, 뿌리줄기※ (산약), 주아(영여자)

[별표 1] 1. 중 A가082000을 삭제한다.

[별표 1] 1. 중 A가082800을 다음과 같이 한다.

A가082800	벨벳빈	Velvet bean	Mucuna pruriens	순

[별표 1] 1. 중 A가089700을 삭제한다.

[별표 1] 1. 중 A가100000을 다음과 같이 한다.

A가100000	상추	상치, 줄기상추, lettuce	Lactuca sativa L.	잎(줄기포함)

[별표 1] 1. 중 A가110200을 다음과 같이 한다.

A가110200	스타아니스	대회향, Star anise	Illicium verum Hooker fil.	열매※(팔각회향), 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가118400을 다음과 같이 한다.

A가118400	알로에	노회, 베라알로에, 알로에베라	Aloe barbadensis L. / Aloe ferox Miller / Aloe africana Miller 또는 Aloe spicata Baker의 잡종 / Aloe vera (L.) Burm. f.	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]에서 얻은 액즙※(노회)

[별표 1] 1. 중 A가128000을 삭제한다.

[별표 1] 1. 중 A가175300을 다음과 같이 한다.

A가175300	팜	야자나무, 종려나무, 오일팜, Palm Tree	Elaeis guineensis	열매(씨 포함)

[별표 1] 1. 중 A가177800을 다음과 같이 한다.

A가177800	풀버섯	초고버섯, 짚버섯, 볏짚버섯, Straw mushiroom	Volvariella volvacea	자실체

[별표 1] 1. 중 A가361800을 다음과 같이 한다.

A가361800	White mustard	백겨자	Sinapis alba L. / Brassica alba / Brassica hirta	잎, 씨앗

[별표 1] 2. 중 A나030000을 다음과 같이 한다.

A나030000	둥근전복	참전복, 북방전복, Abalone	Nordotis discus discus / Nordotis discus hannai	-

[별표 1] 2. 중 A나035900을 다음과 같이 한다.

A나035900	문어	대문어, North Pacific giant octopus, Giant Pacific octopus	Enteroctopus dofleini / Octopus vulgaris / Octopus bimaculatus / Octopus maya	-

[별표 1] 2. 중 A나037200을 다음과 같이 한다.

A나037200	미꾸라지	추어, Chinese muddy loach	Misgurnus mizolepis / paramisgurnus dabryanus	-

[별표 1] 2. 중 A나041600을 다음과 같이 한다.

A나041600	밴댕이	반댕이, 뒤포리, Japanese sardinella, Big-eyed herring	Sardinella zunasi / Sardinella aurita	-

[별표 1] 2. 중 A나063150을 다음과 같이 신설한다.

A나063150	유럽가자미	-	Pleuronectes platessa	-

[별표 1] 2. 중 A나064750을 다음과 같이 신설한다.

A나064750	인도흰새우	-	Fenneropenaeus indicus	-

[별표 1] 2. 중 A나068500을 다음과 같이 한다.

A나068500	정어리	눈치	Sardinops melanostictus / Sardina pilchardus	-

[별표 1] 2. 중 A나076150을 다음과 같이 신설한다.

A나076150	초록담치	-	Perna viridis	-

[별표 1] 2. 중 A나081100을 다음과 같이 한다.

A나081100	톱날꽃게	Giant mud crab, Indo-pacific swamp crab, Green mud crab	Scylla serrata / Scylla paramamosain	-

[별표 1] 2. 중 A나091450을 다음과 같이 신설한다.

A나091450	Argentine shortfin squid	-	Illex argentinus	-

[별표 1] 2. 중 A나094550을 다음과 같이 신설한다.

A나094550	Thornycheek grouper	-	Epinephelus diacanthus	-

[별표 1] 2. 중 A나094750을 다음과 같이 신설한다.

A나094750	Veined squid	-	Loligo forbesi	-

[별표 2] 1. 중 B가005400을 다음과 같이 한다.

B가005400	비파나무	Liquat, Japanese Medlar	Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl.	잎※ (비파엽)	-

[별표 2] 1. 중 B가006450을 다음과 같이 신설한다.

B가006450	생강나무	아귀나무, 동백나무, 개동백나무, Blunt-lobe spicebush	Lindera obtusiloba Blume / Benzoin cercidifolium (Hemsl.) Rehder	꽃	다류의 원료로만 사용

[별표 2] 1. 중 B가008550을 다음과 같이 신설한다.

B가008550	오크칩(바)	-	Quercus spp.	참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)	발효식초와 주류에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성전에 제거하여 사용. 단, 원료에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니됨

[별표 2] 1. 중 B가010100을 다음과 같이 한다.

B가010100	작약	백작약, 참작약, Peony Root	Paeonia lactiflora Pallas / Paeonia albiflora Pallas var. trichocarpa Bunge / Paeonia japonica var. pilosa NAKAI 또는 동속근연식물	뿌리※ (작약)	-

[별표 2] 3. 중 B다003100을 다음과 같이 신설한다.

B다003900	Penicillium nalgiovense	-	Penicillium nalgiovense	발효육류 및 치즈 제조에 한함

[별표 2] 3. 중 B다003200을 다음과 같이 신설한다.

B다004000	Gluconobacter oxydans	-	Gluconobacter oxydans	식초 및 비타민 제조에 한함

[별표 6] 중 “(92) 카탑(Cartap)”을 “(92) 카탑(Cartap)/티오사이클람 (Thiocyclam)”으로 한다.

[별표 6] 중 (98) 티오사이클람(Thiocyclam)을 삭제하고, “(99) 테트라코나졸(Tetraconazole)”를 “(98) 테트라코나졸(Tetraconazole)”로 한다.

[별표 6] 중 (99)을 다음과 같이 신설한다.

(99) 에톡시퀸(Ethoxyquin)

◎ 잔류물의 정의 : Ethoxyquin 및 Ethoxyquin dimer의 합

어류          1.0

갑각류        0.2

식품의약품안전처 고시 제2018-98호 부칙 제2조를 다음과 같이 한다.

제2조(적용례) ① 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

② 제1항에도 불구하고 이 고시 시행 전 제1조제2항제3호 중 가목 및 다목에서 파목까지의 개정규정에 대하여 이 고시를 적용받고자 하는 자는 ｢식품위생법｣, ｢축산물 위생관리법｣ 또는 ｢수입식품안전관리특별법｣에 따라 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품으로 품목제조보고 또는 변경하거나 수입신고하는 경우 개정규정을 미리 적용받을 수 있다.

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1조제1항에도 불구하고 다음 각 호의 구분에 따른 개정규정은 다음 각 호에서 정한 날부터 시행한다.

1. 고시 후 2개월이 경과한 날

가. [별표 6] 중 (99)의 개정규정

2. 고시 후 1년이 경과한 날

가. 제2. 4. 10)의 개정규정

나. [별표 1] 1. 중 A가082800의 개정규정

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. 총 칙

1. ∼ 2. (생  략)

3. 용어의 풀이

1) ∼ 27) (생  략)

28) ‘식품에 사용할 수 없는 원료’란 식품의 제조･가공･조리에 사용할 수 없는 것으로, 제2. 1. 2)의 (6)과 (7)에서 정한 것 이외의 원료를 말한다.

29) ∼ 65) (생  략)

4. (생  략)

제1. 총 칙

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 용어의 풀이

1) ∼ 27) (현행과 같음)

28) ------------------------

------------------------

------------------------

--- (6), (7) 및 (8)에서 -----

-------------------.

29) ∼ 65) (현행과 같음)

4. (현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) 원료 등의 구비요건

(1) ∼ (7) (생  략)

(8) 생물의 유전자 중 유용한 유전자만을 취하여 다른 생물체의 유전자와 결합시키는 등의 유전자변형기술을 활용하여 재배･육성된 농･축･수산물 등을 원료 등으로 사용하고자 할 경우는 「식품위생법」 제18조에 의한  ‘유전자변형식품등의 안전성 심사 등에 관한 규정’에 따라 안전성 심사 결과 적합한 것이어야 한다.

(9) ∼ (15) (생  략)

(16) 생식용 굴은「패류 생산해역 수질의 위생기준」(해양수산부 고시)에 따라 지정해역 수준의 수질 위생기준에 적합한 해역에서 생산된 것이거나 자연정화* 또는 인공정화** 작업을 통해 청정해역의 기준에 적합하도록 처리된 것이어야 한다.

* ∼ ** (생  략)

(17) ∼ (23) (생  략)

2) (생  략)

2. 제조·가공기준

1) ∼ 25) (생  략)

26) 냉장상태에서 유통되는 도시락의 경우, 도시락 용기에 담는 식품은 조리가 완료된 후 냉장온도 이하로 신속히 냉각하여 용기에 담아야 한다. 다만, 반찬의 온도에 영향을 미치지 않도록 별도 포장되는 밥은 그러하지 않을 수 있다.

27) ∼ 28) (생  략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 16) (생  략)

17) 수산물에 대한 규격

(1) (생  략)

(2) 복어독 기준

① ∼ ② (생  략)

③ 식용 가능한 복어의 종류

	종 류	학 명
1	복섬	Fugu niphobles, Takifugu niphobles, <신설>
2	흰점복	Fugu poecilonotus, Takifugu poecilonotus, <신설>
3	졸복	Fugu pardalis, Takifugu pardalis
4	매리복	Fugu vermicularis vermicularis, Takifugu vermicuLaris snyderi
5	검복	Fugu vermicularis porphyreus, Takifugu porphyreus
6	황복	Fugu ocellatus obscurus, Takifugu obscurus
7	눈불개복	Fugu chrysops, Takifugu chrysops
8	자주복	Fugu rubripes, Takifugu rubripes
9	검자주복	Fugu rubripes chinensis, Takifugu chinensis
10	까치복	Fugu xanthopterus, Takifugu xanthopterus
11	금밀복	Lagocephalus inermis
12	흰밀복	Lagocephalus wheeleri, <신설>
13	검은밀복	Lagocephalus gloveri, <신설>
14	불룩복	Sphoeroides pachygaster, Liosaccus pachygaster
15	삼채복	Fugu flavidus, Takifugu flavidus
16	강담복	ChiLomycterus affinis, <신설>
17	가시복	Diodon holocanthus
18	브리커가시복	Diodon liturosus
19	쥐복	Diodon hystrix
20	노란거북복	Ostracion cubicus
21	까칠복	Fugu stictonotus, Takifugu stictonotus

18) (생  략)

4. 보존 및 유통기준

1) ∼ 6) (생  략)

7) 아래의 제품은 10℃이하에서 보존하여야 한다.

① ∼ ② (생략)

③ 양념젓갈류 및 가공두부(멸균제품 제외)

8) ∼ 9) (생  략)

10) 식육, 포장육 및 식육가공품의 냉장 제품은 -2∼10℃(다만, 가금육 및 가금육 포장육 제품은 -2∼5℃)에서 보존 및 유통하여야 한다. 다만, 멸균 또는 건조 식육가공품 등은 실온에서 보관할 수 있다.

11) ∼ 30)  (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) 원료 등의 구비요건

(1) ∼ (7) (현행과 같음)

(8) 인위적으로 유전자를 재조합하거나 유전자를 구성하는 핵산을 세포 또는 세포 내 소기관으로 직접 주입하는 기술, 분류학에 따른 과(科)의 범위를 넘는 세포융합기술 등 생명공학기술을 활용하여 ----------

------------------------

------------------------

------------------------

-------------------.

(9) ∼ (15) (현행과 같음)

(16) -----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

------------ 지정해역 수준의 수질 위생기준에 -----

-----------.

* ∼ ** (현행과 같음)

(17) ∼ (23) (현행과 같음)

2) (현행과 같음)

2. 제조·가공기준

1) ∼ 25) (현행과 같음)

26) ------------------------

------, -----------------

-------------------- 냉장

온도(단, 밥은 제외)로 --

------------------------

------------------------

------------------------

----------------.

27) ∼ 28) (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 16) (현행과 같음)

17) 수산물에 대한 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 복어독 기준

① ∼ ② (현행과 같음)

③ 식용 가능한 복어의 종류

	명 칭	학 명
1	복섬	<삭제>, Takifugu niphobles, Takifugu alboplumbeus
2	흰점복	<삭제>, Takifugu poecilonotus, Takifugu flavipterus
3	졸복	<삭제>, Takifugu pardalis
4	매리복	<삭제>, Takifugu snyderi
5	검복	<삭제>, Takifugu porphyreus
6	황복	<삭제>, Takifugu obscurus
7	눈불개복	<삭제>, Takifugu chrysops
8	자주복	<삭제>, Takifugu rubripes
9	참복	<삭제>, Takifugu chinensis
10	까치복	<삭제>, Takifugu xanthopterus
11	민밀복	Lagocephalus inermis
12	은밀복	Lagocephalus wheeleri, Lagocephalus spadiceus
13	흑밀복	Lagocephalus gloveri, Lagocephalus cheesemanii
14	불룩복	Sphoeroides pachygaster, <삭제>
15	황점복	<삭제>, Takifugu flavidus
16	강담복	ChiLomycterus affinis, ChiLomycterus reticulatus
17	가시복	Diodon holocanthus
18	리투로가시복	Diodon liturosus
19	잔점박이가시복	Diodon hystrix
20	거북복	Ostracion immaculatus
21	까칠복	<삭제>, Takifugu stictonotus

18) (현행과 같음)

4. 보존 및 유통기준

1) ∼ 6) (현행과 같음)

7) 아래의 제품은 10℃이하에서 보존하여야 한다.

① ∼ ② (현행과 같음)

③ 양념젓갈류

④ 가공두부(멸균제품 또는 수분함량이 15% 이하인 제품은 제외)

8) ∼ 9) (현행과 같음)

10) -----------------------

------------------------

가금육, 가금육 포장육, 분쇄육,  분쇄가공육제품------------ ------------------------

------------------------

--------------.

11) ∼ 30)  (현행과 같음)

제3. ∼ 제4. (생  략)

제3. ∼ 제4. (현행과 같음)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 사카린나트륨 : 검출되어서는 아니 된다(떡류에 한한다).

(4) ∼ (15) (생  략)

6) 시험방법

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 사카린나트륨

제8. 일반시험법 3.2.1 사카린나트륨에 따라 시험한다.

(4) ∼ (15) (생  략)

2. ∼ 6. (생  략)

7. 식용유지류

7-1 ∼ 7-2 (생  략)

7-3 식용유지가공품

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ∼ (6) (생  략)

<신  설>

(7) ∼ (10) (생  략)

8. ∼ 11. (생  략)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) (생  략)

(2) 참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)은 발효식초에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성 전에 제거하여야 한다. 단, 오크칩(바)에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니 된다.

4) ∼ 6) (생  략)

12-2 소스류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 타르색소 : 검출되어서는 아니된다.

(5) (생  략)

6) (생  략)

12-3 ∼ 13. (생  략)

14. 주류

14-1 ∼ 14-4 (생  략)

14-5 과실주

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) 참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)은 과실주 숙성에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성 전에 제거하여야 한다. 단, 오크칩(바)에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니 된다.

4) ∼ 6) (생  략)

14-6 ∼ 23. (생  략)

제5. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

<삭  제>

(3) ∼ (14) (현행 (4) ∼ (15)와 같음)

6) 시험방법

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

<삭  제>

(3) ∼ (14) (현행 (4) ∼ (15)와 같음)

2. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 식용유지류

7-1 ∼ 7-2 (현행과 같음)

7-3 식용유지가공품

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ∼ (6) (현행과 같음)

(7) 조지방

제8. 6.3.1.2 조지방에 따라 시험한다.

(8) ∼ (11) (현행 (7) ∼ (10)과 같음)

8. ∼ 11. (현행과 같음)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) (현행과 같음)

<삭  제>

4) ∼ 6) (현행과 같음)

12-2 소스류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 허용외 타르색소 : 검출되어서는 아니된다.

(5) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

12-3 ∼ 13. (현행과 같음)

14. 주류

14-1 ∼ 14-4 (현행과 같음)

14-5 과실주

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

<삭  제>

4) ∼ 6) (현행과 같음)

14-6 ∼ 23. (현행과 같음)

제6. (생  략)

제6. (현행과 같음)

제7. 검체의 채취 및 취급방법

1. ∼ 2. (생  략)

3. 검체채취의 일반원칙

1) ∼ 10) (생략)

11) 미생물 검사를 위한 시료채취는 검체채취결정표에 따르지 아니하고 제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격과 제5. 식품별 기준 및 규격에서 정하여진 시료수(n)에 해당하는 검체를 채취한다.

4. ∼ 6. (생  략)

제7. 검체의 채취 및 취급방법

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 검체채취의 일반원칙

1) ∼ 10) (생략)

11) ------------------------

-------------------------

--------- 제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격, 제3. 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품의 기준 및 규격, 제4. 장기보존식품의 기준 및 규격, 제5. 식품별 기준 및 규격에서 정하여진 시료수(n)에 해당하는 검체를 채취한다.

4. ∼ 6. (현행과 같음)

제8. 일반시험법

1. (생  략)

2. 식품성분시험법

2.1 (생  략)

2.2 미량영양성분시험법

2.2.1 무기질

2.2.1.1 시험용액의 조제

가. (생  략)

나. 습식분해

1) (생  략)

2) 마이크로웨이브법

가) 분석원리 (생  략)

나) 시험방법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 --------------------.

2.2.1.2 ∼ 2.2.2.1 (생  략)

2.2.2.2 비타민B1

가. (생  략)

나. 고속액체크로마토그래프에 의한 정량법

1) 장치

액체크로마토그래프 : 형광검출기를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 4 M 초산나트륨용액

나) 다카디아스타제(Takadiastase) 용액：다카디아스타제를 물에 녹여 2%로 하여 퍼무티트(Purmutit)칼럼에 넣고 다카디아스타제중에 존재하는 비타민B1을 제거한 후 사용한다. 사용 시 제조한다.

다) 페리시안화칼륨(potassium ferricyanide, K3[Fe(CN)6])․수산화나트륨용액：수산화나트륨 30 g을 물에 녹여 200 mL로 하고 이에 페리시안화칼륨(potassium ferricyanide, K3[Fe(CN)6]) 20 mg을 녹인다. 사용 시 제조한다.

라) 표준용액의 조제

순도가 보증된 비타민B1염산염을 비타민B1으로 0.01～1.0 ㎍/mL가 되도록 10% 삼염화초산용액에 녹인다. 이 비타민B1용액(S ㎍/mL)을, 4 M 초산나트륨을, 2% 다카디아스타제 용액을 각각 20：3：1의 비율로 혼합한 용액을 표준용액으로 한다.

3) 시험용액의 조제

가) 일반적 검체

검체 1 g을 정확히 달아 10% 삼염화초산용액 5 mL를 넣고 균질기로 균질화시킨다.

균질화한 용액을 10% 삼염화초산용액으로 10 mL로 한 후 고속원심분리관에 넣고 9,000 rpm에서 30분간 원심분리한다. 이 상등액에 4M 초산나트륨, 2% 다카디아스타제 용액을 각각 20:3:1의 비율로 혼합하고 잘 교반하면서 37℃에서 8～10시간 방치한 후 상층액을 취하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 난용성 비타민B1 염류 및 비타민B1 유도체 강화검체

2.2.2.2 비타민B1 가. 브롬시안에 의한 티오크롬형광법 4) 시험용액의 조제에 따라 전처리된 시험용액을 사용한다.

4) 시험방법

가) 고속액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼：옥타데실실릴화한칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 250 mm, 충전제 octadecylsilica)또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：0.1 M 제일인산나트륨용액

(3) 유속：0.7 mL/분

(4) 반응액：페리시안화칼륨(potassium ferricyanide, K3[Fe(CN)6])․수산화나트륨용액(유속：0.7 mL/분)

(5) 검출기：형광검출기(여기파장：375 nm, 측정파장：450 nm)

<신  설>

5) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 50 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 칼럼에서 분리 용출시킨 비타민B1을 반응액 송액펌프에서 보내진 반응액과 자동적으로 혼합시켜 형광물질(티오크롬)으로 변환한다. 이 형광물질을 형광분광광도계로 보내 얻어진 표준용액 피크의 면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 이용하여 시험용액의 비타민B1의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체중 비타민B1의 함량(mg/100 g)을 계산한다.

가) 계산방법

비타민B1의 양(mg/100 g) ＝ S ×	×b	×	100
	검체채취량(g)		1,000

S：시험용액중의 비타민B1의 농도(μg/mL)

a：시험용액의 전량(mL)

b：시험용액의 희석배수

2.2.2.3 ∼ 2.2.2.16 (생  략)

제8. 일반시험법

1. (현행과 같음)

2. 식품성분시험법

2.1 (현행과 같음)

2.2 미량영양성분시험법

2.2.1 무기질

2.2.1.1 시험용액의 조제

가. (현행과 같음)

나. 습식분해

1) (현행과 같음)

2) 마이크로웨이브법

가) 분석원리 (현행과 같음)

나) 시험방법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법 ---------------.

2.2.1.2 ∼ 2.2.2.1 (현행과 같음)

2.2.2.2 비타민B1

가. (현행과 같음)

나. 고속액체크로마토그래프에 의한 정량법

1) 장치

액체크로마토그래프-형광검출기(Fluorescence Detector, FLD)를 사용한다.

2) 시약 및 시액

가) 4 M 초산나트륨용액 : 16.4 g의 초산나트륨을 물에 녹여 50 mL로 한다.

나) 다카디아스타제(Takadiastase) 용액 : 다카디아스타제를 물에 녹여 2%로 하고 원심분리한 후 상층액을 사용한다. 사용 시 조제한다.

다) 10% 삼염화초산 용액

라) 0.1 M 제일인산나트륨 용액

마) 0.01% 페리시안화칼륨·15%(w/v) 수산화나트륨 용액 : 수산화나트륨 150 g을 물에 녹여 1 L로 하고 이에 페리시안화칼륨(Potassium ferricyanide, K3[Fe(CN)6]) 100 mg을 녹인다. 사용 시 조제한다.

바) 표준용액의 조제 : 비타민B1염산염을 비타민B1으로 100 μg/mL가 되도록 10% 삼염화초산용액에 녹여 표준원액을 만든다. 표준원액을 0.1∼1.0 μg/mL가 되도록 희석한다. 희석한 비타민B1 용액, 4 M 초산나트륨, 2% 다카디아스타제 용액을 20 : 3 : 1의 비율로 혼합한 용액을 표준용액으로 한다.

3) 시험용액의 조제

가) 일반적 검체

검체 1 g(액상의 경우 5 g)을 정밀히 달아 10% 삼염화초산용액 5 mL를 넣고 균질기로 2분간 균질화시킨다. 균질화한 용액을 10% 삼염화초산용액으로 10 mL로 한 후 고속원심분리관에 넣고 2000 ⨯g 이상에서 30분간 원심분리한다. 이 상층액에 4 M 초산나트륨, 2% 다카디아스타제 용액을 각각 20 : 3 : 1의 비율로 혼합하고 1시간 초음파 추출한 후 상등액을 취하여 0.45 μm의 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

나) 난용성 비타민B1 염류 및 비타민B1 유도체 강화검체

2.2.2.2 비타민B1 가. 브롬시안에 의한 티오크롬 형광법 4) 시험용액의 조제에 따라 전처리된 시험용액을 사용한다. \

4) 시험방법

가) 고속액체크로마토그래프의 측정 조건

(1) 칼럼 : 옥타데실실릴화한 칼럼(안지름 4.6 mm, 길이 250 mm, 충전제 Octadecylsilica) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 : 0.1 M 제일인산나트륨용액

(3) 유속 : 0.7 mL/min

(4) 반응액 : 0.01% 페리시안화칼륨·15%(w/v) 수산화나트륨용액(유속 : 0.7 mL/min)

(5) 검출기 : 형광검출기(여기파장 : 375 nm, 측정파장 : 450 nm)

5) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

6) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 20 μL씩 고속액체크로마토그래프에 주입하고, 칼럼에서 분리 용출시킨 비타민B1을 반응액 송액펌프에서 보내진 반응액과 자동적으로 혼합시켜 형광물질(티오크롬)로 변환한다. 이 형광물질을 형광검출기로 보내 얻어진 표준용액 피크 면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을 이용하여 시험용액의 비타민B1 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 비타민B1의 함량(mg/100 g)을 계산한다.

가) 계산방법

비타민B1의 양(mg/100 g) = S × (a×b)/검체채취량(g) × 100/1,000

S : 시험용액 중의 비타민B1의 농도(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 시험용액의 희석배수

2.2.2.3 ∼ 2.2.2.16 (현행과 같음)

3. 식품 중 식품첨가물 시험법

3.1 (생  략)

3.2 인공감미료

과자류, 빵 또는 떡류, 설탕, 포도당, 과당, 엿류, 당시럽류, 특수용도식품, 벌꿀 등 식품에 적용한다.

3.2.1 사카린나트륨

가. 박층크로마토그래프에 의한 정성

1) 분석원리

식품 중의 삭카린나트륨을 물로 추출한 후, 용매추출 등을 통하여 정제하고 농축한 다음 박층크로마토그래프로 정성분석하는 방법이다.

2) (생  략)

3) 시약 및 시액

가) 삭카린나트륨 표준용액 : 삭카린나트륨 100mg을 물 25 mL에 녹인후 에탄올을 가하여 50 mL로 한다.

나) (생  략)

4) ∼ 5) (생  략)

나. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 분석원리

식품 중의 삭카린나트륨을 반투막을 이용하여 투석한 후, 투석외액을 역상계 및 강음이온교환형 카트리지로 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

2) 장치

가) (생  략)

3) 시약 및 시액

가) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 인산 7 mL를 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

나) 투석외액：인산 7 mL를 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

다) 0.1M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여서 100 mL로 한다.

라) 표준용액：삭카린나트륨을 120에서 4시간 건조시킨 후 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

<신  설>

4) 시험용액의 조제

가) 투석

액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 24～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

나) 정제

투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1 M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.1% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3 N 염산 5 mL로 용출시킨 액을 시험용액으로 한다.

5) (생  략)

6) 정성시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 삭카린나트륨의 피크는 어느 측정조건에서도 표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 삭카린나트륨의 함량을 산출한다.

3.2.2 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

가. 분석원리

식품 중의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 삭카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출후 여과하거나 반투막을 이용하여 분석한 후, 투석외액을 아세설팜칼륨(acesulfame K)과 삭카린나트륨은 역상계 및 강음이온교환형 카트리지, 아스파탐은 강양이온교환형 카트리지로 각각 정제한 다음 액체크로마토그래프로 정성 및 정량분석하는 방법이다.

나. (생  략)

다. 시약 및 시액

1) 투석내액：염화나트륨 100 g 및 85% 인산 11.8 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

2) 투석외액：85% 인산 11.8 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다.

3) 0.1M TPA-Br용액：TPA-Br(Tetrapropylammonium bromide) 2.66 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

4) 혼합표준용액：삭카린나트륨을 120℃에서 4시간 건조시킨 후, 아세설팜칼륨(acesulfame K) 및 아스파탐은 그대로, 각각 100 mg을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mL로 한다. 사용시 이 용액 1～10 mL를 취하고 물을 가하여 100 mL로 한 것을 표준용액으로 한다.

5) (생  략)

라. 시험용액의 조제

1) 제1법

가) ∼ 다) (생  략)

라) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 상기 가)～라)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 2) 제2법의 나) 정제에 따라 시험한다.

2) 제2법

가) 투석

액체검체는 10～20 g을 취하고, 고체 또는 반고체검체는 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 10～20 g 취한 다음 투석내액 약 20 mL를 가하여 혼합한다. 이 혼합액을 투석용 튜브(분자량 12,000～14,000, 미리 수세한 다음에 사용한다)에 넣고 튜브의 끝을 밀봉한다. 미리 투석외액 약 150 mL를 넣은 눈금이 있는 용기에 튜브를 넣고 투석외액을 가하여 전량을 약 200 mL로 한다. 때때로 흔들어 주면서 실온에서 15～48시간 방치하여 투석한 후 투석용 튜브를 제거하고 투석외액을 가해 200 mL로 하여 투석액으로 한다.

나) 정제

(1) 아세설팜칼륨(acesulfame K) 및 삭카린나트륨

투석액 20 mL를 25 mL 메스플라스크에 넣고 0.1M TPA-Br용액 2 mL를 가한 다음 물을 가하여 25 mL로 한다. 이 액 5 mL를 역상계 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL로 세척한 후 메탄올：물 (40：60) 혼합액 10 mL로 용출시킨다. 용출액 전량을 강음이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 0.5% 인산 5 mL와 물 5 mL를 사용하여 세척한 후 0.3N 염산 약 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

(2) 아스파탐

투석액 5 mL를 강양이온교환형 카트리지에 분당 3～4 mL의 속도로 떨어뜨리고 물 10 mL를 사용하여 세척한 후 15% 염화나트륨용액 : 메탄올(50:50) 혼합액 5 mL로 분당 3～4 mL의 속도로 용출시켜 전량을 5 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.

마. (생  략)

바. 정성시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 크로마토그램상의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 삭카린나트륨 및 아스파탐의 피크는 어느 측정조건에서도 혼합표준용액과 시험용액의 머무름 시간(retention time)이 일치하여야 한다.

사. 정량시험

시험용액 및 혼합표준용액을 앞의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입하고, 얻어진 피크의 높이 또는 면적으로부터 작성한 검량선을 이용하여 시험용액 중의 아세설팜칼륨(acesulfame K), 삭카린나트륨 및 아스파탐의 함량을 산출한다.

3.3 ∼ 3.6 (생  략)

3. 식품 중 식품첨가물 시험법

3.1 (현행과 같음)

3.2 인공감미료

---------------------------

---------------------------

------------------------.

3.2.1 사카린나트륨

가. 박층크로마토그래프에 의한 정성

1) 분석원리

------ 사카린나트륨 ------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

------.

2) (현행과 같음)

3) 시약 및 시액

가) 사카린나트륨 ------- : 사카린나트륨 ------------

---------------------

-----------------.

나) (현행과 같음)

4) ∼ 5) (현행과 같음)

나. 액체크로마토그래프에 의한 정성 및 정량

1) 분석원리

------ 사카린나트륨을 물로 추출한 후 여과하거나 여과액을

-------------------------

-------------------------

-------------------------

----------------.

2) 장치

가) (현행과 같음)

3) 시약 및 시액

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

가) ------：사카린나트륨---

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------.

나) 카레스(Carrez)침전제 : 제1액 15% 페로시안화칼륨용액, 제2액 30% 황산아연용액

4) 시험용액의 조제

가) 액상검체

검체 약 5 g을 취하고 물을 가해 50 mL로 하여 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 탄산가스가 있는 경우에는 10분간 초음파 처리하여 탄산가스를 제거하며 알코올을 함유한 경우는 70℃의 수욕상에서 15분간 가온하여 알코올을 증발시켜 검체를 취한다.

나) 고체 또는 반고체검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

다) 단백질 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한다. 이 액에 카레스(Carrez) 침전제 제1액 2 mL를 가해 흔들어 섞은 다음 다시 카레스(Carrez) 침전제 제2액 2 mL를 가해 2분간 흔들어 섞는다. 발생한 거품은 초음파 처리하여 제거한 후 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다.

라) 지방 함량이 많은 검체

검체를 미리 균질화하거나 잘게 썰어 잘 섞은 후 약 2～5 g을 취하여 물 10～20 mL를 가한 다음 10～20분간 흔들어 완전히 용해시키거나 10분간 초음파 추출한다. 이 액에 물을 가해 50 mL로 하고 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취한 후 분액깔때기에 옮겨 디에틸에테르 50 mL를 가한 다음 흔들어 정치하고 물층을 취한다. 이 조작을 2회 반복하여 지방성분을 제거한 다음 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과한 액을 시험용액으로 한다. 다만, 상기 가)～라)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 마) 정제에 따라 시험한다.

마) 정제

여과한 액 ----------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-----.

5) (현행과 같음)

6) 정성시험

------------------------

------------------------

------------------------

------- 사카린나트륨 -----

------------------------

------------------------

------------------------

----.

7) 정량시험

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-- 사카린나트륨 ----------

----.

3.2.2 아세설팜칼륨(acesulfame K), 사카린나트륨 및 아스파탐 동시분석법

가. 분석원리

-------------------------

-------------, 사카린나트륨 및 아스파탐을 물로 추출 후 여과하거나 여과액을 아세설팜칼륨(acesulfame K)과 사카린나트륨

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

---------------------.

나. (현행과 같음)

다. 시약 및 시액

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

1) -----------：사카린나트륨

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------.

2) (현행과 같음)

라. 시험용액의 조제

<삭  제>

1) ∼ 3) (현행 가) ∼ 다)와 같음)

4) 지방 함량이 많은 검체

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------ . 다만, 상기 1)～4)의 조작후에도 정제가 필요한 경우는 5) 정제에 따라 시험한다.

<삭  제>

5) 정제

가) 아세설팜칼륨(acesulfame K) 및 사카린나트륨

여과한 액 ---------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-----------------.

나) -------

여과한 액 ----------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-------------.

마. (현행과 같음)

바. 정성시험

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

--------------, 사카린나트륨

------------------------

------------------------

------------------------

-----------------.

사. 정량시험

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

---------------, 사카린나트륨 -----------------------.

3.3 ∼ 3.6 (현행과 같음)

4. 미생물시험법

4.1. 일반사항

4.1.1 (생  략)

4.1.2 확인시험

가. (생  략)

나. 식중독균 정량검사 시 계수된 집락수가 규격치 이하일 경우 확인시험을 생략할 수 있다.

다. ∼ 라. (생  략)

4.2 ∼ 4.3 (생  략)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

(생  략)

1) ∼ 25) (생  략)

26) Liver 한천배지(Liver agar)

Beef Liver Infusion	20 g

Proteose Peptone	10 g

Sodium Chloride	5 g

Agar	20 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹인 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bactracin(25 units/mL), Vancomycin(20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL), Nalidixic acid (5 ㎍/mL)과 Cloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

27) ∼ 38) (생  략)

39) LPM 한천배지(Lithium Chloride Phenylethanol Moxalactam Agar)

Thyptose	10 g

Beef Extract	3 g

Sodium Chloride	5 g

Lithium Chloride	5 g

Glycine Anhydride	10 g

Phenylethanol	2.5 g

Agar	15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.3±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하고 이를 50℃정도로 식힌 후 Moxalactam 0.02 g을 여과멸균하여 가한다.

40) ∼ 73) (생  략)

4. 미생물시험법

4.1. 일반사항

4.1.1 (현행과 같음)

4.1.2 확인시험

가. (현행과 같음)

나. 대장균, 대장균군, 식중독균 정량검사 시 ---------------

-----------------------

----.

다. ∼ 라. (현행과 같음)

4.2 ∼ 4.3 (현행과 같음)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

(생  략)

1) ∼ 25) (현행과 같음)

26) -----------------------

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Cycloheximide--------- --------.

27) ∼ 38) (현행과 같음)

39) -----------------------

------------------------Tryptose--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

40) ∼ 73) (현행과 같음)

74) mTSB 배지

Peptone from casein	17.0 g

Peptone from soymeal	3.0 g

Sodium chloride	1.5 g

Bile salts No.3	2.5 g

D(+) glucose	2.5 g

Di-potassium hydrogen phosphate	4.0 g

위의 성분을 증류수를 가하여 1,000 mL로 만들고 끓여 녹인 후 15파운드에서 15분간 멸균하고 pH 7.3으로 조정하여 사용한다. 단, O157 검사 시 또는 오염이 심한 검체의 경우, 위의 mTSB 배지(배지 74)를 50℃로 식힌 후, 8 mg/L농도의 여과멸균한 Novobiocin을 첨가하여 사용할 수 있다.

75) ∼ 82) (생  략)

74) ------------------------

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

121℃에서---------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

75) ∼ 82) (현행과 같음)

83) Serum Dextrose 한천배지(Serum Dextrose Agar)

Peptone	10.0 g

Meat extract	5.0 g

Sodium chloride	5.0 g

Agar	20.0 g

위의 성분에 증류수를 가하여 950 mL로 만들고 pH 7.4가 되도록 조정한 다음 시험관에 분주하여 121℃로 15분간 고압증기 멸균한 후 약 50℃의 항온수조에 보관한다. Fetal bovine serum 100 mL내에 Dextrose 20 g을 녹이고 여과하여 제조한 것 50 mL을 배지에 첨가한다. 일반세균의 증식을 억제하기 위하여 배지에 Bacitracin(25 units/mL), Vancomycin (20 ㎍/mL), Polymyxin B(5 units/mL, Nalidixic acid(5 ㎍/mL)과 Cycloheximide(100 ㎍/mL)을 첨가한다.

84) ∼ 88) (생  략)

83) -----------------------

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 다음 121℃로 15분간 -----------

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

-------.

84) ∼ 88) (현행과 같음)

89) RVS 배지(Rappaport-Vassiliadis soya peptone Broth)

Soya peptone	4.5 g

Sodium Chloride	7.2 g

Potassium Dihydrogen Phosphate	1.26 g

Di-potassium Dihydrogen Phosphate	0.18 g

DMagnesium Chloride, Anhydrous	13.58 g

Malachite Green Oxalate      0.036 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정하고 잘 섞어 배지가 녹을 때까지 끓인 후 10 mL씩 분주하여 115℃에서 15분간 멸균한다.

90) ∼ 99) (생  략)

89) -----------------------

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Magnesium Chloride, Anhydrous

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

90) ∼ 99) (현행과 같음)

<신  설>

4.4.2 (생 략)

100) ALOA 한천배지(Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti)

Enzymatic Digest of Animal Tissues	18.0 g

Enzymatic Digest of Casein	6.0 g

Yeast Extract	10.0 g

Sodium Pyruvate	2.0 g

Glucose	2.0 g

Magsesium Glycerophosphate	1.0 g

Magesium Sulfate(anhydrous)	0.5 g

Sodium Chloride	5.0 g

Lithium Chloride	10.0 g

Disodium Hydrogen Phophate

(anhydrous)	2.5 g

5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β

-D-glucopyranoside       0.05 g

Agar                12.0-18.0 g

위 성분을 증류수 930 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 50℃정도로 식히고 다음의 추가성분을 가한다. Supplement ①∼④는 여과 멸균하여  각 5 mL 씩 가하고, Supplement ⑤는 121℃에서 15분간 멸균하여 50mL을 가한다.

ALOA agar Supplement: ① Nalidixic acid solution(0.02 g/5 mL), ② Ceftazidime solution(0.02 g/5 mL), ③ Polymyxin B solution(76700 IU/5 mL), ④ Cycloheximide solution(0.05 g/50% Ethanol 5 mL) ⑤ L-α-phosphatidylinositol solution(2 g/50 mL)

※ ④ Cycloheximide solution 대신 Amphotericin B solution(0.01 g/1M HCl 2.5 mL과 Dimethylformamide 7.5 mL 혼합용액)을 사용할 수 있다. 단, Amphotericin B solution을 사용할 경우 위의 배지 성분을 증류수 925 mL에 녹인다.

4.4.2 (현행과 같음)

4.5 세균수

4.5.1 일반세균수

가. 표준평판법

1) ∼ 3) (생 략)

4) 식육의 세균수 산출방법

소 및 돼지 도체의 경우 균수는 도체 표면적당 집락수(CFU/㎝2)로서 환산되어야 한다. 희석배수 × 10(배지 접종량이 0.1 mL일 경우) × 집락수 × 25(재료 채취 용량)/10 ㎝ × 10 ㎝(1개부위 채취인 경우, 단 3개 부위를 채취할 경우는 300 ㎝2로 나누어 준다)로 산출한다. 닭의 경우는 mL당으로 집락수를 환산한다. 기타 시료는 집락수 × 희석배수로 mL당 또는 g당 세균수를 산출한다.

나. ∼ 다. (생  략)

4.6 (생  략)

4.5 세균수

4.5.1 일반세균수

가. 표준평판법

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 식육의 세균수 산출방법

----------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------40(재료 채취 용량)--------------------  ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.6 (현행과 같음)

4.7 대장균군

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

1) ∼ 2) (생  략)

3) 완전시험

대장균군의 존재를 완전히 증명하기 위하여 위의 평판상의 집락이 그람음성, 무아포성의 간균임을 확인하고, 유당을 분해하여 가스의 발생 여부를 재확인한다. 확정시험의 Endo 한천배지(배지 5)나 EMB한천배지(배지 6)에서 전형적인 집락 1개 또는 비전형적인 집락 2개 이상을 보통한천배지(배지 8)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양한다. 보통한천배지의 집락에 대하여 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정한다.

나. BGLB 배지법

4.3 제조법에 따른 시험용액 1～0.1 mL를 2개씩 BGLB 배지(배지 3)에 가한다. 대량의 시험용액을 가할 필요가 있을 때에는 대량의 배지를 넣은 발효관을 사용한다.

(이하 생략)

다. (생  략)

4.7.2 (생  략)

4.7 대장균군

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 완전시험

확정시험의 Endo 한천배지(배지 5)나 EMB한천배지(배지 6)에서 전형적인 집락 1개 또는 비전형적인 집락 2개 이상을 보통한천배지(배지 8)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양한다.  보통한천배지의 집락에 대하여 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정한다.

나. BGLB 배지법

------------------------

1 mL와 0.1 mL를----------

-----------------------------------------------------------------------------------.

(이하 생략)

다. (현행과 같음)

4.7.2 (현행과 같음)

4.8 대장균

4.8.1 (생  략)

4.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

4.3 제조법에 따른 연속한 3단계 이상의 희석시료(10, 1, 0.1 또는 1, 0.1, 0.01 또는 0.1, 0.01, 0.001)를 각각 5개 또는 3개의 EC 배지(배지 10) 발효관에 접종한 다음 44.5±0.2℃ 항온수조에서 24±2시간 배양한다. 시험용액 10 mL를 첨가할 경우 배농도의 배지 10 mL를 이용한다.

2) (생  략)

3) 유가공품·식육가공품·알가공품

가) 최확수법

최확수법(3개 또는 5개 시험관을 이용한 MPN법)으로 대장균군수 검사에서 사용한 BGLB배지에서 가스생성 양성인 시험관으로부터 EC-MUG배지(또는 BGLB-MUG, LST-MUG)에 접종하여 44.5℃에서 24시간 배양한 후 자외선 조사하에 푸른 형광이 관찰되는 시험관을 대장균 양성으로 판정하고 최확수표 (별표 1 또는 별표 2)에 근거하여 대장균수를 산출한다.

나) (생  략)

나. ∼ 다. (생  략)

4.9 ～ 4.13 (생  략)

4.14 클로스트리디움 퍼프린젠스

4.14.1 (생  략)

4.14.2 정량시험법

가. ∼ 나. (생  략)

다. 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예로 10-4에서 85개의 전형적인 집락이 계수되었고, 이 중 5개의 집락을 확인한 결과 4개의 집락이 클로스트리디움 퍼프린젠스로 동정되었을 경우 85 x (4/5) x 10,000 = 680,000으로 계산한다.

4.8 대장균

4.8.1 (현행과 같음)

4.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

------------------------------------------------

---------------------------------------------------------------------------------- 44±1℃에서 --- ------------------. -----

-------------------- 2배 농도의---------------- ----.

2) (현행과 같음)

3) 유가공품·식육가공품·알가공품

가) 최확수법

------------------------------------------------

------------------------------------------------------------------------------------------------------- 44±1℃에서24±2시간-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

나) (현행과 같음)

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.9 ～ 4.13 (현행과 같음)

4.14 클로스트리디움 퍼프린젠스

4.14.1 (현행과 같음)

4.14.2 정량시험법

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 균수계산

-------------------------

-------------. ---- 10-4에서 평균집락수가 85개이었고, ----

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

----------------.

4.15 리스테리아 모노사이토제네스

가. (생  략)

나. 분리배양

증균배양액을 Oxford 한천배지(배지 38) 또는 LPM 한천배지(배지 39) 또는 PALCAM 한천배지(배지 65)에 접종하여 35∼37℃에서 24∼48시간 배양한다. 의심집락이 확인되면 이를 0.6% yeast extract가 포함된 Tryptic soy 한천배지(배지 40)에 접종하여 30℃에서 24∼48시간 배양한다.

다. (생  략)

4.16 ～ 4.25 (생  략)

4.15 리스테리아 모노사이토제네스

가. (현행과 같음)

나. 분리배양

--------------------------------------------------------PALCAM 한천배지(배지 65) 또는 ALOA 한천배지(배지 100)에 접종하여 ---- --------------------------------------------------------------------------------------------.

다. (현행과 같음)

4.16 ～ 4.25 (현행과 같음)

4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. ∼ 나. (생  략)

<신  설>

<신  설>

4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 장염비브리오 시험법

1) 주형 유전자 준비

증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

2) Real-time PCR 프라이머 염기서열

Target gene	염기서열(5‘→3’)
toxR	Foward	GAA CCA GAA GCG CCA GTA GT
	Reverse	AAA CAG CAG TAC GCA AAT CG
	Probe	FAM-TCA CAG CAG AAG CCA CAG GTG C-TAMRA

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix	1x	2x	12.5 μL
toxR 프라이머(F)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL
toxR 프라이머(R)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL
toxR 프로브(P)	500 nM	10 pmol/μL	1.25 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
증류수	-	-	5.75 μL
총량	-	-	25 μL

4) Real-time PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	95℃	10분	-
변성(Denaturation)	95℃	15초	45
결합(Annealing)	60℃	1분

※ 상기 Real-time PCR 반응액 조성 및 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 장염비브리오 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 장염비브리오로 동정되면 검출로 판정한다.

라. 리스테리아 모노사이토제네스 시험법

1) 주형 유전자 준비

증균 배양액(1~2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

2) Real-time PCR 프라이머 염기서열

Target gene	염기서열(5‘→3’)
iap	Foward	CTA AAG CGG GAA TCT CCC TT
	Reverse	CCA TTG TCT TGC GCG TTA AT
	Probe	FAM-CCT CTG GCG CAC AAT ACG CTA GCA CT- TAMRA

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix	1×	2×	12.5 μL
iap 프라이머(F)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
iap 프라이머(R)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
iap 프로브(P)	300 nM	10 pmole/μL	2.5 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
총량	-	-	25 μL

4) Real-time PCR 반응조건

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	50℃	2분	-
	95℃	10뷴	-
변성(Denaturation)	95℃	15초	40
결합(Annealing)	60℃	1분

※ 상기 Real-time PCR 반응액 조성 및 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 리스테리아 모노사이토제네스 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 리스테리아 모노사이토제네스로 동정되면 검출로 판정한다.

5. 원유·식육·식용란의 시험법

5.1 원유의 시험법

5.1.1 (생  략)

5.1.2 이화학적 시험법

가. (생  략)

나. 시험법

1) ∼ 7) (생  략)

8) 유해성금속 시험법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 --------------------.

9) ∼ 16) (생  략)

5.1.3 ∼ 5.1.4 (생  략)

5.2 (생  략)

5.3 식용란의 시험법

5.3.1 이화학적 시험법

가. (생  략)

나. 시험법

1) ∼ 6) (생  략)

7) 유해성금속 시험법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 --------------------.

5.3.2 ∼ 6.1 (생  략)

5. 원유·식육·식용란의 시험법

5.1 원유의 시험법

5.1.1 (현행과 같음)

5.1.2 이화학적 시험법

가. (현행과 같음)

나. 시험법

1) ∼ 7) (현행과 같음)

8) 유해성금속 시험법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법 ---------------.

9) ∼ 16) (현행과 같음)

5.1.3 ∼ 5.1.4 (현행과 같음)

5.2 (현행과 같음)

5.3 식용란의 시험법

5.3.1 이화학적 시험법

가. (현행과 같음)

나. 시험법

1) ∼ 6) (현행과 같음)

7) 유해성금속 시험법

제8. 일반시험법 9. 식품 중 유해물질 시험법 ---------------.

5.3.2 ∼ 6.1 (현행과 같음)

6.2 당류

6.2.1 올리고당

가. ∼ 라. (생  략)

마. 말토올리고당

1) 장치

고속액체크로마토그래프

2) 시약

(가) 50% 알코올

(나) 활성탄∶청주용 또는 당액 탈색용

(다) 이온교환수지∶강 산성형(H형) 및 강 알칼리형(OH형)

(라) 퍼라이트(Perlite)

(마) 물∶HPLC용

(바) 표준당

삼당류(DP3)—Maltotriose

사당류(DP4)—Maltotetraose

오당류(DP5)—Maltopentaose

육당류(DP6)—Maltohexaose

칠당류(DP7)—Maltoheptaose

3) 표준용액의 제조

각 중합도의 직쇄당을 정확하게 50 mg씩 달아 탈기한 증류수 50 mL에 녹이고, 용해되기 어려울 때는 가온하여 녹이고 냉각후 증류수로 100 mL로 채워 표준용액으로 한다.

4) 시험용액 조제

(가) 유지를 거의 함유하지 않은 검체의 경우

시료 4 g을 정확히 달아 여기에 물 또는 50% 알코올(단백질을 함유한 경우)을 30 mL 넣어서 가열하여 용해, 혹은 추출한다. 추출액은 약 0.5 g의 활성탄과 이온교환수지(양이온 및 음이온을 1∶2로 혼합한 것 약 1.5 g)을 사용하여 정제하고, 전량을 100 mL로 하여 시험용액으로 한다.

(나) 유지를 많이 함유한 검체인 경우

시료 4 g을 정확히 달아 분말인 경우에는 그대로 추출기에 넣고, 시료가 액체인 경우에는 필요하다면(pH 4~10이외) 중화하고 나서 퍼라이트를 부석부석하게 될 때까지 넣어서 잘 분산시켜 8~16시간 탈지한다. 탈지후 원통여과지 안의 전량을 꺼내어 위의 (가)와 같이 추출이후의 조작을 한다.

주1. 중합도 2~5와 거의 같은 분자량인 설탕, 유당, 프락토올리고당, Coupling sugar 및 갈락토올리고당이 혼재할 경우에는 각각의 측정법으로 따로 분석한다. 그러나 이성화당, 포도당, 물엿 등의 전분당이 혼재할 경우에는 말토올리고당의 분석을 방해하지 않는다.

5) 시험조작

(가) 고속액체크로마토그래피 조건

—칼럼∶Aminex HP×42A(Bio Rad) 또는 이에 상응하는 배제형 이온교환계

— 칼럼온도∶85℃

— 이동상∶물

— 유속∶0.6 mL/min

— 검출기∶시차굴절계(RI)

(나) 검량선 작성

각 농도의 표준용액을 10 μL 씩 주입하여 분석한 뒤 횡축이 말토올리고당량(mg), 종축에 크로마토그램의 면적을 취하여 검량선을 작성한다.

<신  설>

<신  설>

(다) 계산

시료의 말토올리고당의 면적을 읽어 검량선으로부터 시료의 말토올리고당 함량을 구한다.

말토올리고당 함량(%) ＝[eqn: rm {(A＋B＋C＋D＋E)~mɡ} over {시료채취량(mɡ)}]× 희석배수

DP3    Maltotriose      A mg

DP4    Maltotetraose    B mg

DP5    Maltopentaose   C mg

DP6    Maltohexaose    D mg

DP7    Maltoheptaose   E mg

6.2.2 ∼ 6.14 (생  략)

6.2 당류

6.2.1 올리고당

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 말토올리고당

1) 장치

액체크로마토그래프-시차굴절검출기(refractive index detector, RI)

2) 시약

가) 67% 아세토니트릴(Acetonitrile)

나) 물: HPLC용

다) 표준당

삼당류(DP3)-Maltotriose

사당류(DP4)-Maltotetraose

오당류(DP5)-Maltopentaose

육당류(DP6)-Maltohexaose

칠당류(DP7)-Maltoheptaose

팔당류(DP8)-Maltooctaose

구당류(DP9)-Maltononaose

십당류(DP10)-Maltodecaose

3) 표준용액의 조제

각 중합도(중합도 3∼7은 500 mg씩, 중합도 8∼10은 50 mg씩)의 말토올리고당을 정확하게 달아 증류수 20 mL로 녹이고 이동상으로 50 mL로 정용하여 표준원액으로 한다. 중합도 3∼7은 625∼10,000 μg/mL, 중합도 8∼10은 62.5∼1,000 μg/mL가 되도록 이동상으로 용해하여 표준용액으로 사용한다.

4) 시험용액의 조제

시료 4 g을 달아 증류수 20 mL로 녹이고 이동상으로 100 mL 정용한다. 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

5) 시험방법

가) 고속액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼: Shodex HILICpak VN-50 4D 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도: 30℃

(3) 이동상: 67% 아세토니트릴

(4) 유속: 0.3 mL/min

(5) 검출기: 시차굴절계(RI)

<삭 제>

6) 정성시험

위의 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 어느 측정조건에서도 시험용액과 표준용액 피크의 머무름 시간이 일치하여야 한다.

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 5 μL 씩 주입하여 얻은 표준용액 피크면적 또는 높이를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 말토올리고당 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검체 중 말토올리고당의 함량(%)을 계산한다. 다만, DP3 ∼ DP7의 함량이 40%이상인 경우, DP8 ∼ DP10의 시험은 생략할 수 있다.

가) 계산방법

말토올리고당 함량(%) = [eqn: {(A+B+C+D+E+F+G+H)} over {시료채취량`(g)}]˟a˟ b ˟ [eqn: {100} over {1,000,000}]

DP3  Maltotriose      A(μg/mL)

DP4  Maltotetraose     B(μg/mL)

DP5  Maltopentaose    C(μg/mL)

DP6  Maltohexaose     D(μg/mL)

DP7  Maltoheptaose  E(μg/mL)

DP8   Maltooctaose    F(μg/mL)

DP9   Maltononaose   G(μg/mL)

DP10  Maltodecaose   H(μg/mL)

a : 시험용액의 전량(mL)

b : 시험용액의 희석배수

6.2.2 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.2 (생   략)

7.3 축산물의 잔류농약

7.3.1 (생   략)

7.3.2 단성분 분석법

7.3.2.1 ∼ 7.3.2.28 (생   략)

<신  설>

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.2 (생   략)

7.3 축산물의 잔류농약

7.3.1 (현행과 같음)

7.3.2 단성분 분석법

7.3.1.1 ∼ 7.3.2.28 (현행과 같음)

7.3.2.29 에톡시퀸(Ethoxyquin)

가. 시험법 적용범위

수산물 등에 적용한다.

나. 분석원리

시료 중의 에톡시퀸과 에톡시퀸 다이머를 아세토니트릴로 추출하고 QuEChERS시약을 이용하여 지방을 제거한 다음,  PSA, C18 MgSO4로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각각의 표준품을 정밀히 달아 메탄올(에톡시퀸) 또는 아세토니트릴(에톡시퀸 다이머)에 녹여 100 μg/mL이 되게 한다.

4) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액을 100 mg/L 농도로부터 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

5) 10 mM 개미산 암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

6) 아스코르브산 및 아스코르브산 나트륨 혼합용액(AA혼합용액) : 100 mL 용량플라스크에 아스코르브산 7.5 g과 아스코르브산 나트륨 7.5 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

7) QuEChERS시약 : QuEChERS pouch (Sodium citrate 1 g, NaCl 1 g, MgSO4 4 g, Sodium sesquihydrate 0.5 g) 또는 이와 동등한 것

8) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

각각의 시료를 균질화하여 2 g 을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 시험관에 취하고 AA혼합용액 500 μL를 첨가하여 가볍게 진탕한다. 물 5 mL와 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 진탕한 다음 QuEChERS 시약 6.5 g을 넣어 1분간 진탕한 후 4,700 G, 4℃ 에서 5분간 원심분리 한다. 상층액을 150 mg PSA, 150 mg C18과 900 mg MgSO4가 담겨진 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 1분간 진탕하고 4,700 G, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 원심분리한 상층액 1 mL를 취하여 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼 : C18(Capcell Core, 2.1 × 150 mm, 2.7 µm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 10 mM 개미산 암모늄 용액

(2) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	40	60
1	40	60
8	0	100
9	0	100
9.5	40	60
12	40	60

라) 이동상 유속 : 0.3 mL/분

마) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화방법 : ESI positive-ion mode

나) Capillary temperature : 350℃

다) Collision gas : 아르곤(Ar)

라) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (Retention time, min)	분자량 (Molecula weight)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
에톡시퀸 (Ethoxyquin)	3.62	217	218	148	20
				134	20
				176	18
에톡시퀸 다이머 (Ethoxyquin dimer)	8.92	432	433	216	25
				188	35
				375	29

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

사. 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율이 허용범위(± 20∼30%) 이내에서 일치하여야 한다주1). 확인시험의 경우, 음성대조시료(Negative control sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

1) 표준품 크로마토그램

그림 1. 에톡시퀸 표준품(3.62분, 0.01 mg/L)의 크로마토그램

그림 2. 에톡시퀸 다이머 표준품(8.92분, 0.01 mg/L)의 크로마토그램

아. 정량시험

1) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당물질이 검출되지 않은 음성대조시료(Negative control sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

2) 정량한계

에톡시퀸(Ethoxyquin) : 0.01 mg/kg

에톡시퀸 다이머(Ethoxyquin dimer) : 0.01 mg/kg

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 ∼ 8.2 (생   략)

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.8 (생   략)

8.3.9 도라멕틴(Doramectin), 아바멕틴(Abamectin), 에프리노멕틴(Eprinomectin), 이버멕틴(Ivermectin)

1) (생   략)

2) 분석원리

검체 중의 도라멕틴, 아바멕틴, 에프리노멕틴, 이버멕틴을 아세토니트릴로 추출하며, 유(乳)의 경우는 수산화나트륨으로 가수분해 후 추출한다. 추출액은 냉동하여 지방을 제거한 후 SPE(Solid Phase Extraction) 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 분석한다. 또한 이들의 정량은 각각 지표물질 (Marker residue)인 도라멕틴, 아버멕틴(avermectin) B1a, 에프리노멕틴 B1a 및 22, 23-디히드로 아버멕틴 B1a로 한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 나) (생   략)

다) 표준원액 : 도라멕틴, 아바멕틴, 에프리노멕틴 및 이버멕틴 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다. 조제된 표준원액은 냉장 보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 메탄올로 희석하여 사용한다.

마) 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) : 500 mL 메스플라스크에 제이인산나트륨(Na2HPO4․H2O) 5.11 g과 제일인산나트륨(NaH2PO4․H2O) 1.68 g을 달아 증류수로 녹여 표시선까지 채운다.

바) 아미노(NH2) 카트리지(500 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 0.2 M 인산완충용액(pH 7.2) 3 mL를 가한 후 30초간 균질화 하고 1 N 수산화나트륨 120 μL를 가한 후 30초간 균질화 한다. 이 용액에 아세토니트릴 6 mL를 넣고 강하게 균질화 하여 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 4 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알(卵)

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가한 후 강하게 균질화 한다. 이 균질화한 용액을 5분간 초음파추출하고 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 6 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유(乳), 알(卵) 외 식품

균질화 한 검체 2 g을 15 mL 원심 분리관에 취하고 아세토니트릴 6 mL를 가한 후 강하게 균질화 한다. 이 균질화한 용액을 2,000 G에서 5분간 원심분리 한 후 -20℃에서 30분간 방치한다. 상층액 6 mL를 유리시험관에 옮긴 후 50℃에서 질소농축하고 잔류물을 헥산 3 mL에 녹여 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL와 헥산 5 mL로 활성화시킨 아미노 카트리지에 추출액을 흡착시키고 헥산 5 mL로 4회 세척한 후, 아세톤 6 mL로 용출한다. 용출액은 40℃에서 질소농축한 후 잔류물은 이동상 0.1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

<신   설>

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼 : C18(2.1 × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 25℃

(3) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산, 5% 아세토니트릴 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산, 95% 아세토니트릴 수용액

시간(분)	A (%)	B (%)
0.0	45	55
20.0	20	80
21.0	45	55
30.0	45	55

(4) 유속 : 0.2 mL/분

<신    설>

(5) 주입량 : 20 μL

(6) 측정파장 : 245 nm

<신    설>

<신    설>

<신    설>

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각각의 피크 머무름 시간을 비교하여 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 도라멕틴, 아바멕틴, 에프리노멕틴 및 이버멕틴 함량을 각각 구한다.

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 ∼ 8.2 (현행과 같음)

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.8 (생   략)

8.3.9 도라멕틴(Doramectin), 아바멕틴(Abamectin), 에프리노멕틴(Eprinomectin), 이버멕틴(Ivermectin)

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(5:1, v/v)으로 추출하고 황산마그네슘과 C18 분말, PSA(Primary secondary amine)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 나) (현행과 같음)

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다..

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 20 mM 개미산 암모늄 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

<삭   제>

바) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

<삭   제>

<삭   제>

<삭   제>

가) 소고기, 가금류고기, 알

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg와 C18 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 돼지고기

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg와 PSA(Primary secondary amine) 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

다) 유

균질화한 검체 10 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 물 2 mL와 아세토니트릴용액 10 mL를 가하여 1분간 진탕하여 혼합한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가하여 5분간 진탕한 후 -4℃에서 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 황산마그네슘 150 mg, PSA(Primary secondary amine) 50 mg, C18 50 mg을 미리 넣어 둔 15 mL 원심분리관에 상층액 1 mL를 합한 후 5분간 진탕하여 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 이 용액을 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

<삭    제>

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 20 mM 개미산암모늄용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	70	30
1.0	70	30
2.5	5	95
8.0	5	95

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃
(5) 주입량 : 5 μL

<삭    제>

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 3.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	첨가 생성 이온	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	도라멕틴 (Doramectin)	5.4	[M+NH4]+	899.1	916.5	219.2	26
						331.2	26
						593.3	14
2	아바멕틴 B1a (Abamectin B1a)	5.1	[M+NH4]+	873.1	890.5	305.2	22
						567.3	10
						711.4	8
3	에프리노멕틴 B1a (Eprinomectin B1a)	4.7	[M+H]+	914.1	914.6	154.1	20
						186.1	16
						330.2	10
4	이버멕틴 B1a (Ivermectin B1a)	6.2	[M+NH4]+	875.1	892.5	307.2	24
						569.3	12
						713.5	10

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

가) 표준품 크로마토그램

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(1) 도라멕틴(5.4분)

(2) 아바멕틴 B1a(5.1분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(3) 에프리노멕틴 B1a(4.7분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

(4) 이버멕틴 B1a(6.1분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 10 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

도라멕틴 : 0.005 mg/kg

아바멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

에프리노멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

이버멕틴 B1a : 0.005 mg/kg

8.3.10 ∼ 8.3.25 (생   략)

8.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G),아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 옥사실린(Oxacillin), 페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) ∼ 8) (생   략)

8.3.10 ∼ 8.3.25 (현행과 같음)

8.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G),아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 옥사실린(Oxacillin), 페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.27 ∼ 8.3.40 (생   략)

8.3.41 이소메타미디움(Isometamidium)

1) 시험법 적용범위
축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리
검체를 효소적으로 가수분해하고 고체상으로 정제한 후 헵탄설포네이트(heptane sulfonate)를 이온쌍으로 트리에틸아민을 반대 이온 시약(counter-ion reagent)으로 사용하여 이온쌍 역상 액체크로마토그래프/형광검출기로 측정한다.

3) 장치
액체크로마토그래프/형광검출기(Fluorescence detector)

4) 시약 및 시액

<신   설>

<신   설>

<신   설>

가) 표준용액：이소메타미디움 10 mg을 정확히 달아 물에 용해한 후 희석하여 100 μg/mL 농도가 되도록 한다.

나) 추출칼럼：C8 (1 mL) 칼럼 또는 이와 동등한 것

<신   설>

<신   설>

<신   설>

다) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 유(乳)
검체 4 mL에 붕산완충용액(pH 8.0) 6 mL를 가하여 희석한 후 Subtilisin Carlsberg 4 mg 넣고 37℃에서 1시간 동안 수시로 흔들어 주면서 반응시킨다. 미리 메탄올 1 mL와 물 1 mL를 가하여 준비한 C8 칼럼에 검체를 넣는다. 칼럼을 물 1 mL, 50% 메탄올 1 mL를 차례로 통과시키고 메탄올：0.1 M 헵탄설포네이트：트리에틸아민 용액(92：8：0.1, pH 7.5) 0.5 mL로 용출한 후 용출액을 가볍게 혼합하고 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 유(乳)를 제외한 축산물
1.0 g 검체에 10 mL 붕산완충용액(pH 8.0)을 넣고 균질화한다. 균질물 중 5 mL을 취하여 5 mg의 Subtilisin carlsberg를 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시킨다. 유리솜을 이용해 여과한 후 여과액 4 mL을 추출칼럼(C8 Bond Elut 1 mL)을 통과시킨다. 이때 통과시키기 전 칼럼은 1 mL 메탄올, 1 mL 물을 미리 흘려주고, 검체 통과 후에는 1 mL 물, 1 mL 50% 메탄올 용액으로 씻어준다. 검체는 0.5 mL 메탄올：0.1 M 헵탄설포네이트(heptane sulfonate)：트리에틸아민(triethylamine)(92:8:0.1)으로 용출한 후 용출액을 가볍게 혼합하고 여과하여 시험용액으로 한다.

<신    설>

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 분석칼럼：ODS-Hypersil(5 mm ×160 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：메탄올：0.1 M 헵탄설포네이트：트리에틸아민(80：20：0.14), pH 6.6

(3) 유속：1.2 mL/분

(4) 측정파장：여기파장 380 nm, 형광파장 593 nm

<신   설>

<신   설>

<신   설>

7) 정량시험
시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 이소메타미디움의 함량을 구한다.

8.3.42 ∼ 8.3.120 (생   략)

8.3.27 ∼ 8.3.40 (현행과 같음)

8.3.41 이소메타미디움(Isometamidium)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 -----------.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 염화나트륨, 개미산 암모늄과 아세토니트릴로 추출하고 무수황산마그네슘(MgSO4), PSA(Primary secondary amine)와 C18 분말로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

<삭   제>

마) 1 M 염화나트륨(Sodium chloride) 용액 : 100 mL 용량플라스크에 염화나트륨 5.84 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 200 mM 개미산암모늄(Ammonium formate) 용액 : 100 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.3% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 초산암모늄 0.771 g을 넣어 100 mL 물에 녹이고, 초산 3 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

<삭   제>

가) 알

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 1 M 염화나트륨 용액을 1 mL 첨가한 후 1분간 진탕하여 혼합한다. 200 mM 개미산암모늄 용액 0.2 mL와 물 2 mL를 가하여 1분간 진탕한 뒤 아세토니트릴 10 mL를 가하여 10분 간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 900 mg 무수황산마그네슘(MgSO4)과 150 mg PSA(Primary secondary amine) 분말을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮긴다. 10분간 진탕하고 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50℃ 수욕상에서 약 4 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 알을 제외한 식품

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 1 M 염화나트륨 용액을 1 mL 첨가한 후 1분간 진탕하여 혼합한다. 200 mM 개미산암모늄 용액 0.2 mL와 물 2 mL를 가하여 1분간 진탕한 뒤 아세토니트릴 10 mL를 가하여 10분 간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 900 mg 무수황산마그네슘(MgSO4), 150 mg PSA(Primary secondary amine)와 150 mg C18 분말을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮긴다. 10분간 진탕하고 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 50℃ 수욕상에서 약 4 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(Nylon membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.3% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 메탄올과 아세토니트릴(8:2 v/v) 혼합액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4.0	5	95
8.0	5	95
8.1	90	10
10	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

<삭    제>

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 1.0 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	첨가 생성 이온	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
이소메타미디움 (Isometamidium)	4.8	[M]+	460.6	460.3	269.2	50
					298.2	22
					313.2	18

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험이 필요한 경우, 반드시 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 이소메타미디움(4.8분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

이소메타미디움 : 0.01 mg/kg

8.3.42 ∼ 8.3.120 (현행과 같음)

9. 식품 중 유해물질

9.1 ∼ 9.7 (생략)

9.8 패독소

9.8.1 (생략)

9.8.2 마비성 패독

가. (생  략)

나. 분석원리
균질화한 검체를 0.1 N 염산으로 가온 추출한 추출액의 상층액을 시험원액으로 하여 마우스에 주입하고 치사시간으로부터 독량을 계산한다.

다. 장치

1) 정제용 유리칼럼 : 크로마토그래피용 활성탄(100 mesh) 50 mL를 안지름 20 mm의 유리칼럼에 충전하여 사용한다.

2) (생  략)

라. 시약 및 시액

1) 물 : 2차 증류수 및 이와 동등한 것

2) 표준원액 : 삭시톡신(100 μg/mL) 1 mL을 3.0 mM 염산을 가하여 100 mL 로 한다(1 μg/mL)

3) 1% 초산 함유 20% 에탄올용액 : 1 L 메스플라스크에 에탄올 200 mL를 넣고 물 500 mL를 섞은 후 초산 1 mL를 넣고 표시선까지 물로 채운다.

4) (생  략)

5) (생  략)

6) 0.01N 염산 : 1N 염산을 물로 10배 용량으로 희석하거나 물 100 mL에 염산 0.475 mL을 가하고 물을 가해 500 mL로 한다.

<신  설>

7) 0.1N 수산화나트륨용액 : 수산화나트륨 0.45 g을 물을 가하여 녹인후 100 mL로 한다.

8) 기타 시약 : 특급

마. 시험용액의 조제

1) 검체의 손질

가) 패류, 피낭류
패류 및 피낭류의 외부를 물로 깨끗이 씻고 10개체 이상 또는 껍질을 제거한 육이 200 g 이상이 되도록 손질 한다.(패류의 경우 껍데기를 열고 내부의 모래나 이물질을 제거하기 위해 물로 씻은 후 칼로 패육을 취한다.) 이때 가열하거나 약품을 사용해서는 아니 된다. 육 전량을 표준체(20 mesh)에 얹어 5분 동안 물을 뺀 후 균질기로 균질화한다.

나) (생  략)

다) (생  략)

2) 추출

가) 패류, 피낭류, 패류 및 피낭류 통조림
균질화한 검체 100 g을 비커에 달아 0.1 N 염산 100 mL를 가하고 교반하면서 5 N 염산이나 0.1 N 수산화나트륨용액으로 pH를 3.0으로 조정한다. 강염기성이 되면 독이 파괴되   기 때문에 0.1 N 수산화나트륨용액으로 pH을 조정할 때에는 부분적인 파괴를 방지하기 위하여 격렬히 교반하면서 소량씩 적가한다. 혼합액을 5분간 끓이고 실온에서 식힌 후, pH가 3.0이 되도록 조정하고 물을 가하여 200 mL이 되게 한다. 비커에 옮긴 후 교반하고 상층부가 투명해질 때까지 정치하여 상층액을 시험용액으로 한다.

나) (생 략)

바. 시험조작(마우스 시험)

1) (생 략)

2) 시험
시험용액 1 mL을 2마리의 마우스 복강 내에 주사하고 주사 후부터 사망까지의 시간을 초단위로 기록한다. 사망 시에는 3마리 이상의 마우스를 취하여 복강 내에 주사하여 반수치사시간(50% lethal time, LT50)을 구한다. 다만, 마우스가 5분 이내에 사망한 경우 5～7분 정도에서 사망하도록 희석하여 반수치사시간(50% lethal time, LT50)을 구한다. 희석시에는 0.1N 또는 0.01N 염산으로 pH 2.0～4.0 되게 조정하여 사용한다.

사. 계산

1) CF값 산출
표준용액 10 mL에 물을 10, 15, 20, 25 및 30 mL을 각각 가하여 희석한 용액(이 액은 pH가 2.0～4.0이어야하며,   4.5를 넘어서는 안된다) 1 mL씩을 각각 1마리 마우스에 복강 내 주사하고 주사 후부터 사망까지의 시간을 초단위로 기록하여 치사시간이 5～7분 사이가 되는 용액의 농도를 선택한다. 선택한 농도에 첨가되는 물의 양을 1 mL씩 증감하여 세농도의 희석한 액을 제조한다(표준용액 10 mL에 물 25 mL로 희석한 액이 선택된 경우, 표준용액 10 mL에 물 24 mL, 25 mL 및 물 26 mL을 각각 가하여 제조한다)

이 세농도로 희석한 액 1 mL 씩을 각각 10마리 마우스 시험군에 복강 내 주사하여 치사시간이 5～7분인 시험군의 반수치사시간(50% lethal time, LT50)을 구한다. 만약 10마리 마우스중 치사시간이 5～7분 내에 들지 않는 마우스가 몇 마리 있더라도 10마리 시험군의 반수치사시간(50% lethal time, LT50)이 5～7분에 들 경우에는 이를 반수치사시간(50% lethal time, LT50)으로 한다. 반수치사시간(50% lethal time, LT50)으로부터 표 1에서 1 mL당 MU(Mouse Unit)를 구하고 CF값(1 MU당 μg독력)은 다음식에 의해 계산한다.

CF값(1 MU당 μg독력) = 희석표준용액의 농도(1 mL당 μg독력)/1mL 당 MU

2) CF값을 이용한 독력 계산
시험용액을 주사하고 살아남은 것을 포함한 각 마우스의 치사시간으로부터 표 1에서 1 mL 당 MU를 구하고, 만일 마우스가 19 g이하 혹은 21 g이상이면 표 2에서 각 마우스체중에 대한 MU를 보정한 후 중앙값을 구한다

(중앙값을 구할 때 60분 이상 살아있는 마우스의 치사시간에 대한 MU는 0.875이하로 간주).

CF값(1 MU당 μg독력)에 마우스체중을 보정한 1 mL당 MU의 중앙값을 곱하여 1 mL당 μg 독력으로 환산하고 다음 식에 의해 검체 중의 독력을 구한다.

독력(μg/100 g) ＝ CF 값 × 치사시간 및 체중보정에 의한 MU × 200 / S

S : 검체의 채취량 (kg)

표 1. 마비성 패독의 치사시간-MU 환산표(So mmer 표)

표 2. 마우스체중-독량 보정표

주1) 마비성 패독이 함유된 재료를 조작시에는 고무장갑을 사용할 것

9.8.3 ∼ 9.17 (생  략)

9. 식품 중 유해물질 시험법

9.1 ∼ 9.7 (현행과 같음)

9.8 (현행과 같음)

9.8.1 (현행과 같음)

9.8.2 마비성 패독

가. (현행과 같음)

나. (현행과 같음)
------------------------------------뒤 상층액을 마우스 복강 내에 주사하여 그 치사시간으로부터 MU (Mouse Unit)*를 구한 후 이를 마비성 패독으로 환산한다.

* MU(Mouse Unit): 체중이 20 g인 마우스를 15분에 사망에 이르게 하는 독량을 1 MU로 정의한다.

다. 장치

1) 정제용 칼럼 :------------ ----------------------------------------------------------------사용하거나 또는 이와 동등한 것을 사용할 수 있다.

2) (현행과 같음)

라. (현행과 같음)

1) (현행과 같음)

2) 표준용액 : 삭시톡신 표준물질에 3.0 mM 염산을 가하여 1 μg/mL 농도가 되도록 조제한다.

3) ------------------------ -------------------------------------------------------초산 10 mL---------- -----------------.

4) (현행과 같음)

5) (현행과 같음)

6) 0.01 N 염산 : 0.1 N 염산---- ------------------------- -------------------------------------------------.

7) 3 mM 염산 : 물 50 mL에 0.1 N 염산 3 mL를 가하고 물을 가해 100 mL로 한다.

8)-------------------------------0.40 --------------- ---------.

9) (현행과 같음)

마. (현행과 같음)

1) (현행과 같음)

가) 패류, 피낭류
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 패각을--------  ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

나) (현행과 같음)

다) (현행과 같음)

2) 추출

가) --------------------- ----
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 한다. 만약, 필요하면 원심분리(예: 1,200 G에서 5분간)하여 얻은 상층액을 시험용액으로 사용하여도 된다.

나) (현행과 같음)

바. 시험조작(마우스 시험)

1) (생 략)

2) 시험
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 치사시간을 구한다.------------------- ------------------------------------------------------------------------치사시간을 구한다.---------------- --------------------------------------------------------.

사. 계산

1) CF(Conversion Factor) 산출
---------- 3.0 mM 염산을---- -------------------------- --------------------------------------------------------------------3마리--- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------선택된--------------

--- 3.0 mM 염산의----------- ------------희석표준용액을----- ----------------3.0 mM 염산 25 mL -----------------------------

------------------3.0 mM 염산 24 mL, 25 mL 및 26 mL을---- -----

이 세 농도의 희석표준용액 1 mL-- ------------의 마우스 복강 내에 주사하여 치사시간을 구한다. 표 1에 의한 치사시간에 따른 MU와 표 2에 의한 마우스의 체중에 따른 MU를 곱한 보정된 MU들을 구하고, 이 보정된 MU들의 중앙값을 희석표준용액의 MU로 한다.

CF는 각 희석표준용액의 CF를 평균하여 구한다.

[eqn: CF= {희석표준용액의```농도(ug/mL)} over {MU U}]

2) CF를 이용한 마비성 패독 계산
시험용액 1 mL를 마우스에 주사하고---------------------------------------------------- MU를 구하고, 표 2에서 각 마우스체중에 대한 MU를 보정한 후 중앙값을 구한다. --------------

---------------------------------------------------------------------------------

----------------------.

CF에-------------------- ----------------------------------------  μg 의 마비성 패독 -------------------------

--------마비성 패독------.

마비성 패독(mg/kg) = CF × 치사시간 및 체중보정에 의한 MU × 최종부피(mL) × 희석배수 / 검체량(g)

표 1. 마비성 패독의 치사시간-MU 환산표(Sommer 표)

치사 시간 (분:초)	MU	치사 시간 (분:초)	MU	치사 시간 (분:초)	MU
1:00	100.0	4:00	2.500	5:25	1.770
1:10	66.20	4:05	2.440	5:26	1.764
1:15	38.30	4:10	2.380	5:27	1.758
1:20	26.40	4:15	2.320	5:28	1.752
1:25	20.70	4:20	2.260	5:29	1.746
1:30	16.50	4:25	2.210	5:30	1.740
1:35	13.90	4:30	2.160	5:31	1.735
1:40	11.90	4:35	2.120	5:32	1.730
1:45	10.40	4:40	2.080	5:33	1.725
1:50	9.330	4:45	2.040	5:34	1.720
1:55	8.420	4:50	2.000	5:35	1.715
		4:55	1.960	5:36	1.710
2:00	7.670			5:37	1.705
2:05	7.040	5:00	1.920	5:38	1.700
2:10	6.520	5:01	1.914	5:39	1.695
2:15	6.060	5:02	1.908	5:40	1.690
2:20	5.660	5:03	1.902	5:41	1.686
2:25	5.320	5:04	1.896	5:42	1.682
2:30	5.000	5:05	1.890	5:43	1.678
2:35	4.730	5:06	1.884	5:44	1.674
2:40	4.480	5:07	1.878	5:45	1.670
2:45	4.260	5:08	1.872	5:46	1.664
2:50	4.060	5:09	1.866	5:47	1.658
2:55	3.880	5:10	1.860	5:48	1.652
		5:11	1.854	5:49	1.646
3:00	3.700	5:12	1.848	5:50	1.640
3:05	3.570	5:13	1.842	5:51	1.636
3:10	3.430	5:14	1.836	5:52	1.632
3:15	3.310	5:15	1.830	5:53	1.628
3:20	3.190	5:16	1.824	5:54	1.624
3:25	3.080	5:17	1.818	5:55	1.620
3:30	2.980	5:18	1.812	5:56	1.616
3:35	2.880	5:19	1.806	5:57	1.612
3:40	2.790	5:20	1.800	5:58	1.608
3:45	2.710	5:21	1.794	5:59	1.604
3:50	2.630	5:22	1.788
3:55	2.560	5:23	1.782	6:00	1.600
		5:24	1.776	6:01	1.596

치사 시간 (분:초)	MU	치사 시간 (분:초)	MU	치사 시간 (분:초)	MU
6:02	1.592	6:39	1.450	11:00	1.075
6:03	1.588	6:40	1.447	11:30	1.060
6:04	1.584	6:41	1.443
6:05	1.580	6:42	1.440	12:00	1.050
6:06	1.576	6:43	1.437
6:07	1.572	6:44	1.433	13:00	1.030
6:08	1.568	6:45	1.430
6:09	1.564	6:46	1.427	14:00	1.015
6:10	1.560	6:47	1.425
6:11	1.556	6:48	1.422	15:00	1.000
6:12	1.552	6:49	1.419
6:13	1.548	6:50	1.417	16:00	0.990
6:14	1.544	6:51	1.414
6:15	1.540	6:52	1.411	17:00	0.980
6:16	1.536	6:53	1.409
6:17	1.532	6:54	1.406	18:00	0.972
6:18	1.528	6:55	1.403
6:19	1.524	6:56	1.401	19:00	0.965
6:20	1.520	6:57	1.398
6:21	1.516	6:58	1.395	20:00	0.960
6:22	1.512	6:59	1.393
6:23	1.508			21:00	0.954
6:24	1.504	7:00	1.390
6:25	1.500	7:15	1.350	22:00	0.948
6:26	1.496	7:30	1.310
6:27	1.492	7:45	1.280	23:00	0.942
6:28	1.488
6:29	1.484	8:00	1.250	24:00	0.937
6:30	1.480	8:15	1.220
6:31	1.477	8:30	1.200	25:00	0.934
6:32	1.473	8:45	1.180
6:33	1.470			30:00	0.917
6:34	1.467	9:00	1.160
6:35	1.463	9:30	1.130	40:00	0.898
6:36	1.460
6:37	1.457	10:00	1.110	60:00	0.875
6:38	1.453	10:30	1.090

표 2. 마우스체중-MU 보정표

마우스 체중(g)	MU	마우스 체중(g)	MU
10.00	0.500	19.10	0.973
11.00	0.560	19.20	0.976
12.00	0.620	19.30	0.979
13.00	0.675	19.40	0.982
14.00	0.730	19.50	0.985
14.50	0.760	19.60	0.988
15.00	0.785	19.70	0.991
15.50	0.810	19.80	0.994
16.00	0.840	19.90	0.997
16.50	0.860	20.00	1.000
17.00	0.880	20.10	1.003
17.10	0.885	20.20	1.006
17.20	0.890	20.30	1.009
17.30	0.895	20.40	1.012
17.40	0.900	20.50	1.015
17.50	0.905	20.60	1.018
17.60	0.910	20.70	1.021
17.70	0.915	20.80	1.024
17.80	0.920	20.90	1.027
17.90	0.925	21.00	1.030
18.00	0.930	21.10	1.032
18.10	0.934	21.20	1.034
18.20	0.938	21.30	1.036
18.30	0.942	21.40	1.038
18.40	0.946	21.50	1.040
18.50	0.950	21.60	1.042
18.60	0.954	21.70	1.044
18.70	0.958	21.80	1.046
18.80	0.962	21.90	1.048
18.90	0.966	22.00	1.050
19.00	0.970	23.00	1.070

주1) (현행과 같음)

9.8.3 ∼ 9.17 (현행과 같음)

<신  설>

9.18 포몹신 A(Phomopsin A) 시험법

가. 시험법의 적용범위

루핀콩 및 루핀 가공품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)용액으로 추출하고 원심분리 한 후 상층액을 증류수로 희석한 다음 막여과지로 여과한 여액을 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 용량플라스크에 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 메탄올에 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

5) 추출 용액 : 아세토니트릴 80 mL, 증류수 19 mL, 초산 1 mL을 넣고 혼합하여 추출 용액으로 사용한다.

6) 5 mM 개미산암모늄 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 315.3 mg을 넣고 정제수로 표시선까지 채운다.

7) 5 mM 개미산암모늄 95% 메탄올 용액 : 개미산암모늄 315.3 mg을 넣고 메탄올 950 mL, 정제수 50 mL을 혼합하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 추출용액(아세토니트릴/증류수/초산(80:19:1, v/v/v)) 20 mL을 가하여 60분간 진탕한 후, 상온에서 3,500 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 증류수와 1:1(v/v) 비율로 희석한다. 막여과지(PTFE filter 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : C18 (Atlantis T3, 3 mm ｘ 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 5 mM 개미산암모늄용액

(2) 이동상 B : 5 mM 개미산암모늄 95% 메탄올용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
1	90	10
9	0	100
11	0	100
11.1	90	10
15	90	10

다) 유속 : 0.4 mL/min

라) 칼럼온도 : 35℃

마) 주입량 : 10 μL

2) 질량분석기 조건

가) Ionization : ESI (Positive)

나) Collision gas : N2(질소)

다) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석 성분 (Compound)	분자량 (M.W.)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
포몹신 A (Phomopsin A)	789.236	789.2	323.1	35
			226.1	47

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 표준품 크로마토그램

포몹신 A (6.65분)

그림 1. 포몹신 A 표준용액(5 ug/L)

4) 정성시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	± 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	± 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	± 30 %

5) 정량시험

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체(blank sample)에 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

<신  설>

10. (생  략)

9.19 루핀알칼로이드 시험법Lupinine, 13-hydroxylupanine, Lupanine, Sparteine, Angustifoline)

가. 시험법 적용범위

루핀콩 및 루핀 가공품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 분석대상물질에 메탄올/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)용액을 첨가한 후 초음파를 사용하여 추출하고 원심분리 한 후 상층액을 막여과지로 여과한 여액을 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

라 시약 및 시액

1) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 루피닌(Lupinine), 루파닌(Lupanine), 13-하이드록시루파닌(13-hydroxylupanine), 스파테인(Sparteine), 안구스티폴린(Angustifoline)을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,250 mg/L가 되도록 하며, 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

4) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올에 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

5) 추출 용매 : 메탄올, 정제수, 초산을 각각 80:19:1의 부피 비율로 혼합하여 시료 추출 용액으로 사용한다.

6) 0.1% HFBA(heptafluorobutyric acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 HFBA 1mL을 넣고 3차 증류수로 표시선까지 채운다.

7) 0.1% HFBA 메탄올용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 HFBA 1mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 검체 0.5 g을 취한다. 추출용매(메탄올/정제수/초산(80:19:1, v/v/v)) 50 mL를 가하여 120분간 초음파 추출을 한 후 상온에서 3,500 G로 20분간 원심분리한다. 상층액을 취한 후 추출용매로 5배 희석한 후 막여과지(RC filter 0.2 µm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 가스크로마토그래프 조건

가) 칼럼 : C18 (Atlantis T3, Waters, 2.1 mm ｘ 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% HFBA 용액

(2) 이동상 B : 0.1% HFBA 메탄올용액

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	유속(mL/min)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	0.5	95	5
0.5	0.5	95	5
4.0	0.5	0	100
4.5	0.5	0	100
5.0	0.5	95	5
10.0	0.5	95	5

다) 칼럼온도 : 35℃

라) 주입량 : 5 μL

2) 질량분석기 조건

가) Ionization : ESI (Positive)

나) Collision gas : N2(질소)

다) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

분석 성분 (Compound)	분자량 (M.W.)	선구 이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
루피닌 (Lupinine)	169.268	170.20	124.0	24
			136.0	28
13-하이드록시 루파닌 (13-hydroxylupanine)	264.369	265.30	152.0	26
			69.9	36
루파닌 (Lupanine)	248.370	249.25	136.0	25
			69.9	35
스파테인 (Sparteine)	234.387	235.20	134.0	27
			97.9	33
안구스티폴린 (Angustifoline)	234.343	235.20	193.0	18
			112.0	28

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 표준품 크로마토그램

루피닌(2.47분)

13-하이드록시루파닌(2.50분)

루파닌(2.64분)

스파테인(3.08분)

안구스티폴린(1.79분)

그림 1. 루피닌, 13-하이드록시루파닌, 루파닌, 스파테인, 안구스티폴린 표준용액(각 100 μg/L)의 크로마토그램

4) 정성 및 정량시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

10. (현행과 같음)

11. 시약·시액·표준용액 및 용량분석용 규정용액

11.1 시약

(생  략)

삭카린나트륨 : C7H4NNaO3S․2H2O

(생  략)

11.2 (생  략)

11.3 표준용액

(생  략)

삭카린표준용액

삭카린나트륨 50 mg을 물 5mL에 녹인다.

(생  략)

12. (생  략)

11. 시약·시액·표준용액 및 용량분석용 규정용액

11.1 시약

(현행과 같음)

사카린나트륨 : ----------------

(현행과 같음)

11.2 (현행과 같음)

11.3 표준용액

(현행과 같음)

사카린표준용액

사카린나트륨 ---------------

-------,

(현행과 같음)

12. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가013800	(생 략)
A가013900	검은딸기	Black berry, Brame berry, Hooked -thorn raspberry	Rubus fructicosus / Rubus croceacanthus	잎, 열매
A가014000 〜 A가042600	(생 략)
A가042700	다시마	곤포, Sea tangle, Kelp, Sea cabbage	Saccharina japonica / Laminaria japonica Areschoung	전체
A가042800 〜 A가052000	(생 략)
A가052100	드럼스틱	Drumstick-tree	Moringa oleifera Lam.	줄기, 잎, 열매, 씨앗
A가052200 〜 A가058600	(생 략)
A가058700	로케트	Rocket	Eruca Sativa Mill. / Eruca vesicaria subsp. sativa (Miller) Thell. / Brassica eruca L.	잎, 꽃
A가058800 〜 A가060300	(생 략)
A가060400	마	참마, East Asian mountain yam	Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg	뿌리, 뿌리줄기※ (산약), 주아(영여자)
A가060500 〜 A가081900	(생 략)
A가082000	베라알로에	알로에베라, Aloe bar badensis	Aloe vera (L.) Burm. f.	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함)제외]
A가082100 〜 A가082700	(생 략)
A가082800	벨벳빈	Velvet bean	Mucuna pruriens	순, 열매(열매를 물에 침지한 후 2-3차례 물을 교체하면서 3일동안 침지시킨 후 물을 버린 후 사용)
A가082900 〜 A가089600	(생 략)
A가089700	블랙베리	Black berry	Rubus spp.	잎, 열매
A가089800 〜 A가099900	(생 략)
A가100000	상추	상치, lettuce	Lactuca sativa L.	잎
A가100100 〜 A가110100	(생 략)
A가110200	스타아니스	대회향, Staranise	Illicium verum Hooker fil.	열매※(팔각회향), 씨앗
A가100300 〜 A가118300	(생 략)
A가118400	알로에	노회	Aloe barbadensis L. / Aloe ferox Miller / Aloe africana Miller 또는 Aloe spicata Baker의 잡종	잎에서 얻은 액즙※(노회)
A가118500 〜 A가127900	(생 략)
A가128000	오일팜	-	Elaeis guineensis	씨앗
A가128100 〜 A가175200	(생 략)
A가175300	팜	야자나무, 종려나무, Palm Tree	Liviston aaustralis (R. Br.) Mart.	열매
A가175400 〜 A가177700	(생 략)
A가177800	풀버섯	초고버섯, 짚버섯, 볏짚버섯, Staw mushiroom	Volvariella volvacea	자실체
A가177900 〜 A가361700	(생 략)
A가361800	White mustard	-	Brassica alba / Sinapis alba	잎, 씨앗
A가361900 〜 A가367400	(생 략)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나029900	(생 략)
A나030000	둥근전복	참전복, Abalone	Nordotis discus discus	-
A나030100 〜 A나035800	(생 략)
A나035900	문어	대문어, North Pacific giant octopus, Giant Pacific octopus	Enteroctopus dofleini / Octopus vulgaris / Octopus bimaculatus	-
A나036000 〜 A나037100	(생 략)
A나037200	미꾸라지	추어, Chinese muddy loach	Misgurnus mizolepis	-
A나037300 〜 A나041500	(생 략)
A나041600	밴댕이	반댕이, 뒤포리, Japanese sardinella, Big-eyed herring	Sardinella zunasi	-
A나041700 〜 A나063100	(생 략)
<신 설>
A나063200 〜 A나064700	(생 략)
<신 설>
A나064800 〜 A나068400	(생 략)
A나068500	정어리	눈치	Sardinops melanostictus	-
A나068600 〜 A나076100	(생 략)
<신 설>
A나076200 〜 A나081000	(생 략)
A나081100	톱날꽃게	Giant mud crab, Indo-pacific swamp crab, Green mud crab, Scylla serrata	Scylla paramamosain	-
A나081200 〜 A나091400	(생 략)
<신 설>
A나091500 〜 A나094400	(생 략)
<신 설>
A나094500 〜 A나094700	(생 략)
<신 설>
A나094800 〜 A나095600	(생 략)

3. ∼ 4. (생  략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭			기타명칭 또는 시장명칭		학명 또는 특성		사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가013800	(현행과 같음)
A가013900	검은딸기	블랙베리, Black berry, Brame berry, Hooked-thorn raspberry			Rubus fructicosus / Rubus croceacanthus / Rubus spp.		잎, 열매
A가014000 〜 A가042600	(현행과 같음)
A가042700	다시마	곤포, Sea tangle, Kelp, Sea cabbage			Saccharina japonica / Saccharina angustata / Laminaria japonica Areschoung		-
A가042800 〜 A가052000	(현행과 같음)
A가052100	드럼스틱	Drumstick-tree, 모링가			Moringa oleifera Lam.		줄기, 잎, 열매, 씨앗
A가052200 〜 A가058600	(현행과 같음)
A가058700	로케트	Rocket, Arugula			Eruca Sativa Mill. / Eruca vesicaria subsp. sativa (Miller) Thell. / Brassica eruca L.		잎, 꽃
A가058800 〜 A가060300	(현행과 같음)
A가060400	마	참마, East Asian mountain yam			Dioscorea batatas Decaisne / Dioscorea japonica Thunberg / Dioscorea pokystachya		뿌리, 뿌리줄기※ (산약), 주아(영여자)
A가060500 〜 A가081900	(현행과 같음)
A가082000	(삭제 : [A가118400]로 이동)
A가082100 〜 A가082700	(현행과 같음)
A가082800	벨벳빈		Velvet bean			Mucuna pruriens		순
A가082900 〜 A가089600	(현행과 같음)
A가089700	(삭제 : [A가013900]로 이동)
A가089800 〜 A가099900	(현행과 같음)
A가100000	상추	상치, 줄기상추, lettuce			Lactuca sativa L.		잎(줄기포함)
A가100100 〜 A가110100	(현행과 같음)
A가110200	스타아니스	대회향, Star anise			Illicium verum Hooker fil.		열매※(팔각회향), 씨앗
A가100300 〜 A가118300	(현행과 같음)
A가118400	알로에	노회, 베라알로에, 알로에베라			Aloe barbadensis L. / Aloe ferox Miller / Aloe africana Miller 또는 Aloe spicata Baker의 잡종 Aloe vera (L.) Burm. f.		잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]에서 얻은 액즙※(노회)
A가118500 〜 A가127900	(현행과 같음)
A가128000	(삭제 : [A가175300]로 이동)
A가128100 〜 A가175200	(현행과 같음)
A가175300	팜	야자나무, 종려나무, 오일팜, Palm Tree			Elaeis guineensis		열매(씨 포함)
A가175400 〜 A가177700	(현행과 같음)
A가177800	풀버섯	초고버섯, 짚버섯, 볏짚버섯, Straw mushiroom			Volvariella volvacea		자실체
A가177900 〜 A가361700	(현행과 같음)
A가361800	White mustard	백겨자			Sinapis alba L. / Brassica alba / Brassica hirta		잎, 씨앗
A가361900 〜 A가367400	(현행과 같음)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭						학명 또는 특성						사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나029900	(현행과 같음)
A나030000	둥근전복	참전복, 북방전복, Abalone						Nordotis discus discus / Nordotis discus hannai						-
A나030100 〜 A나035800	(현행과 같음)
A나035900	문어	대문어, North Pacific giant octopus, Giant Pacific octopus						Enteroctopus dofleini / Octopus vulgaris / Octopus bimaculatus / Octopus maya						-
A나036000 〜 A나037100	(현행과 같음)
A나037200	미꾸라지	추어, Chinese muddy loach						Misgurnus mizolepis / Paramisgurnus dabryanus						-
A나037300 〜 A나041500	(현행과 같음)
A나041600	밴댕이	반댕이, 뒤포리, Japanese sardinella, Big-eyed herring						Sardinella zunasi / Sardinella aurita						-
A나041700 〜 A나063100	(현행과 같음)
A나063150	유럽 가자미	-						Pleuronectes platessa						-
A나063200 〜 A나064700	(현행과 같음)
A나064750	인도 흰새우	-	Fenneropenaeus indicus						-
A나064800 〜 A나068400	(현행과 같음)
A나068500	정어리	눈치						Sardinops melanostictus / Sardina pilchardus						-
A나068600 〜 A나076100	(현행과 같음)
A나076150	초록담치	-						Perna viridis						-
A나076200 〜 A나081000	(현행과 같음)
A나081100	톱날꽃게	Giant mud crab, Indo-pacific swamp crab, Green mud crab,					Scylla serrata / Scylla paramamosain						-
A나081200 〜 A나091400	(현행과 같음)
A나091450	Argentine shortfin squid	-				Illex argentinus						-
A나091500 〜 A나094500	(현행과 같음)
A나094550	Thornycheek grouper	-			Epinephelus diacanthus						-
A나094600 〜 A나094700	(현행과 같음)
A나094750	Veined squid	-		Loligo forbesi						-
A나094800 〜 A나095600	(현행과 같음)

3. ∼ 4. (현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가005300	(생 략)
B가005400	비파	-	Eriobotrya japonica Lindley	잎※ (비파엽)	-
B가005500 ∼ B가006400	(생 략)
<신 설>
B가006500 ∼ B가008500	(생 략)
<신 설>
B가008600 ∼ B가010000	(생 략)
B가010100	작약	백작약, 참작약, Paeny Root	Paeonia lactiflora Pallas / Paeonia albiflora Pallas var. trichocarpa Bunge / Paeonia japonica var. pilosa NAKAI 또는 동속근연식물	뿌리※ (작약)	-
B가010200 ∼ B가014900	(생 략)

1. 식물성

2. (생  략)

고유번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
B다000100 ∼ B다003800	(생 략)
<신 설>
<신 설>
(생 략)

3. 미생물

4. (생  략)

[별표 3] ∼ [별표 5] (생   략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가005300	(현행과 같음)
B가005400	비파나무	Liquat, Japanese Medlar	Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl.	잎※ (비파엽)	-
B가005500 ∼ B가006400	(현행과 같음)
B가006450	생강나무	아귀나무, 동백나무, 개동백나무, Blunt- lobe spicebush	Lindera obtusiloba Blume / Benzoin cercidifolium (Hemsl.) Rehder	꽃	다류의 원료로만 사용
B가006500 ∼ B가008500	(현행과 같음)
B가008550	오크칩	-	Quercus spp.	참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)	발효식초와 주류에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성전에 제거하여 사용. 단, 원료에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니됨
B가008600 ∼ B가010000	(현행과 같음)
B가010100	작약	백작약, 참작약, Peony Root	Paeonia lactiflora Pallas / Paeonia albiflora Pallas var. trichocarpa Bunge / Paeonia japonica var. pilosa NAKAI 또는 동속근연식물	뿌리※ (작약)	-
B가010200 ∼ B가014900	(현행과 같음)

2. (현행과 같음)

3. 미생물

고유번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
B다000100 ∼ B다003800	(현행과 같음)
B다003900	Penicillium nalgiovense	-	Penicillium nalgiovense	발효육류 및 치즈 제조에 한함
B다004000	Gluconobacter oxydans	-	Gluconobacter oxydans	식초 및 비타민 제조에 한함
(현행과 같음)

4. (현행과 같음)

[별표 3] ∼ [별표 5](현행과 같음)

[별표 6] 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) ∼ (91) (생   략)

(92) 카탑(Cartap)

◎ 잔류물의 정의 : Nereistoxin

(생  략)

(93) ∼ (97) (생  략)

(98) 티오사이클람(Thiocyclam)

◎ 잔류물의 정의 : Nereistoxin

(92) 카탑(Cartap) 잔류허용기준에 따른다.

(99) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(생  략)

<신    설>

[별표 7] (생   략)

[별표 6] 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) ∼ (91) (현행과 같음)

(92) 카탑(Cartap)/티오사이클람(Thiocyclam)

◎ 잔류물의 정의 : Nereistoxin

(현행과 같음)

(93) ∼ (97) (현행과 같음)

<삭  제>

(98) 테트라코나졸(Tetraconazole)

(현행과 같음)

(99) 에톡시퀸(Ethoxyquin)

◎ 잔류물의 정의 : Ethoxyquin 및 Ethoxyquin dimer의 합

어류	1.0

갑각류	0.2

[별표 7] (현행과 같음)

부칙(제2018-98호)

제1조 (생  략)

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

<신  설>

제3조 ∼ 제4조 (생  략)

부칙(제2018-98호)

제1조 (현행과 같음)

제2조(적용례) ① 이 고시는 ------

---------------------------

---------------------------

--------.

② 제1항에도 불구하고 이 고시 시행 전 제1조제2항제3호 중 가목 및 다목에서 파목까지의 개정규정에 대하여 이 고시를 적용받고자 하는 자는 ｢식품위생법｣, ｢축산물 위생관리법｣ 또는 ｢수입식품안전관리특별법｣에 따라 영·유아를 섭취대상으로 표시하여 판매하는 식품으로 품목제조보고 또는 변경하거나 수입신고하는 경우 개정규정을 미리 적용받을 수 있다.

제3조 ∼ 제4조 (현행과 같음)