식품의약품안전처 공고 제2017-290호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2017. 8. 7.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2017-290호

｢식품의 기준 및 규격｣ (식품의약품안전처고시 제2017-57호, 2017. 6. 30.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2017년 8월 7일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

식품원료 수산물 중 은대구를 섭식, 이동 등 생태특성을 고려하여 심해성 어류로 재분류하고, 알가공품의 클로스트리디움 퍼프린젠스, 건포류의 황색포도상구균에 대한 제품별 특성을 고려한 위해성평가를 통해 현행 불검출 규격을 정량규격으로 완화하고자 함

식생활의 변화에 따라 다양한 식품이 개발·생산될 수 있도록 발효식초 제조 시 착향의 목적으로 오크칩(바)을 사용할 수 있도록 하고, 어육가공품 중 원료성 반제품의 포장방법을 합리적으로 개선하고자 함

신규 식품원료 추가 등 목록 개정 시 전체 식품원료 번호가 변경되는 불편함이 있어 식품원료 목록에 고유번호를 부여하는 방식으로 원료 관리 방식을 개선하고, 베라알로에의 사용부위와 벨벳빈의 사용조건을 명확히 하고자 함

또한, 국내 전래적 식용근거가 확인된 도두의 꼬투리를 식품원료에 추가하여 식품산업 활성화에 기여하고자 함

식품 중 3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol) 및 효소식품 중 α-아밀라아제와 프로테아제의 시험법을 개정하며, 국내외에서 사용되는 농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준을 신설·개정하고 관련 시험법을 마련하여 과학적인 식품 안전관리를 하고자 함

2. 주요 내용

가. 은대구의 분류 개정[안 제1. 4. 2)]

1) 식품원료 분류의 수산물 중 은대구를 심해성 어류로 재분류

2) 해양어류 분류 정비로 과학적인 식품 안전관리를 하고자 함

나. 농약 잔류허용기준 면제 항목 개정[안 제2. 3. 7) (2)]

1) 농약을 사용하더라도 잔류하지 않거나, 인체 위해가능성이 없는 성분에 대한 기준설정 면제 지정 필요

2) 잔류허용기준 면제목록에 차나무오일 등 3종 추가

3) 인체위해가능성이 낮은 농약들에 대한 면제목록 지정으로 국민 불안감 해소

다. 보존 및 유통기준 개정[안 제2. 4. 14)]

1) 냉동제품을 해동 판매할 수 있는 제조업자의 종류에 대하여 명확화 필요

2) 제조업자를 식품제조가공업 영업자 또는 축산물가공업 영업자로 개정

3) 해동판매를 할 수 있는 영업자의 종류를 구체적으로 명시함으로써 해석상의 혼란 해소

라. 알가공품의 클로스트리디움 퍼프린젠스, 건포류의 황색포도상구균 정량 규격 설정[안 제2. 3. 4) (2) 나) ②, 제2. 3. 4) (2) 다) ①]

1) 제품별 특성을 고려한 위해평가를 통해 현행 불검출 규격에서 정량 규격으로 합리적 안전관리 방안 마련

2) 알가공품의 클로스트리디움 퍼프린젠스와 건어포류, 기타 건포류의 황색포도상구균 불검출 규격(n=5, c=0, m=0)을 정량규격(n=5, c=1, m=10, M=100)으로 설정

3) 과도한 열처리 지양으로 고품질의 다양한 제품 개발 가능

마. 식품별 제조·가공기준 개정[안 제4. 12. 12-1 3) (2) 및 제4. 19. 19-1 3) (2)]

1) 다양한 식품이 생산될 수 있도록 식품별 제조·가공기준 개정 필요

2) 발효식초 제조 시 착향의 목적으로 오크칩(바)를 사용할 수 있도록 제조·가공기준 개정

3) 연육 및 어육반제품은 밀봉하지 않을 수 있도록 단서조항 추가

4) 제조·가공기준의 합리적 개선으로 식품산업 활성화에 기여

바. 일반시험법 개정 [안 제7. 6.8.3.1, 제7. 6.8.3.2, 제7. 7.1.3.12, 제7. 7.1.4.138, 제7. 7.1.3.139, 제7. 7.1.4.140, 제7. 7.1.4.146, 제7. 7.1.4.155, 제7. 7.1.4.156, 제7. 7.1.4.157, 제7. 7.1.4.159, 제7. 7.1.4.176, 제7. 7.1.4.208, 제7. 7.1.4.209, 제7. 7.1.4.210, 제7. 8.1, 제7. 8.3.3, 제7. 8.3.5, 제7. 8.3.7, 제7. 8.3.17, 제7. 8.3.23, 제7. 8.3.26, 제7. 8.3.27, 제7. 8.3.33, 제7. 8.3.37, 제7. 8.3.40, 제7. 8.3.42, 제7. 8.3.55, 제7. 8.3.58, 제7. 8.3.66, 제7. 8.3.68, 제7. 8.3.87, 제7. 8.3.93, 제7. 8.3.96, 제7. 8.3.101, 제7. 8.3.104, 제7. 8.3.107, 제7. 8.3.113, 제7. 10. 10.9, 제7. 11]

1) 시험결과의 정확성 제고 및 기준 신설 및 개정에 따른 시험법 마련 필요

2) 효소식품 중 α-아밀라아제 및 프로테아제의 정량시험법 개정

3) 농약 및 동물용의약품 일반시험법 중 비국제단위계로 표기된 부분을 국제단위계로 개정

4) 스피록사민 등 4종에 대한 농약 시험법 신설 및 개정

5) 동물용의약품 시험법 중 일반사항 및 바시트라신 등 10종에 대한 시험법 개정

6) 식품 중 3-MCPD 시험법 개정

7) 유전자변형식품의 승인 품목 추가 및 시험법 개정

8) 시험법 신설 및 개정으로 시험결과의 정확성 및 신뢰도 향상

사. 식품원료 별 고유 코드를 부여하도록 식품원료 목록 개정[안 [별표 1], [별표 2]]

1) 식품원료 목록 개정시 전체 일련번호 변경으로 인한 민원인의 불편 초래

2) 식품원료 목록 번호 체계를 천단위에서 알파벳, 한글 및 십만단위의 숫자 조합으로 변경하여 식품원료에 고유번호 부여

3) 식품원료에 고유번호 부여로 민원인의 식품원료 사용 편의성을 증진

아. 식품원료의 제조·가공 방법 등 명확화 [안 [별표 1]]

1) 제조가공 시 식품원료 사용을 위한 명확화 필요

2) 베라알로에 잎의 사용부위와 벨벳빈 열매의 사용조건 명확화

3) 동물성 원료 목록의 단서문구에 식품원료로 사용이 불가능한 원료로 기름치를 명시하여 어획량이 확인되더라도 식품원료로 사용할 수 없도록 근거 규정 명확화

자. 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료 목록 개정[안 [별표 2]]

1) 국내 전래적 식용근거가 확인된 도두 꼬투리를 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료로 등재

2) 「식품첨가물의 기준 및 규격」에 중복 등재되어 있는 미생물 원료를 삭제하는 등 원료 목록 정비를 통하여 미생물 원료 사용의 혼란 방지

차. 농산물 중 농약 잔류허용기준 신설 및 개정[안 별표 3 중 (1) 이미녹타딘, (7) 다미노자이드, (14) 디메토에이트, (19) 디코폴, (20) 다이쾃, (22) 디클로플루아니드, (23) 디클로란, (32) 말라티온, (34) 메빈포스, (35) 메토밀, (38) 메탈락실, (40) 메톨라클로르, (41) 메토브로뮤론, (43) 메톡시클로르, (44) 메트리뷰진, (46) 메틸브로마이드, (47) 모노크로토포스, (54) 벤타존, (58) 비에치시, (59) 비터타놀, (61) 비펜트린, (63) 세톡시딤, (66) 사이퍼메트린, (67) 사이플루트린, (68) 사이할로트린, (69) 사이헥사틴, (75) 아진포스메틸, (78) 알라클로르, (79) 알루미늄포스파이드, (82) 에티오펜카브, (84) 에탈플루랄린, (93) 오메토에이트, (101) 이미다클로프리드, (105) 이프로디온, (112) 카벤다짐, (113) 카보페노티온, (114) 카보퓨란, (115) 카복신, (118) 캡탄, (124) 클로로벤질레이트, (129) 클로르펜빈포스, (130) 클로르프로팜, (131) 클로르피리포스, (133) 테부코나졸, (148) 트리플루랄린, (152) 티오벤카브, (153) 파라티온, (155) 파라티온메틸, (157) 퍼메트린, (159) 페나미포스, (162) 페니트로티온, (163) 펜디메탈린, (164) 펜발러레이트, (166) 펜뷰타틴옥사이드, (177) 포스파미돈, (186) 프로클로라즈, (188) 프로파모카브, (192) 프로피코나졸, (194) 피레트린, (200) 헥사코나졸, (210) 페나자퀸, (228) 아족시스트로빈, (235) 포스티아제이트, (238) 플루디옥소닐, (248) 아바멕틴, (285) 아크리나트린, (286) 에트리디아졸, (299) 티플루자마이드, (309) 플루톨라닐, (321) 디노테퓨란, (332) 클로티아니딘, (335) 트리플록시스트로빈, (337) 티아메톡삼, (345) 피라클로스트로빈, (349) 노발루론, (352) 메톡시페노자이드, (353) 메트코나졸, (380) 피리달릴, (386) 플로니카미드, (394) 비스트리플루론, (399) 사이플루메토펜, (403) 메타플루미존, (408) 스피네토람, (410) 옥솔린산, (415) 크로마페노자이드, (422) 펜티오피라드, (424) 피리플루퀴나존, (430) 설폭사플로르, (432) 사플루페나실, (437) 플룩사피록사드, (439) 스피로테트라맷, (442) 플루피라디퓨론, (453) 만데스트로빈, (455) 옥사티아피프롤린, (458) 사이클라닐리프롤, (459) 피플루뷰마이드, (460) 피카뷰트라족스, (464) 스피록사민, (465) 톨펜피라드, (466) 펜플루펜]

1)「농약관리법」에 신규 등록된 농약의 안전관리 및 수입 농산물에 농약 잔류허용기준 설정 신청에 따른 관련 기준 신설 및 개정 필요

2) 이미녹타딘 등 농약 100종의 농약 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

카. 축산물의 농약 잔류허용기준 개정[안 별표 4 중 (8) 디클로르보스, (10) 메토밀, (20) 사이로마진, (58) 포스멧, (62) 프로폭서]

1) 동물용의약품 잔류허용기준 신설에 따라 농약의 잔류허용기준에 중복 설정된 기준 정비 필요

2) 디클로르보스 등 5종에 대한 농약의 잔류허용기준 삭제

3) 동물용의약품과 농약의 잔류허용기준 중 중복 설정된 기준을 정비함으로써 합리적 식품 안전관리 제고

타. 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준 개정[안 별표 5 중 (1) 겐타마이신, (2) 나이카바진, (3) 네오마이신, (9) 디클라주릴, (17) 살리노마이신, (22) 아목시실린, (26) 에리스로마이신, (30) 옥소린산, (31) 옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린, (41) 트리클라벤다졸, (66) 콜리스틴, (74) 이미도캅, (86) 세파졸린, (94) 옥시벤다졸, (96) 카나마이신, (103) 트리메토프림]

1) 동물용의약품 중 국내 허가되어 사용하고 있으나 기준이 설정되어 있지 않은 식품에 대한 안전관리 필요

2) 겐타마이신 등 18종의 동물용의약품 잔류허용기준 신설 및 개정

3) 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준을 신설 및 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

파. 전부개정고시 부칙 개정[고시 제2016-154호 부칙]

1) 식약처 고시 제2016-154호(2016.12.29.)에 따라 신설된 4개의 식품유형에 대하여 제조업자 또는 수입업자 등이 미리 적용받길 원할 경우 개정된 사항을 미리 적용받을 수 있도록 부칙에 추가

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는  단체 또는 개인은 2017년 10월 10일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 28159, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2420, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2017-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2017-57호, ‘17.6.30.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2017년  8월  00일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 4의 2)의 어류 중 해양어류 1)과 2)를 다음과 같이 한다.

1) 가오리, 가자미, 갈치, 강달이, 고등어, 꽁치, 날치, 넙치(광어), 노래미, 농어, 다랑어, 대구, 도루묵, 도미, 망둑어, 멸치, 명태, 민어, 박대, 방어, 밴댕이, 뱅어, 병어, 복어, 볼기우럭, 조피볼락(우럭), 볼락, 붕장어, 삼치, 서대, 숭어, 쌍동가리, 양미리, 임연수어, 전갱이, 전어, 정어리, 조기, 준치, 쥐치, 청어, 홍어 등

2) 심해성어류 : 쏨뱅이류(적어포함, 연안성제외), 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 체장메기(홍메기), 블랙오레오도리(Allocyttus niger), 남방달고기(Pseudocyttus maculatus), 오렌지라피(Hoplostethus atlanticus), 붉평치, 먹장어(연안성 제외), 흑점샛돔(은샛돔), 이빨고기, 은민대구(뉴질랜드계군에 한함), 은대구 등

제2. 3. 4) (2) 나) ②를 다음과 같이 한다.

② 햄류, 소시지류, 식육추출가공품, 알가공품 : n=5, c=1, m=10, M=100

제2. 3. 4) (2) 다) ①을 다음과 같이 한다.

① 햄류, 소시지류, 식육추출가공품, 건포류 : n=5, c=1, m=10, M=100

제2. 3. 7) (2) 중 59∼61을 다음과 같이 신설한다.

번호	유 효 성 분
59	차나무오일(Tea tree oil)
60	코퍼설페이트펜타하이드레이트(Copper sulfate, pentahydrate)
61	폴리옥신디(Polyoxin D)

제2. 4. 14)를 다음과 같이 한다.

14) 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통할 수 없다. 다만, 식품제조·가공업 영업자가 냉동된 빵류, 떡류, 초콜릿류, 젓갈류, 과채주스, 또는 수산물가공품(살균 또는 멸균하여 진공 포장된 제품에 한함)에, 축산물가공업 중 유가공업 영업자가 냉동된 치즈류 또는 버터류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

제4. 10. 10-1 5) (38) 중 “<3”을 “0”으로 한다.

제4. 12. 12-1 3) 중 (2)를 다음과 같이 신설한다.

(2) 참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)은 과일 또는 과즙을 주원료로 하여 제조한 발효식초에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성 전에 제거하여야 한다. 단, 오크칩(바)에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니 된다.

제4. 18. 18-4∼18-13의 내용 중 “<3”을 각각 “0”으로 한다.

제4. 19. 19-1 3) (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 유통·판매하는 제품은 밀봉·포장하여야 한다. 다만, 연육 및 어육반제품은 밀봉하지 아니할 수 있다.

제7. 2. 2.2 2.2.2 2.2.2.1 가. 3) 나) 중 “벤젠층”을 “석유에테르층”으로 한다.

제7. 4. 4.8 중 별표 1 및 별표 2의 하단에 다음의 내용을 각각 신설한다.

※ 최확수법을 이용한 판정 시 양성 시험관수가 모두 0인 경우 결과값은 0으로 간주한다.

제7. 6. 6.8.3.1 중 종전의 다.를 라.로 하고, 다.를 신설하며 라.를 다음과 같이 한다.

다. 표준용액의 조제

검량선 작성을 위해 포도당(99% 이상)을 증류수에 용해하여 10 ∼ 1,000 μg/mL의 농도로 제조한다. 제조된 포도당 용액과 증류수 0.4 mL에 각각 DNS 용액 1.2 mL를 가한다. 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

라. 시험용액의 조제

검체 5.0 g을 정밀히 달아 물 또는 맥바인 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과하여 검액으로 한다. 20 mL 시험관 2개를 준비하여 각각 시험용, 공시험용으로 한다. 시험용 시험관에 1% 가용성 전분용액 5 mL, 맥바인완충액(pH 7.0) 13 mL와 0.1% 염화칼슘용액 1 mL를 넣고 37℃로 가온하고 검액 1 mL를 넣은 후 37℃에서 20분간 방치 후, 100℃에서 10분간 가열하고 실온에서 냉각한 뒤 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 사용한다. 이와는 별도로 100℃에서 10분간 가열하여 활성을 잃은 검액 1 mL를 위와 같이 가용성 전분용액, 맥바인완충액, 염화칼슘용액에 넣고 조작하여 공시험용으로 한다. 시험용과 공시험용 0.4 mL에 DNS 용액 1.2 mL을 넣은 후, 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 시험용액으로 한다.

제7. 6. 6.8.3.1 중 종전의 라, 마.를 각각 마, 바로 하고 다음과 같이 한다.

마. 시험조작

물을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용 시험용액의 흡광도는 공시험용 시험용액의 흡광도보다 커야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 검액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다.

검량선은 농도별 포도당 표준용액의 흡광도 값에 증류수 표준용액 흡광도 값을 빼준 수치를 이용하여 작성한다. 시험용액 중 효소반응에 의해 생성된 포도당의 양은 시험용 시험용액의 흡광도 값에 공시험용 시험용액 흡광도 값을 뺀 수치를 검량선에 대입하여 산출한다.

바. 효소의 역가 계산

검체 중 α-아밀라아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 전분으로부터 포도당 1 mg을 분해해내는데 필요한 α-아밀라아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 포도당 양(μg) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 50(20 mL 중 0.4 mL 발색 반응)
	20(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

제7. 6. 6.8.3.2 중 종전의 다.를 라.로 하고, 다.를 신설하며, 라.를 다음과 같이 한다.

다. 표준용액의 조제

검량선 작성을 위해 L-티로신(99% 이상)을 2 N HCl 용액에 용해하여 10 μg/mL ∼ 1,000 μg/mL 농도로 제조한다. 제조된 L-티로신 용액과 2 N HCl 용액 1 mL를 시험관에 정확히 취하여 0.4 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 포린시액(원액을 3배 희석한 액) 1 mL를 넣어 잘 흔들어 섞는다. 37℃에서 20분간 방치한 다음 발색된 액을 표준용액으로 한다.

라. 시험용액의 조제

검체 약 5.0 g을 정밀히 달아 물 또는 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과하여 검액으로 한다. 0.6% 카제인용액 1 mL를 시험관에 넣고 37℃의 항온수욕중에서 가온한 다음 여기에 검액 1 mL를 정확히 넣고 잘 흔들어 섞는다. 곧 37℃의 항온수욕중에 넣고 정확히 10분간 반응시킨 다음 여기에 0.4 M 삼염화초산액 2 mL를 넣고 다시 37℃에서 25분간 방치한 다음 이것을 여과한다. 여액 1 mL를 시험관에 정확히 취하여 0.4 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 포린시액(원액을 3배 희석한 액) 1 mL를 넣어 잘 흔들어 섞는다. 37℃에서 20분간 방치한 다음 발색된 액을 시험용 시험용액으로 한다. 이와는 별도로 검액 1 mL를 정확히 취하여 시험관에 넣고 37℃에서 10분간 방치한 후 0.4 M 삼염화초산액 2 mL를 넣어서 혼화하고 0.6% 카제인용액 1 mL를 넣어 37℃에서 25분간 방치한 다음 이하 시험용 시험용액과 동일하게 조작하여 공시험용 시험용액으로 한다.

제7. 6. 6.8.3.1 중 종전의 라, 마.를 각각 마, 바로 하고 다음과 같이 한다.

마. 시험조작

물을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 660 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용 시험용액의 흡광도는 공시험용 시험용액의 흡광도보다 커야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 검액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다.

검량선은 농도별 L-티로신 표준용액의 흡광도 값에 2 N HCl 표준용액 흡광도 값을 빼준 수치를 이용하여 작성한다. 시험용액 중 효소반응에 의해 생성된 L-티로신의 양은 시험용 시험용액의 흡광도 값에 공시험용 시험용액 흡광도 값을 뺀 수치를 검량선에 대입하여 산출한다.

바. 효소의 역가 계산

검체 중 프로테아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 카제인으로부터 L-티로신 1 mg을 분해해내는데 필요한 프로테아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 L-티로신 양(μg) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 4(4 mL 중 1 mL 발색 반응)
	10(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

제7. 7. 7.1.3.12 중 라. 6)을 다음과 같이 한다.

6) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge) : 아민(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.138 중 라. 9)를 다음과 같이 한다.

9) 음이온 교환 카트리지 : 음이온 교환 수지 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.139 중 라. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.140 중 라. 7)을 다음과 같이 한다.

7) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.146 중 라. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.155 중 라. 6)을 다음과 같이 한다.

6) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.156 중 라. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.157 중 라. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.159 중 라. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge) : 아민(1 g) 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL)를 사용한다.

제7. 7. 7.1.4.176을 다음과 같이 한다.

7.1.4.176 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

가. 시험법 적용범위

두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 플루피라디퓨론을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플루피라디퓨론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 5 g(두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 것 중 5 g, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 물 10 mL를 넣어 2시간 방치) 1% 아세트산함유 아세토니트릴 25 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이 추출물에 무수황산마그네슘 6 g을 첨가하여 1분간 추가로 진탕한 후 원심분리기를 이용하여 4℃에서 2,000 G 로 원심분리하고 상징액을 분액깔대기에 옮긴다. 상징액에 헥산 50 mL를 가하고 심하게 흔든 후, 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 헥산층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 아세토니트릴층 중 2 mL만 취해 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 칼럼: C18(Capcell pak, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	0	100
3.0	0	100
6.0	50	50
7.0	30	70
8.0	10	90
10.0	0	100

라) 이동상 유속: 0.2 mL/분

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Collision gas: 아르곤(Ar)

다) Cone voltage: 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루피라디퓨론 (Flupyradifurone)	288.7	288.04	289	126	20
				90	40

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 플루피라디퓨론(9.5분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

제7. 7. 7.1.4.208 ∼ 210를 다음과 같이 신설한다.

7.1.4.208 스피록사민(Spiroxamine)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 스피록사민을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 스피록사민 표준품(cis와 trans 이성질체의 혼합물)을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 10 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 서류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 물 100 mL를 가하여 녹인 후 1 N 수산화나트륨용액을 천천히 가해 pH 7로 조절하여 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로로메탄 30 mL를 차례로 가하고 심하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 10 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜  버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 5 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 아세톤/헥산(5/95, v/v) 10 mL를 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피를 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18(XBridge, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 10 mM 암모늄아세테이트 함유 메탄올

(2) 이동상 B: 10 mM 암모늄아세테이트 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	2	98
2.0	50	50
5.0	98	2
7.0	2	98
10.0	2	98

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage:  1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라) Cone voltage: 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피록사민 (Spiroxamine)	297.5	297.26	298	144	20
				100	30

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

스피록사민(5.8분)

5) 정량한계

0.001 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 스피록사민을 확인한다.

7.1.4.209 톨펜피라드(Tolfenpyrad)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 견과종실류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 톨펜피라드를 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 톨펜피라드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로  혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 10 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 서류, 견과종실류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 디클로로메탄 30 mL를 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고 물 100 mL를 가한다. 포화식염수 20 mL를 넣고 가하고 심하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린 후 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다[지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고, 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.].

2) 정제

플로리실 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 씻어 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 5 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 아세톤/디클로로메탄(5/95, v/v) 10 mL를 가하고 1∼2  방울/초의 속도로 용출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 모은다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피를 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18(XBridge, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
4.0	80	20
6.0	80	20
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유속: 0.2 mL/분

마) 주입량: 1 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI positive-ion mode

나) Capillary voltage:  2.14 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라) Cone voltage:  40 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
톨펜피라드 (Tolfenpyrad)	383.9	383.14	384	197	20
				145	25

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

톨펜피라드(5.5분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 톨펜피라드를 확인한다.

7.1.4.210 펜플루펜(Penflufen)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 펜플루펜을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 펜플루펜 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 50 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 50 g, 서류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 50 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 30 mL를 가한 후 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL을 가하여 진탕기에서 3분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 후 여액을 염화나트륨 15 g이 들어있는 분액깔때기에 옮긴 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴 층 20 mL를 취하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다[지방성 검체의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다].

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산(20/80, v/v) 5 mL를 추가로 가하여 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 4 mL를 카트리지 상단에 넣은 후 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 5 mL를 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 동일한 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v)을 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: DB-5(Agilent, 0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속: 질소, 1.0 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 칼럼 온도: 80℃에서 2분간 유지한 후 10℃/분의 속도로 280℃까지 승온하고 15분간 유지

마) 검출기 온도: 280℃

바) 주입모드: splitless

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜플루펜(20.4분)

4) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜플루펜을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 칼럼: DB-5MS(Agilent, 0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm)

나) 이동상가스 및 유속: 헬륨, 1.0 mL/분

다) 칼럼 온도: 150℃에서 2분간 유지한 후 10℃/분의 속도로 280℃까지 승온하고 15분간 유지

라) 주입부 온도: 260℃

마) 검출기 온도: 280℃

바) 이온화: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입모드: splitless

아) 주입량: 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온 (Monitoring ion, m/z)
펜플루펜 (Penflufen)	317.4	317.19	141
			274

제7. 8. 8.1 2)를 다음과 같이 한다.

2) 시험법 적용범위에 가공식품 등 대상식품이 해당되지 않을 경우에도 해당 동물용의약품의 시험법에 준하여 시험할 수 있다.

제7. 8. 8.1 중 3) 및 4)를 다음과 같이 신설한다.

3) 검체는 원료의 함량, 특히 건조 등의 과정으로 인하여 수분 함량이 변화된 경우 수분 함량을 고려하여 시험용액의 조제과정에서 검체량을 조정할 수 있다.

4) 검체

식품의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 검체로 하여 균질화한다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 식품은 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

식 품	검 체	최소요구량
식육류 소, 돼지, 말, 양 등	근육 부위	100 g
	지방(육안으로 확인되는 지방 10 g을 채취하거나 분석을 위한 지방 10 g을 수집할 수 있는 충분한 양의 부위)	10 g
	신장, 간	50 g
가금류 닭, 오리, 거위, 칠면조 등	피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위	100 g
	지방(복부지방 또는 지방 10 g을 수집할 수 있는 충분한 양의 부위)	10 g
	신장, 간	전체 또는 50 g
우유류 우유, 산양유 등	전체를 균질화 한 것	500 g 또는 500 mL
알류 계란, 오리알 메추리알 등	10개 또는 이와 동등한 양 20개 또는 이와 동등한 양	500 g 200 g
어류 미꾸라지, 빙어, 멸치	머리, 꼬리, 뼈, 내장, 껍질 포함한 전체	500 g
그 외 어류(넙치, 조피볼락(우럭) 등)	머리, 꼬리, 뼈, 내장, 비늘을 제거한 껍질 포함한 근육부위	500 g
갑각류 새우류(대하, 흰다리새우 등)	껍질, 머리, 꼬리, 다리 등을 제거한 근육부위	500 g
작은 민물새우류(6 cm이하)	껍질을 포함한 전체	500 g
기타 갑각류	껍질, 내장 등을 제거한 근육부위	500 g
패류 가리비, 새조개, 키조개	껍질과 내장을 제거한 근육부위와 관자	500 g
전복, 큰우렁(골뱅이), 고둥, 논우렁, (참)소라	껍질과 내장을 제거한 근육부위	500 g
기타패류(꼬막, 재첩, 굴 등)	껍질을 제거한 전체	500 g
벌꿀 액화소밀	벌집을 으깨어 0.5 mm×0.5 mm(또는 0.42 mm×0.42 mm) 크기의 정사각형 망체에 걸러 꿀을 벌집과 완전히 분리시킨 것	250 g
밀랍, 나뭇가지, 벌, 벌집 조각 등 이물질이 있는 경우	40℃ 수욕조에서 시료를 따뜻하게 하고, 면직포를 이용하여 걸러낸 것	250 g
시판 꿀	병 또는 통 전체를 균질화 한 것	250 g

제7. 8. 8.3.3 6) 나) (4)를 다음과 같이 한다.

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	N,N’-BIS-(4-nitrophenyl)urea	Negative	7.30	302.2	300.9	136.9	20.0
						106.8	44.0
2	데코퀴네이트 (Decoquinate)	Positive	9.02	417.5	418.2	372.1	33.0
						203.9	55.0
						231.9	47.0
3	디싸이클라닐 (Dicyclanil)	Positive	2.10	190.2	191.0	150.0	27.0
						149.8	29.0
						163.1	23.0
4	디아베리딘 (Diaveridine)	Positive	3.47	260.3	261.0	245.0	37.0
						122.9	29.0
						217.1	37.0
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Negative	7.68	407.6	405.1	333.9	28.0
						299.0	42.0
					407.0	336.0	24.0
6	로베니딘 (Robenidine)	Positive	5.67	334.2	334.0	154.9	27.0
						110.9	61.0
						137.9	33.0
7	록사손 (Roxarsone)	Negative	3.03	263.0	261.9	243.8	18.0
						153.1	26.0
						122.9	34.0
8	암프롤리움 (Amprolium)	Positive	0.88	278.8	243.1	150.0	17.0
						93.8	19.0
						122.0	31.0
9	에토파베이트 (Ethopabate)	Positive	5.40	237.3	238.1	206.1	15.0
						136.0	37.0
						164.0	27.0
	m-Phenetidine	Positive	3.56	137.2	138.0	109.9	21.0
						64.9	33.0
						93.1	31.0
10	이미도캅 (Imidocarb)	Positive	3.14	348.4	175.1	162.0	19.0
						145.0	35.0
						89.8	47.0
11	죠렌 (Zoalene)	Negative	4.98	225.2	223.9	181.0	14.0
						42.0	36.0
						151.0	22.0
	*3-Amino-5-nitro-toluamide(ANOT)	Positive	3.46	198.2	196.0	107.0	23.0
						153.1	23.0
						179.0	11.0
12	클로피돌 (Clopidol)	Positive	3.61	192.0	191.9	101.0	35.0
						86.9	41.0
						51.1	63.0
13	할로푸지논 (Halofuginone)	Positive	4.38	414.7	413.9	100.0	23.0
					416.0	120.0	23.0
						100.0	67.0
14	톨트라주릴 설폰 (Toltrazuril sulfone)	Negative	7.36	457.4	456.0	456.0	8.0
						41.8	86.0

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

제7. 8. 8.3.5 중 4) 마)를 다음과 같이 한다.

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.7을 다음과 같이 한다.

8.3.7 니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)

1) 시험법 적용범위

축·수산물, 벌꿀 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중의 푸라졸리돈, 푸랄타돈, 니트로푸라존 및 니트로푸란토인의 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM 및 AHD)을 염산용액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다. 다만, 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(SEM)의 경우, 조직과 결합되어 있는 SEM을 정량한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준물질：3-amino-2-oxazolidinone(AOZ),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone(AMOZ),

semicarbazide(SEM),

1-aminohydantoin(AHD)

라) 내부표준물질：3-amino-2-oxazolidinone-D4(AOZ-D4),

3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone-D5(AMOZ-D5)

마) 표준원액：100 mL 용량플라스크에 표준품 AHD, AMOZ, AOZ, SEM을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

바) 혼합표준용액：100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 메탄올로 희석하여  200 μg/L가 되게 하고 냉동실에 보관한다. 혼합표준용액은 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

사) 내부표준물질 원액 : 100 mL 용량플라스크에 AOZ-D4, AMOZ-D5을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 내부 표준원액은 냉동 보관한다.

아) 내부표준물질 혼합용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 내부 표준원액을 메탄올로 희석하여 100 μg/L가 되게 한다.

자) 0.125 M 염산(HCl) : 1,000 mL 용량플라스크에 5 M 염산 25 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 0.05 M 유도체화용액：100 mL 갈색용량플라스크에 2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.76 g을 넣고 디메틸설폭사이드(DMSO)에 녹여 표시선까지 채운다. 이 용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

카) 10 mM 유도체화용액：100 mL 갈색용량플라스크에 2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.152 g을 넣고 디메틸설폭사이드(DMSO)에 녹여 표시선까지 채운다. 이 용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

타) 1 M 인산칼륨 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 제이인산칼륨(K2HPO4) 175.6 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

파) 0.1 M 인산칼륨 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 제이인산칼륨(K2HPO4) 17.56 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

하) 1 M 수산화나트륨(NaOH) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 수산화나트륨 39.99 g을 넣고 물로 녹인 후 표시선까지 채운다.

거) 10 mM 개미산암모늄 함유 0.1% 개미산 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 0.1% 개미산 용액으로 표시선까지 채운다.

너) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 벌꿀

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 ㉠{내부표준물질 혼합용액(100 ng/mL) 100 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 5 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 1 M 인산칼륨용액 5 mL와 1 M 수산화나트륨용액 100 μL를 가해 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 용액에 헥산 4 mL를 가하여 균질화한 후 4,800 G에서 10분간 원심분리 한다. 하층액을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 4 mL를 가하여 혼합한 후 4,800 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 취한다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 40℃ 수욕액상에서 질소농축하여 건조한 후 50% 메탄올  0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 15분간 원심분리 한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지(membrane filter)로 여과하여} 시험용액으로 한다.

나) 축·수산물

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. ★[메탄올 8 mL과 물 1 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 , 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다. 다시 원심분리관에 메탄올 5 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다. 다시 원심분리관에 에탄올 5 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다.] 여기에 ㉡{내부표준물질 혼합용액 100 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 10 mM 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 10 mL(수산물의 경우 1 mL)와 1 M 수산화나트륨용액 1 mL를 가해서 약 pH 7.4로 조정한다. 이 시험용액의 잔류물을 제거하기 위해 4℃에서 4,500 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취한다. 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL를 가하여 혼합한 후 4℃에서 4,500 G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 또다른 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 7 mL를 가하여 혼합하고 4℃에서 4,500 G로 10분간 원심분리한 후 상층액을 취한다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 40℃ 수욕액상에서 질소농축하여 건조한 후 50% 메탄올 1 mL에 용해시켜 7,500 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여} 시험용액으로 한다.

※ ★과정(메탄올과 에탄올 세척)은 세미카바자이드(SEM) 검출시 확인 및 정량시험시에만 적용한다.

6) 표준용액의 유도체화

음성 검체(Blank sample) 2 g을 50 mL 원심 분리관에 넣고 니트로푸란계 대사물질 혼합표준용액 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL를 각각 100 μL를 첨가하여 5)의 ㉠(벌꿀의 경우), ㉡(축·수산물의 경우)의 시험용액의 조제 과정을 각각 따른 후 표준용액으로 사용한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18 (Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산 암모늄 함유 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
0.5	90	10
7.0	10	90
10.0	10	90
10.1	90	10
13.0	90	10

(3) 유속 : 0.4 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

연번	물질명 (Compound)	분석물질	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	AOZ	2-NP-AOZ	4.4	235	236	78	20
						104	20
						134	10
2	AMOZ	2-NP-AMOZ	3.6	334	335	128	20
						262	15
						291	10
3	SEM	2-NP-SEM	4.6	208	209	134	9
						166	9
						192	9
4	AHD	2-NP-AHD	4.4	248	249	104	20
						134	10
						178	15
5	AOZ-D4	2-NP-AOZ-D4	4.4	239	240	134	15
6	AMOZ-D5	2-NP-AMOZ-D5	3.5	339	340	296	10

8) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 유도체화된 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주1) 참조

주 1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

2-NP-AOZ (4.6분)

2-NP-AMOZ (3.7분)

2-NP-SEM (4.7분)

2-NP-AHD (4.5분)

2-NP-AOZ d4 (4.6분)

2-NP-AMOZ d5 (3.7분)

그림 1. 유도체한 표준품의 크로마토그램(각 0.001 mg/L)

9) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 6)의 음성검체(blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 첨가 후 유도체화된 표준물질과 내부표준물질과의 피이크 면적(또는 높이)의 비로부터 표준물질 각각의 검량선을 작성하고 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)과 내부표준물질의 정량이온과의 각 피크 면적(또는 높이) 비에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

벌꿀 : 0.001 mg/kg

축·수산물 : 0.0005 mg/kg (단, 수산물 중 AHD의 경우는 0.001 mg/kg)

제7. 8. 8.3.17을 다음과 같이 한다.

8.3.17 바시트라신(Bacitracin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산 함유 아세토니트릴용액과 삼불화초산으로 추출하여 Plexa 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 바시트라신을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L이 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 표준원액을 0.1% 개미산 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

마) Plexa 카트리지 : N-vinylpyrrolidine과 divinylbenzene이 copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산 (Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10% 삼염화초산(Trichloroacetic acid) 함유 아세토니트릴 용액 : 100 mL 용량플라스크에 삼염화초산 10 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 0.5% 삼불화초산(Trifluoroacetic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 5 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취한다. 10% 삼염화초산 함유 아세토니트릴 용액 3 mL(알의 경우는 12 mL)을 가한 후 5분간 진탕하고 0.5% 삼불화초산 용액 12 mL(알의 경우는 3 mL)을 가하고 5분간 진탕한다. 4℃에서 2,600 G로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 12 mL 이하가 되도록 질소 농축한다. 이를 1분간 진탕하고 4℃, 15,000 G에서 20분간 원심분리한 후 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Plexa 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 2% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 2% 개미산 함유 아세토니트릴 : 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 새로운 원심분리관으로 용출시킨 후 40℃ 이하의 수욕액상에서 질소농축 한다. 0.1% 개미산 용액 2.5 mL로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 이 액을 0.45 μm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (XBridge  2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
4	95	5
8	30	70
16	30	70
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 20℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary Temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
바시트라신 (Bacitracin)	11.3	1301.56	475.0	199.2	43
				226.80	33

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 바시트라신(11.3분) 표준품의 크로마토그램(0.05 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

바시트라신(Bacitracin) : 0.05 mg/kg

제7. 8. 8.3.23, 8.3.23.1 중 4) 아)를 다음과 같이 한다.

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.26 중 4) 거)를 다음과 같이 한다.

거) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (500 mg, 6mL) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.27 중 4) 바) 및 5)를 다음과 같이 한다.

바) Silica 카트리지(6 mL, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5000 G로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 mL, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 막 여과지(membrane filter)를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알(Vial)에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

제7. 8. 8.3.33을 다음과 같이 한다.

8.3.33. 버지니아마이신(Virginiamycin), 올레안도마이신(Oleandomycin), 에리스로마이신(Erythromycin), 조사마이신(Josamycin), 틸미코신(Tilmicosin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 메탄올/아세토니트릴(25:75)용액으로 추출하고 아세토니트릴 포화헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 50% 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 메탄올/아세토니트릴(25:75)용액 10 mL를 가하여 30초간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 포화헥산 10 mL를 가한다. 10분간 진탕한 후 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	15	85
11	50	50
11.1	15	85
16	15	85

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 0.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
버지니아마이신 (Virginiamycin)	9.80	525.6	526.2	109.0	32
				133.0	24
				337.0	22
				355.0	16
올레안도마이신 (Oleandomycin)	6.70	687.8	688.4	116.0	40
				158.0	24
				554.3	14
에리스로마이신 (Erythromycin)	7.31	733.9	734.2	82.9	46
				157.9	26
				576.1	16
조사마이신 (Josamycin)	10.03	827.9	828.1	82.9	38
				108.9	40
				173.9	30
틸미코신 (Tilmicosin)	6.19	869.2	869.2	88.0	60
				173.9	42
				696.2	36

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

버지니아마이신(9.80분)

올레안도마이신(6.70분)

에리스로마이신(7.31분)

조사마이신(10.03)분

틸미코신(6.19분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 버지니아마이신, 올레안도마이신, 에리스로마이신, 조사마이신, 틸미코신 표준품의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

버지니아마이신 : 0.005 mg/kg

올레안도마이신 : 0.0005 mg/kg

에리스로마이신 : 0.001 mg/kg

조사마이신 : 0.0005 mg/kg

틸미코신 : 0.001 mg/kg

제7. 8. 8.3.37을 다음과 같이 한다.

8.3.37 오르메토프림(Ormethoprim), 트리메토프림(Trimethoprim)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 오르메토프림, 트리메토프림 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 아세토니트릴 10 mL를 가하여 1분간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,500 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 C18 분말 100 mg을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮겨 1분간 균질화한 후 상온에서 4,500 G로 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 질소농축한다. 여기에 0.1% 개미산 용액 1 mL를 가하여 재분산하고 5분간 초음파처리한 후 0.2 μm 막여과지(PVDF membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	10	90
1.0	10	90
6.0	40	60
10.0	95	5
15.0	95	5
15.1	10	90
20.0	10	90

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.4 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
오르메토프림	5.08	274.31	274.90	80.90	43
				122.90	25
				258.90	27
트리메토프림	4.77	290.31	291.15	123.04	24
				230.06	22
				261.14	24

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

오르메토프림(5.08분)

트리메토프림(4.77분)

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 오르메토프림, 트리메토프림 표준품의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

오르메토프림 : 0.001 mg/kg

트리메토프림 : 0.0005 mg/kg

제7. 8. 8.3.40, 8.3.40.2 4) 중 아), 사) 및 자)를 다음과 같이 한다.

아) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(150 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

사) 페닐(Phenyl) 카트리지 : 페닐 충진제(1,000 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

자) 기타시약 : 특급

제7. 8. 8.3.42 올레안도마이신(Oleandomycin)을 삭제한다.

제7. 8. 8.3.43～8.3.54를 각각 8.3.42～8.3.53으로 한다.

제7. 8. 8.3.55 틸미코신(Tilmicosin)을 삭제한다.

제7. 8. 8.3.56～8.3.57을 각각 8.3.54～8.3.55로 한다.

제7. 8. 8.3.58을 8.3.56으로 하고 다음과 같이 한다.

8.3.56 키타사마이신(Kitasamycin)

1) 시험법 적용범위

축산물, 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 키타사마이신을 메탄올:아세토니트릴(5:95) 혼합용액으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 표준원액 : 키타사마이신 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

다) 표준용액 : 표준원액을 30% 아세토니트릴 용액으로 희석하여  0.5, 1.0, 2.0, 3.0 및 4.0 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준용액은 냉장보관 한다.

라) 내부표준원액 : 카페인 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다. 조제된 표준원액은 냉동보관 한다.

마) 내부표준용액 : 내부표준원액을 30% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 4 mg/L가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

균질화 한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 내부표준용액 500 μL와 메탄올:아세토니트릴 (25:75) 혼합용액 7 mL를 가한 후 10분간 흔들어 섞는다. 이 용액을 2,700 G에서 20분간 원심분리한 후 상층액을 취한다. 남은 액에 메탄올:아세토니트릴 (25:75) 혼합용액 7 mL를 가한 후 10분간 흔들어 섞고 2,700 G에서 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 앞의 상층액과 합한다. 이 상층액에 헥산 10 mL를 가하고 1분간 흔들어 섞은 후 2,700 G에서 20분간 원심분리를 하여 아래층을 취한다. 45℃에서 질소농축 후 잔류물을 30% 아세토니트릴 용액 1 mL에 녹이고 4℃, 15,000 G에서 20분간 원심 분리한다. 상층액을 취하고 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 25℃

(다) 이동상 : 0.05% 개미산 용액:아세토니트릴 (3:7)

(라) 유속 : 0.3 mL/분

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary Temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy : 키타사마이신(49 V), 카페인(31 V)

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간(retention time)을 비교하고, 내부표준물질 카페인의 m/z 138에 대한 키타사마이신 m/z 174의 면적비를 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 함량을 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
키타사마이신	772	174, 109, 215
내부표준물질(카페인)	195	138

나) 정량한계

키타사마이신 : 0.03 mg/kg

제7. 8. 8.3.59∼8.3.66을 각각 8.3.57∼8.3.64로 하고 8.3.64 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin) 중 4) 아)를 다음과 같이 한다.

아) 약양이온교환(Weak Cation Exchange, WCX) 카트리지(150 mg, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.67을 8.3.65로 한다.

제7. 8. 8.3.68 트리메토프림(Trimethoprim)을 삭제한다.

제7. 8. 8.3.69∼8.3.87을 각각 8.3.66∼8.3.84로 하고, 8.3.84 카르바콜(Carbachol) 중 4) 마)를 다음과 같이 한다.

마) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(6 mL, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.88∼8.3.93을 각각 8.3.85∼8.3.90으로 하고, 8.3.90 폴리믹신 비(Polymyxin B) 중 4) 마)를 다음과 같이 한다.

마) Plexa 카트리지 : N-vinylpyrrolidine과 Divinylbenzene이 Copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.94∼8.3.96을 각각 8.3.91∼8.3.93으로 하고, 8.3.93 푸마길린(Fumagillin) 중 4) 마)를 다음과 같이 한다.

마) Strata-X 카트리지 : 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.97∼8.3.101을 각각 8.3.94∼8.3.98로 하고, 8.3.98 세파드록실(Cefadroxil) 중 4) 마)를 다음과 같이 한다.

마) MCX 카트리지(3mL, 60 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.102∼8.3.104를 각각 8.3.99 ∼ 8.3.101로 하고, 8.3.101 니트로푸라존(Nitrofurazone) 중 4) 사)를 다음과 같이 한다.

사) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.105∼8.3.107을 각각 8.3.102∼8.3.104로 하고, 8.3.104 콜리스틴(Colistin) 중 4) 바)를 다음과 같이 한다.

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

제7. 8. 8.3.108∼8.3.115를 각각 8.3.105∼8.3.112로 한다.

제7. 8. 8.3.113을 다음과 같이 신설한다.

8.3.113. 아미트라즈(Amitraz)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴, 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨 또는 헥산, 이소프로필알코올, 수산화나트륨으로 추출하여 C18 으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 아미트라즈, 2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline, 아미트라즈대사체)표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid) 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 0.1 M 수산화나트륨용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 수산화나트륨(NaOH) 4.04 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 가금육

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL을 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가한 뒤 1분간 진탕하고 4℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 40°C 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리하여 상층액을 취하고 0.2 µm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 후 시험용액으로 한다.

나) 알

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 0.1 M 수산화나트륨용액 2 mL, 헥산 4 mL, 이소프로필알코올 1.2 mL을 가한 뒤 1분간 진탕한 후 4℃에서 2,700 G로 5분간 원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1 M 수산화나트륨용액 2 mL, 헥산 4 mL, 이소프로필알코올 1.2 mL을 가한 뒤 1분간 진탕한 후 4℃에서 2,700 G로 5분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를 합한 후 40°C 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리하여 상층액을 취하고 0.2 µm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 후 시험용액으로 한다.

다) 우유

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL을 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가한 뒤 1분간 진탕한 것을 4 ℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 150 mg PSA, 150 mg C18, 900 mg MgSO4를 담겨진 새로운 15 mL 원심분리관에 넣은 후 1분간 진탕하고, 4℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리한다. 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18 (Phenomenex Luna, 2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
3	0	100
9	0	100
10	90	10
15	90	10

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI (Positive)

(2) Gas Temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	아미트라즈 (Amitraz)	9.2	293.41	294.13	163.20	19
					122.10	43
					107.10	59
2	2,4-디메틸아닐린 (2,4-Dimethylaniline)	6.7	121.18	122.06	107.10	23
					77.00	39
					105.10	23

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

아미트라즈(9.2분)

2,4-디메틸아닐린(6.7분)

그림 1. 아미트라즈, 2,4-디메틸아닐린 표준품의 크로마토그램 (각 0.005 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

아미트라즈(Amitraz): 0.001 mg/kg

2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline): 0.005 mg/kg

제7. 10. 10.9 3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol)를 다음과 같이 한다.

10.9 3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol)

가. 시험법 적용범위

산분해간장, 혼합간장(산분해간장 또는 산분해간장 원액을 혼합하여 가공한 것에 한한다) 및 식물성 단백가수분해물(HVP: Hydrolyzed vegetable protein)에 적용한다.

나. 분석원리

원심분리한 시험액의 상층액을 정제칼럼에 적재한 다음 디클로로메탄으로 추출하고 HFBA(heptafluorobutyric anhydride)로 유도체화한 후 기체크로마토그래프/질량분석기로 분석하는 방법이다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프/질량분석기(GC/MS)를 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 디클로로메탄 : 잔류 농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 유도체시약 : HFBA(Heptafluorobutyric anhydride)

3) 정제칼럼 : 다공성 규조토 정제칼럼(최대 시료부피 3 mL) 또는 이와 동등한 것.

4) 표준원액 : 3-MCPD 표준품을 초산에틸에 녹여 1,000 μg/mL로 조제한다.

5) 표준용액 : 위의 표준원액을 초산에틸로 희석하여 5개 이상의 적당한 농도로 조제한다.

6) 내부표준원액 : 3-MCPD-d5 표준품을 초산에틸에 녹여 1,000 μg/mL로 조제한다.

7) 내부표준용액 : 위의 내부표준원액을 초산에틸로 희석하여 10 μg/mL로 조제한다.

8) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것.

마. 시험 용액의 조제

1) 추출

균질화한 검체 5 g을 정확히 달아 5 M NaCl용액을 가하여 30 mL가 되게 한 뒤 10분간 진탕한 후 원심분리 한다. 정제칼럼 상단에 무수황산나트륨 약 1 g을 가한 뒤 위의 상층액 2 mL과 내부표준용액 50 μL를 적재하고, 약 10분간 정치하여 흡착시킨 후 디클로로메탄 60 mL을 분당 약 2 mL 정도로 용출한다.

용출액을 농축플라스크에 모아 35℃의 항온수조에서 1 mL로 감압농축 한 후 농축액을 파스퇴르 피펫을 이용하여 눈금이 있는 시험관으로 옮긴다. 플라스크에 남아있는 잔류물을 디클로로메탄으로 씻어 시험관에 합친 후, 35℃의 항온수조에서 100 μL가 되도록 질소 농축한다.

2) 유도체화

위의 농축 시험관에 이소옥탄(Isooctane) 900 μL 및 HFBA 150 μL를 첨가하여 마개를 닫고 60℃의 항온수조에서 교반하며 30분간 반응시킨 후 상온에서 10분간 방치한 다음 증류수 5 mL를 가하고 가볍게 흔든 후 정치한다. 상층의 유기용매층을 취하여 소량의 무수황산나트륨이 들어있는 시험관에 넣어 가볍게 흔들어 정치시킨 다음 상층액을 취하여 시험용액으로 한다.

표준시험용액은 마개가 있는 시험관에 농축용액 대신에 이소옥탄(Isooctane) 900 μL와 농도가 다른 5개의 표준용액 50 μL, 내부표준용액 50 μL 및 HFBA 150 μL를 첨가하여 상기와 같은 순서로 유도체화한 용액을 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프/질량분석기 측정 조건

가) 칼럼 : DB-5MS (30 m x 0.25 ㎜, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 주입부 온도 : 250℃

다) 검출기 온도 : 230℃

라) 칼럼오븐온도 : 초기의 온도 50℃에서 5분간 유지하고 분당 2℃씩 90℃ 까지 승온하여 5분간 유지한 뒤 분당 30℃씩 280℃ 까지 승온하여 3분간 유지한다.

마) 운반기체(carrier gas) 및 유량 : 헬륨 (0.8 mL/분)

바) 이온화 방법 : EI mode

사) 이온화 전압 : 70 eV

아) 특성이온질량 :

3-MCPD 유도체 화합물 : m/z 253, 275, 289, 291, 453

내부표준물질 유도체 화합물 : m/z 257, 278, 294, 456

2) 검량선의 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 피크 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

3-MCPD-d5

3-MCPD

그림 1. 내부표준품(3-MCPD-d5)과 표준품(3-MCPD)의 크로마토그램

4) 표준품의 스펙트럼

그림 2. 내부표준품(3-MCPD-d5, 위)과 표준품(3-MCPD, 아래)의 질량스펙트럼

5) 정량한계 : 0.002 mg/kg

사. 정성시험

위의 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 표준물질 및 내부표준물질의 피크 머무름 시간(retention time)과 비교하여 일치 여부를 확인한다. 시험용액의 특성이온 m/z 253, 275, 289, 291 및 453이 확인되어야 하고 특성이온 m/z 253과 275, 289, 291 및 453간 4개의 반응세기의 비(response ratio)를 3-MCPD 표준물질의 특성이온 간 반응세기의 비와 비교하여 2개 이상의 반응세기의 비가 ± 20%이내에서 일치하여야 한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과를 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

1) 계산방법
검량곡선표준용액에서 얻어진 표준물질의 m/z 253 피크면적(AS)과 내부표준물질의 m/z 257 피크면적(AIS)에 대한 비[AS/AIS]를 Y축으로 하고 표준물질의 양을 X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액에서 얻어진 3-MCPD의 m/z 253 피크면적(ASAM)과 내부표준물질의 m/z 257 피크면적(ASAMIS)의 면적비[ASAM/ASAMIS]를 Y축에 대입하여 3-MCPD함량을 다음에 따라 계산한다

3-MCPD함량 (mg/kg) =M × D × [eqn: {1} over {S}] × V × [eqn: {1} over {1000}]

M : 검량선에서 계산된 3-MCPD의 농도 (ng/mL)

D : 전체 시험용액양에 대한 분석에 사용한 시험용액양의 비

S : 검체 채취량 (g)

V : 유도체화 과정에서 사용한 시험용액의 부피 (mL)

비고：HVP 의 경우 수분함량을 측정하여 건조물 기준으로 보정하여 계산한다.

제7. 11. 11.1 11.1.5 다. 중 표 1을 다음과 같이 한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	콩 lectin (118 bp)	Le1n02-5'	5'-GCC CTC TAC TCC ACC CCC A-3'
		Le1n02-3'	5'-GCC CAT CTG CAA GCC TTT TT-3'
		Le1-Taq	5'-FAM-AGC TTC GCC GCT TCC TTC AAC TTC AC-TAMRA-3'
	콩 lectin (74 bp)	GM1-F	5'-CCA GCT TCG CCG CTT CCT TC-3'
		GM1-R	5'-GAA GGC AAG CCC ATC TGC AAG CC-3'
		GM1-P	5'-FAM-CTT CAC CTT CTA TGC CCC TGA CAC-TAMRA-3'
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	P35S 1-5'	5'-ATT GAT GTG ATA TCT CCA CTG ACG T-3'
		P35S 1-3'	5'-CCT CTC CAA ATG AAA TGA ACT TCC T-3'
		P35S-Taq	5'-FAM-CCC ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCT-TAMRA-3'
	tNOS (151 bp)	NOS ter 2-5'	5'-GTC TTG CGA TGA TTA TCA TAT AAT TTC TG-3'
		NOS ter 2-3'	5'-CGC TAT ATT TTG TTT TCT ATC GCG T-3'
		NOS-Taq	5'-FAM-AGA TGG GTT TTT ATG ATT AGA GTC CCG CAA-TAMRA-3'
구조 유전자	RRS (GTS40-3-2) (121 bp)	RRS 01-5'	5'-CCT TTA GGA TTT CAG CAT CAG TGG-3'
		RRS 01-3'	5'-GAC TTG TCG CCG GGA ATG-3'
		RRS-Taq	5'-FAM-CGC AAC CGC CCG CAA ATC C-TAMRA -3'
	MON89788 (139 bp)	MON89788-5'	5'-TCC CGC TCT AGC GCT TCA AT-3'
		MON89788-3'	5'-TCG AGC AGG ACC TGC AGA A-3'
		MON89788-Taq	5'-FAM-CTG AAG GCG GGA AAC GAC AAT CTG-TAMRA-3'
	A2704-12 (153 bp)	YjA2704-F	5'-GGG CGT TCG TAG TGA CTG AG-3'
		YjA2704-R	5'-GCG TTA CCC AAC TTA ATC GC-3'
	A2704-12 (64 bp)	KVM175-5'	5'-GCA AAA AAG CGG TTA GCT CCT-3'
		SMO001-3'	5'-ATT CAG GCT GCG CAA CTG TT-3'
		A2704-12-Taq	5'-FAM-CGG TCC TCC GAT CGC CCT TCC-TAMRA-3'
	DP356043-5 (145 bp)	DP356-f8-5'	5'-CTT TTG CCC GAG GTC GTT AG-3'
		DP356-r8-3'	5'-GCC CTT TGG TCT TCT GAG ACT G-3'
	DP356043-5 (99 bp)	DP356-f1	5'-GTC GAA TAG GCT AGG TTT ACG AAA AA-3'
		DP356-r1	5'-TTT GAT ATT CTT GGA GTA GAC GAG AGT GT-3'
		DP356-p	5'-FAM-CTC TAG AGA TCC GTC AAC ATG GTG GAG CAC-TAMRA-3'
	DP305423-1 (149 bp)	DP305 f7-5'	5'-CCC GTG TTC TCT TTT TGG CTA-3'
		DP305 r7-3'	5'-TGA ATT TCT AAC CTG GCT GCT ATA GTT-3'
	DP305423-1 (93 bp)	DP305423-f1	5'-CGT GTT CTC TTT TTG GCT AGC-3'
		DP305423-r5	5'-GTG ACC AAT GAA TAC ATA ACA CAA ACT A-3'
		DP305423-1p	5'-FAM- TGA CAC AAA TGA TTT TCA TAC AAA AGT CGA GA-TAMRA-3'
	A5547-127 (150 bp)	A5547-127-5'	5'-TGT GGT TAT GGC GGT GCC ATC-3'
		A5547-127-3'	5'-TGC TAC AGG CAT CGT GGT GTC-3'
	A5547-127 (75 bp)	A5547-127Q-5'	5'-GCT ATT TGG TGG CAT TTT TCC A-3'
		A5547-127Q-3	5'-CAC TGC GGC CAA CTT ACT TCT-3'
		A5547-127-Taq	5'-FAM-CCG CAA TGT CAT ACC GTC ATC GTT GT-TAMRA-3'
	MON87701 (150 bp)	MON87701-5'	5'-GCA CGC TTA GTG TGT GTG TCA AAC-3'
		MON87701-3'	5'-GGA TCC GTC GAC CTG CAG TTA AC-3'
	MON87701 (89 bp)	MON87701Q-5'	5'-CGT TTC CCG CCT TCA GTT TAA A-3'
		MON87701Q-3'	5'-TGG TGA TAT GAA GAT ACA TGC TTA GCA T-3'
		MON87701-Taq	5'-FAM-TCA GTG TTT GAC ACA CAC ACT AAG CGT GCC-TAMRA-3'
	CV127 (135 bp)	CV127-F	5'-GCC CTC CTT ATT TAT CCC CTT AG-3'
		CV127-R	5'-GGT TCG TTT AAG GAT GAA AAT TG-3'
	CV127 (88 bp)	SE-127-f4	5'-AAC AGA AGT TTC CGT TGA GCT TTA AGA C-3'
		SE-127-r2	5'-CAT TCG TAG CTC GGA TCG TGT AC-3'
		SE-127-p3	5'-6FAM-TTT GGG GAA GCT GTC CCA TGC CC-TAMRA-3'
	MON87705 (92 bp)	MON87705-1	5'-CTC CAT ATT GAC CAT CAT ACT CAT TG-3'
		MON87705-2	5'-GAT AAC AAC ACC CTG AGT CTC TTC-3'
	MON87705 (86 bp)	MON87705 primer1	5'-TTC CCG GAC ATG AAG CCA TTT AC-3'
		MON87705 primer2	5'-ACA ACG GTG CCT TGG CCC AAA G-3'
		MON87705 probe	5'-FAM-AAG AGA CTC AGG GTG TTG TTA TCA CTG CGG-TAMRA-3'
	MON87708 (105 bp)	87708-1GB	5'-CCA CGA GCT TAT CCA CGA GCA TC-3'
		87708-2GB	5'-CGC CTT CAG TTT AAA CTA TCA GTG T-3'
	MON87708 (96 bp)	MON87708Q primer1	5'-TCA TAC TCA TTG CTG ATC CAT GTA G-3'
		MON87708Q primer2	5'-AGA ACA AAT TAA CGA AAA GAC AGA ACG-3'
		MON87708Q probe	5'-FAM-TCC CGG ACT TTA GCT CAA AAT GCA TGT A-TAMRA-3'
	MON87769 (111 bp)	MON87769G-1	5'-ATG TAG ATT TCC CGG ACA TGA AGC-3'
		MON87769G-2	5'-GTA TGC TCG ACA CTT GTC TTT TCT TTC-3'
	MON87769 (87 bp)	MON87769 primer1	5'-CAT ACT CAT TGC TGA TCC ATG TAG ATT-3'
		MON87769 primer2	5'-GCA AGT TGC TCG TGA AGT TTT G-3'
		MON87769 probe	5'-FAM-CCC GGA CAT GAA GCC ATT TAC AAT TGA C-TAMRA-3'
	FG72 (115 bp)	SHA130	5'-CTA TAT TCT GGT TCC AAT TTA TC-3'
		SMP178	5'-TGA GGC ACG TAT TGA TGA CC-3'
	FG72 (70 bp)	MAE071	5'-AGA TTT GAT CGG GCT GCA GG-3'
		SHA097	5'-GCA CGT ATT GAT GAC CGC ATT A-3'
		TM325	5'-FAM-AAT GTG GTT CAT CCG TCT T-MGBNFQ-3'
	DAS-44406-6 (145 bp)	4406-1F	5'-GCG CAC CCT ACG ATT CAG TGT-3'
		4406-1R	5'-AAT TGC GAG CTT TCT AAT TTC AAA C-3'
	DAS-44406-6 (99 bp)	DAS-44406-5F	5'-TTA TTG TTC TTG TTG TTT CCT CTT TAG G-3'
		DAS-44406-5R	5'-CCT CAA TTG CGA GCT TTC TAA TTT-3'
		DAS-44406-6-5p1	5'-FAM-ATT CGG ACC TCC ATG ATG ACC TTA CCG TT-TAMRA-3'
	DAS-68416-4 (128 bp)	416-1F	5'-TAC TTG CTC TTG TCG TAA GTC AAT AAA TT-3'
		416-1R	5'-GGG CCT AAC TTT TGG TGT GAT G-3'
	DAS-68416-4 (87 bp)	DAS-68416-4-3f5	5'-GTA CAT TAA AAA CGT CCG CAA TGT GT-3'
		DAS-68416-4-3r3	5'-GTT TAA GAA TTA GTT CTT ACA GTT TAT TGT TAG-3'
		DAS-68416-4-3p3	5'-FAM-TTA AGT TGT CTA AGC GTC AAT A-MGB-3'
	SYHT0H2 (140 bp)	FE5313 F	5'-CGC GCA AAC TAG GAT AAA TTA TCG C-3'
		FE08317 R	5'-TGT GTG CCA TTG GTT TAG GGT-3'
	SYHT0H2 (88 bp)	FE08316 fwd	5'-GGG AAT TGG GTA CCA TGC C-3'
		FE08317 rev	5'-TGT GTG CCA TTG GTT TAG GGT-3'
		FE08318 probe	5'-FAM-CCA GCA TGG CCG TAT CCG CAA-BHQ1-3'
	DAS-81419-2 (117 bp)	814-F1	5'-ACA GCA CTT ATT GGT ACT TGT CC-3'
		814-R4	5'-GGA TCA ACA GGC ACC GAT G-3'
	DAS-81419-2 (105 bp)	DAS81419-f2	5'-TCT AGC TAT ATT TAG CAC TTG ATA TTC AT-3'
		DAS81419-r1	5'-GCT TCA AGA TCC CAA CTT GCG-3'
		DAS81419-p3	5'-FAM-ATC AAC AGG CAC CGA TGC GCA CCG-TAMRA-3'
	MON87751 (202 bp)	87751G1	5'-TCG AAC ATT GCA CGA CTC CCA TGA-3'
		87751G2	5'-GGC CTA ACT TTT GGT GTG ATG ATG-3'
	MON87751 (87 bp)	MON 87751 Q1	5'-GGC CTA ACT TTT GGT GTG ATG ATG-3'
		MON 87751 Q2	5'-CTA AAT TGC TCT TTG GAG TTT ATT TTG TAG-3'
		MON 87751 Q3	5'-FAM-TGA CTG GAG ATC TCC AAA GTG AGG GGA AA-TAMRA-3'

표 1. 유전자변형 콩의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

제7. 11. 11.1  11.1.5 다. 중 표 2를 다음과 같이 한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	SSllb 1-5'	5'-CTC CCA ATC CTT TGA CAT CTG C-3'
		SSllb 1-3'	5'-TCG ATT TCT CTC TTG GTG ACA GG-3'
		SSllb-Taq	5'-FAM-AGC AAA GTC AGA GCG CTG CAA TGC A-TAMRA-3'
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	SSllb 3-5'	5'-CCA ATC CTT TGA CAT CTG CTC C-3'
		SSllb 3-3'	5'-GAT CAG CTT TGG GTC CGG A-3'
		SSllb-Taq	5'-FAM-AGC AAA GTC AGA GCG CTG CAA TGC A -TAMRA-3'
	옥수수 adh1 (135 bp)	Zm adh1-F	5'-CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC-3'
		Zm adh1-R	5'-CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC-3'
		Zm adh1-P	5'-FAM-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-TAMRA-3'
	옥수수 hmg (79 bp)	MaiJ-F2	5'-TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA-3'
		Mhmg-rev	5'-GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T-3'
		Mhmg-probe	5'-FAM-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-TAMRA-3'
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	P35S 1-5'	5'-ATT GAT GTG ATA TCT CCA CTG ACG T-3'
		P35S 1-3'	5'-CCT CTC CAA ATG AAA TGA ACT TCC T-3'
		P35S-Taq	5'-FAM-CCC ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCT-TAMRA-3'
	NOS (151 bp)	NOS ter 2-5'	5'-GTC TTG CGA TGA TTA TCA TAT AAT TTC TG-3'
		NOS ter 2-3'	5'-CGC TAT ATT TTG TTT TCT ATC GCG T-3'
		NOS-Taq	5'-FAM-AGA TGG GTT TTT ATG ATT AGA GTC CCG CAA-TAMRA-3'
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	Bt176 2-5'	5'-TGT TCA CCA GCA GCA ACC AG-3'
		Bt176 2-3'	5'-ACT CCA CTT TGT GCA GAA CAG ATC T-3'
		Bt176-Taq	5'-FAM-CCG ACG TGA CCG ACT ACC ACA TCG A-TAMRA-3'
	Bt11 (127 bp)	Bt11 3-5'	5'-AAA AGA CCA CAA CAA GCC GC-3'
		Bt11 3-3'	5'-CAA TGC GTT CTC CAC CAA GTA CT-3'
		Bt11-Taq	5'-FAM-CGA CCA TGG ACA ACA ACC CAA ACA TCA-TAMRA-3'
	GA21 (133 bp)	GA21 3-5'	5'-GAA GCC TCG GCA ACG TCA-3'
		GA21 3-3'	5'-ATC CGG TTG GAA AGC GAC TT-3'
		GA21-Taq	5'-FAM-AAG GAT CCG GTG CAT GGC CG-TAMRA-3'
	T25 (149 bp)	T25 1-5'	5'-GCC AGT TAG GCC AGT TAC CCA-3'
		T25 1-3'	5'-TGA GCG AAA CCC TAT AAG AAC CCT-3'
		T25-Taq	5'-FAM-TGC AGG CAT GCC CGC TGA AAT C-TAMRA-3'
	MON810 (113 bp)	M810 2-5'	5'-GAT GCC TTC TCC CTA GTG TTG A-3'
		M810 2-3'	5'-GGA TGC ACT CGT TGA TGT TTG-3'
		M810-Taq	5'-FAM-AGA TAC CAA GCG GCC ATG GAC AAC AA-TAMRA-3'
	NK603 (143 bp)	NK603 01-5'	5'-TAT CTT GCT CGA TGC CTT CTC C-3'
		NK603 01-3'	5'-ACA CCA TTG CAG ATT CTG CTA ACT-3'
	NK603 (108 bp)	NK603 primer F	5'-ATG AAT GAC CTC GAG TAA GCT TGT TAA-3'
		NK603 primer R	5'-AAG AGA TAA CAG GAT CCA CTC AAA CAC T-3'
		NK603 probe PR	5'-FAM-TGG TAC CAC GCG ACA CAC TTC CAC TC-TAMRA-3'
	TC1507 (103 bp)	TC1507 01-5'	5'-GCT TCA ACA GGG CTG AGT TTG-3'
		TC1507 01-3'	5'-CCC CAC ACA GTT TGG GAT CTA-3'
	TC1507 (58 bp)	MaiJ-F2	5'-TAG TCT TCG GCC AGA ATG G-3'
		MaiY-R3	5'-CTT TGC CAA GAT CAA GCG-3'
		MaiY-S1	5'-FAM-TAA CTC AAG GCC CTC ACT CCG-TAMRA-3'
	MON863 (152 bp)	tahsp17-5‘	5'-GTG TTT TTT GGA TCC CCG G-3'
		MON 3-3‘	5'-CCA TCA TGG TTG GTT GGA CTT-3'
	MON863 (84 bp)	MON863 primer F	5'-GTA GGA TCG GAA AGC TTG GTA C-3'
		MON863 primer R	5'-TGT TAC GGC CTA AAT GCT GAA CT-3'
		MON863 probe	5'-FAM–TGA ACA CCC ATC CGA ACA AGT AGG GTC A-TAMRA-3'
	DAS59122-7 (141 bp)	DAS 5-5‘	5'-GCA CCT GTG ATT GGC TCA TAA A-3'
		Pubi-3‘	5'-CTC CCT TAA TTC TCC GCT CAT G-3'
	DAS59122-7 (84 bp)	DAS-59122-7 rb1f	5'-GGG ATA AGC AAG TAA AAG CGC TC-3'
		DAS-59122-7 rb1r	5'-CCT TAA TTC TCC GCT CAT GAT CAG-3'
		DAS-59122-7 rb1s	5'-FAM-TTT AAA CTG AAG GCG GGA AAC GAC AA-TAMRA-3'
	MON88017 (100 bp)	MON88017-G-5'	5'-GCT AGC TTG ATG GGG ATC AGA TTG-3'
		MON88017-G-3‘	5'-GAT TGG TTT GTT TTC GGC AGT ATG-3'
	MON88017 (95 bp)	MON88017AF	5'-GAG CAG GAC CTG CAG AAG CT-3`
		MON88017AR	5`-TCC GGA GTT GAC CAT CCA-3`
		MON88071AP	5`-FAM-TCC CGC CTT CAG TTT AAA CAG AGT CGG GT-TAMRA-3`
	MIR604 (142 bp)	MIR604-CJB264-5'	5'-TCG CGC GCG GTG TCA TCT ATG-3'
		MIR604es-LB-R-3'	5'-CGC GAC ACA CCT CGT TAG TTA A-3'
	MIR604 (76 bp)	MIR604 primer F	5'-GCG CAC GCA ATT CAA CAG-3'
		MIR604 primer R	5'-GGT CAT AAC GTG ACT CCC TTA ATT CT-3'
		MIR604 probe	5'-FAM-AGG CGG GAA ACG ACA ATC TGA TCA TG-TAMRA-3'
	MON89034 (112 bp)	MON89034-5'	5'-CTC CAT ATT GAC CAT CAT ACT C-3'
		MON89034-3'	5'-GGG TTG AAA TGA AAT TTC CAA TAC-3'
		MON89034-Taq	5'-FAM-ATC CCC GGA AAT TAT GTT-MGBNFQ-3'
	MIR162 (149 bp)	FE02402-5'	5'-GTG GAC TGA AAG GAG ACT TTG TTT ATC-3'
		FE01004-3'	5'-GAT TGT CGT TTC CCG CCT TCA GTT-3'
	MIR162 (92 bp)	MIR162-f1	5'-GCG CGG TGT CAT CTA TGT TAC TAG-3'
		MIR162-r1	5'-TGC CTT ATC TGT TGC CTT CAG A-3'
		MIR162-p1	5'-FAM-TCT AGA CAA TTC AGT ACA TTA AAA ACG TCC GCC A-TAMRA-3'
	DP098140-6 (147 bp)	DP098140-6-5'	5'-TCT CTT TGC TTG GTC TTT CTC TAT CGA-3'
		DP098140-6-3'	5'-CCA AAC GTA AAA CGG CTT GTC C-3'
	DP098140-6 (80 bp)	DP098-f6	5'-GTG TGT ATG TCT CTT TGC TTG GTC TT-3'
		DP098-r2	5'-GAT TGT CGT TTC CCG CCT TC-3'
		DP098-p5	5'-FAM-CTC TAT CGA TCC CCC TCT TTG ATA GTT TAA ACT-TAMRA-3'
	3272 (141 bp)	FE02401-5'	5'-CGA TCG AAT TCA TCA GAC CAG ATT C-3'
		FE01002-3'	5'-CGT GAC TCC CTT AAT TCT CCG CT-3'
	3272 (95 bp)	Event 3272-F	5'-TCA TCA GAC CAG ATT CTC TTT TAT GG-3'
		Event 3272-R	5'-CGT TTC CCG CCT TCA GTT TA-3'
		Event 3272-P	5'-FAM-ACT GCT GAC GCG GCC AAA CAC TG-TAMRA-3'
	MON87460 (85 bp)	MON87460-5'	5'-AGC GTT AGA CGG CTG TCT TTG AG-3'
		MON87460-3'	5'-GAT GGG GGG CGT TTC TTT GGA AG-3'
	MON87460 (82 bp)	MON87460 1Q	5'-CAC GTT GAA GGA AAA TGG ATT G-3'
		MON87460 2Q	5'-TCG CGA TCC TCC TCA AAG AC-3'
		MON87460-Taq	5'-FAM-AGG GAG TAT GTA GAT AAA TTT TCA AAG CGT TAG ACG GC-TAMRA-3'
	5307 (149 bp)	FE06138	5'-CGC GCG GTG TCA TCT ATG T-3'
		MIC5307es-R21	5'-GGC CCA GGG AAG AGG GTA TAT-3'
	5307 (107 bp)	5307 i3' forward primer	5'-CAT GGC CGT ATC CGC AAT GTG-3'
		5307 i3' reverse primer	5'-TGC ACC CTT TGC CAG TGG-3'
		5307 i3' S2 probe	5'-FAM-ACC ACA ATA TAC CCT CTT CCC TGG GCC AG-TAMRA-3'
	MON87427 (152 bp)	87427-1GB	5'-GCG CGC AAA CTA GGA TAA ATT ATC G-3'
		87427-2GB	5'-CTG CCG CGT TGC AAC TTG CAT GT-3'
	MON87427 (95 bp)	MON87427 primer1	5'-ACG GAA ACG GTC GGG TCA AAT G-3'
		MON87427 primer2	5'-CCA TGT AGA TTT CCC GGT TTT CTC-3'
		MON87427 probe	5'-FAM-TCG GGA CAA TAT GGA GAA AAA GAA AGA G-TAMRA-3'
	DAS40278-9 (144 bp)	DAS40278-9-5'	5'-CCT CTC TAA GCG GCC CAA ACT-3'
		DAS40278-9-3'	5'-ATT CTG GCT TTG CTG TAA ATC GT-3'
	DAS40278-9 (98 bp)	DAS40278-9_5’-f1	5'-CAC GAA CCA TTG AGT TAC AAT C-3'
		DAS40278-9_5’-r3	5'-TGG TTC ATT GTA TTC TGG CTT TG-3'
		DAS40278-9_5’-S1	5'-FAM-AGC TAA CCT TCA TTG TAT TCC G-TAMRA-3'
	DP004114-3 (118 bp)	DP4114-3-F	5'-TTA AAA ACG TCC GCA ATG TG-3'
		DP4114-3-R	5'-CCG CGC TGT TTT CTA GTT TT-3'
	DP004114-3 (90 bp)	08-O-2677	5'-CGT TTG TAG CAC TTG CAC GTA GT-3'
		08-O-2678	5'-GGT AAC CGC TCT TCC AGT TGA A-3'
		08-QP74	5'-FAM-AAG CTT CAA CAC AGA TC-MGB-3'
	MON87411 (112 bp)	87411 primer G1	5'-TAG AGC GGC CGC GTT TAA ACT ATC-3'
		87411 primer G2	5'-ACC AGT TCA ATA GAA AAG TAT GCA CAC-3'
	MON87411 (109 bp)	87411 QF	5'-CTC TGT AAC AGA AAA CAC CAT CTA GAG-3'
		87411 QR	5'-ACA AAA GTG AAC TAG TTC TAG GGT AGA T-3'
		87411 QP	5'-FAM-CCG CGT TTA AAC TAT CAG TGT TTA GAG AAT-TAMRA-3'
	MON 87419 (184 bp)	87419-184G1	5'-GGT CGC TGC CAG GTA TTG ATG TG-3'
		87419-184G2	5'-GAT TCG CTA CCT TAG GAC CGT TAT AG-3'
	MON87419 (97bp)	87419 QF	5'-CGG TCG CTG CCA GGT ATT G-3'
		87419 QR	5'-CAG ACC TCA ATT GCG AGC TTT CT-3'
		87419 QP	5'-FAM-TGT GCG CCA GTC AGC ATC ATC ACA CC-TAMRA-3'

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

제7. 11. 11.1  11.1.5 라. 중 ①∼④를 각각 다음과 같이 한다.

① 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인된 경우 : RRS,　MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, SYHT0H2, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, Bt11, GA21, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, DP098140-6, 3272, MON87460, 5307, MON87427, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

② 35S 프로모터 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4(이상 콩), Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP098140-6, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

③ NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4(이상 콩), GA21, MIR604, MIR162, DP098140-6, 3272, 5307, DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

④ 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인되지 않은 경우 : MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS-81419-2, MON87751(이상 콩), DP098140-6, DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

제7. 11. 11.1  11.1.5 바. 3)을 다음과 같이 한다.

3) 유전자변형 이벤트 중 35S 프로모터 및 NOS 종결인자(terminator)를 모두 사용하는 것으로는 RRS, SYHT0H2, Bt11, NK603, MON863, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427이 있고,  35S 프로모터를 사용하는 것으로는 RRS, SYHT0H2, A2704-12, A5547-127, Bt176, Bt11, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427, DP004114-3, MON87411이 있으며, NOS 종결인자(terminator)를 사용하는 것으로는 RRS, FG72, Bt11, GA21, NK603, MON863, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, 3272, MON87460, 5307, MON87427이 있다.

제7. 11. 11.1 11.1.11 나. 중 표 9를 다음과 같이 한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	면화 (76 bp)	acp1 primer1-5'	5'-ATT GTG ATG GGA CTT GAG GAA GA-3'
		acp1 primer2-3'	5'-CTT GAA CAG TTG TGA TGG ATT GTG-3'
		acp1 probe-Taq	5'-FAM-ATT GTC CTC TTC CAC CGT GAT TCC GAA -TAMRA-3'
구조 유전자	531* (72 bp)	531 primer1-5'	5'-TCC CAT TCG AGT TTC TCA CGT-3'
		531 primer2-3'	5'-AAC CAA TGC CAC CCC ACT GA-3'
		531 probe-Taq	5'-FAM-TTG TCC CTC CAC TTC TTC TC-TAMRA-3'
	1445 (87 bp)	1445 primer1-5'	5'-GGA GTA AGA CGA TTC AGA TCA AAC AC-3'
		1445 primer2-3'	5'-ATC GAC CTG CAG CCC AAG CT-3'
		1445 probe-Taq	5'-FAM-ATC AGA TTG TCG TTT CCC GCC TTC AGT TT-TAMRA-3'
	15985 (82 bp)	15985 primer1-5'	5'-GTT ACT AGA TCG GGG ATA TCC-3'
		15985 primer2-3'	5'-AAG GTT GCT AAA TGG ATG GGA-3'
		15985 probe-Taq	5'-FAM-CCG CTC TAG AAC TAG TGG ATC TGC ACT GAA-TAMRA-3'
	MON88913 (94 bp)	MON88913 primer1-5'	5'-GGC TTT GGC TAC CTT AAG AGA GTC-3'
		MON88913 primer2-3'	5'-CAA ATT ACC CAT TAA GTA GCC AAA TTA C-3'
		MON88913 probe-Taq	5'-FAM-AAC TAT CAG TGT TTG ACT ACA T- MGBNFQ**-3'
	LLCotton25 (79 bp)	KVM156 1-5'	5'-CAA GGA ACT ATT CAA CTG AG-3'
		KVM155 2-3'	5'-CAG ATT TTT GTG GGA TTG GAA TTC-3'
		TM018 probe-Taq	5'-FAM-CTT AAC AGT ACT CGG CCG TCG ACC GC-TAMRA-3'
	281/3006 (111 bp)	281 f1-5'	5'-CTC ATT GCT GAT CCA TGT AGA TTT C-3'
		281 r2-3'	5'-GGA CAA TGC TGG GCT TTG TG-3'
		281s2 probe-Taq	5'-FAM-TTG GGT TAA TAA AGT CAG ATT AGA GGG AGA CAA-TAMRA-3'
	GHB614 (120 bp)	SHA007-5‘	5'-CAA ATA CAC TTG GAA CGA CTT CGT-3'
		SHA008-3'	5'-GCA GGC ATG CAA GCT TTT AAA-3'
		TM072-Taq	5'-FAM-CTC CAT GGC GAT CGC TAC GTT CTA GAA TT-TAMRA-3'
	T304-40 (79 bp)	T304-40-5'	5'-AGC GCG CAA ACT AGG ATA AAT T-3'
		T304-40-3'	5'-CCT AGA TCT TGG GAT AAC TTG AAA AGA-3'
		T304-40-Taq	5'-FAM-TCG CGC GCG GTG TCA TCT ATC TC-TAMRA-3'
	GHB119 (90 bp)	GHB119-5'	5'-CCA GTA CTA AAA TCC AGA TCA TGC A-3'
		GHB119-3'	5'-GAA ATT GCG TGA CTC AAA TTC C-3'
		GHB119-Taq	5'-FAM-CCT GCA GGT CGA CGG CCG AGT AC-TAMRA-3'
	COT102 (101 bp)	COT102_3_89F	5'-TCT CCG CTC ATG ATC AGA TTG TC-3'
		COT102_3_181R	5'-CAG TAA CAG TAC AGT CGG TGT AGG G-3'
		COT102_3_115T	5'-FAM-TCC CGC CTT CAG TTT AAA CTA TCA GTG TTT AAT-TAMRA-3'
	MON88701 (84 bp)	MON88701 primer1	5'-CAT ACT CAT TGC TGA TCC ATG TAG A-3'
		MON88701 primer2	5'-AGT GTT AAA CAA GTT ATG TTC TAG AGC-3'
		MON88701 probe	5'-FAM-TTC CCG GAC ATG AAG CCT TAA TTC AAT-TAMRA-3'
	DAS81910-7 (120 bp)	1706-f2	5'-AAG CTT AGG TGA TTT CGA TGA TG-3'
		1706-r3	5'-GAC CTC AAT TGC GAG CTT TC-3'
		1706-p3	5'-FAM-CAC ACC AAA AGT TAG GCC CG-TAMRA-3'

표9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

제7. 11. 11.1 11.1.13 나. 중 표 23을 다음과 같이 한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	GruA3 F-5' GruA3 R-3' GruD1 probe-Taq	5'-GAC CTC CAT ATT ACT GAA AGG AAG-3' 5'-GAG TAA TTG CTC CAT CCT GTT CA-3' 5'-FAM-CTA CGA AGT TTA AAG TAT GTG CCG CTC -TAMRA-3'
	알팔파(alfalfa) (127 bp)	pef1-85F-5' pef1-211R-3' pef1-110P-Taq	5'-TAC GTC CAA TCC CAA CGC C-3' 5'-GGC CTT TTG CTG GTA ATC TAC AAA C-3' 5'-FAM-ACC GTG ACT GCA GCA TCT CTG GCA -TAMRA-3'
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	H7PLT1 -5' ZRH7-R2-3' ZRH7-probe-Taq	5'-TGG GAT CTG GGT GGC TCT AAC T-3' 5'-AAT GCT GCT AAA TCC TGA G-3' 5'-FAM-AAG GCG GGA AAC GAC AAT CT -TAMRA-3'
	알팔파(alfalfa) J101 (121 bp)	J101-F12-5' J101-R11-3' J101-P11-Taq	5'-CTG ATC TTG TGT CAT AGT TTC AAA CAC TG-3' 5'-GCT TTG GAC TGA GAA TTA GCT TCC A-3' 5'-FAM-AAC TGA AGG CGG GAA ACG ACA ATC TG -TAMRA-3'
	알팔파(alfalfa) J163 (105 bp)	J163-F1-5' J163-R3-3' J163-P1-Taq	5'-GAG GCT TTG GAC TGA GAA TTA GCT T-3' 5'-CAA GGT CAT CCA AAC TGA AGT GTT C-3' 5'-FAM-CAC TCG AGC AGG ACC TGC AGA AGC TT-TAMRA-3'
신설	알팔파(alfalfa) KK179 (88 bp)	KK179 primer1 KK179 primer2 KK179 probe	5'-GAA GCT AGC TTG ATG GGG ATC AGA-3' 5'-AAA GTA ACT AGG CTA AAG TAA GAT ATC GAA GA-3' 5'-FAM-AAG AGG TTT TGA AGG CGG GAA ACG ACA-TAMRA-3'

표 23. 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)

[별표 1] 1. 식물성 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(A), 한글(가) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → A가000100)하며, 종전의 477, 819, 827을 각각 A가047700, A가081900, A가082700으로 하여 다음과 같이 한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A가000100	가는가래	좀가래, Little-leaf pondweed	Potamogeton cristatus	잎, 줄기
A가000200	가는기린초	가는잎기린초, 꿩의 비름, Aizoon stonecrop	Sedum aizoon L. / Sedum aizoon var. typica Nakai.	잎
A가000300	가는대나물	가는잎대나물,	Gypsophila pacifica Kom	잎
중 략 (A가000400 가능등갈퀴 ∼ A가047600 도깨비엉겅퀴)
A가047700	도두	작두콩	Canavalia gladiatia	씨앗
중 략 (A가047800 도라지 ∼ A가081800 베고니아)
A가081900	베라알로에	알로에베라, Aloe barbadensis	Aloe vera (L.) Burm. f.	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함)] 제외
중 략 (A가082000 베르가모트 ∼ A가082600 벤조인생강나무)
A가082700	벨벳빈	Velvet bean	Mucuna pruriens	순, 열매(열매를 물에 침지한 후 2-3차례 물을 교체하면서 3일동안 침지시킨 후 물을 버린 후 사용)
중 략 (A가082800 벳지 ∼ A가368500 Yew-leaf willow)
A가368600	Yunnan plum yew	-	Cephalotaxus lanceolata	열매
A가368700	Zanthoxylum beecheyanum	-	Zanthoxylum beecheyanum	열매

[별표 1] 2. 동물성 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(A), 한글(나) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → A나000100)한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A나000100	가는고리물레고둥	-	Ophiodermella omiyatennis	-
A나000200	가는이랑새조개	Hariy cockle	Clinocardium ciliatum	-
중 략 (A나000300 가는줄개가리비 ∼ A나094900 Wuchang bream)
A나095000	Yellowsnout large-eye bream	-	Gymnocranius frenatus	-
A나095100	Yellowstripe scad	-	Selaroides leptolepis	-

[별표 1] 2. 동물성 원료의 단서문구를 다음과 같이 한다.

상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다.

다만, 수산물은 상기에서 명시된 동물성 수산물 이외에도 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nations의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase, World Register of Marine Species 등)에서 어획량에 대한 정보가 확인되고, 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우는 식품에 사용가능한 원료로 사용할 수 있다. 다만, 별표 2에서 정하고 있는 원료와 기름치는 제외한다.

[별표 1] 3. 미생물 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(A), 한글(다) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → A다000100)하며, 종전의 61을 A다006100로 하여 다음과 같이 한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A다000100	Aspergillus luchensis	Aspergillus kawachii, Aspergillus awamori	Aspergillus luchensis	-
A다000200	Aspergillus niger	Aspergillus shirousamii, Aspergillus usamii	Aspergillus niger	-
중 략 (A다000300 Aspergillus oryzae ∼ A다006000 Saccharomyces cerevisia)
A다006100	Saccharomyces fragilis	Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces marxianus, Saccharomyces marxianus, Kluyveromyces cicerisporus, Candida pseudotropicalis, Candida kefyr	Saccharomyces fragilis
중 략 (A다006200 Saccharomyces lactis ∼ A다006800 Weissella cibaria)
A다006900	Weissella confusa	Lactobacillus confusus, Lactobacillus coprophilus subsp. confusus	Weissella confusa	-
A다007000	Weissella koreensis	-	Weissella koreensis	-

[별표 1] 4. 기타 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(A), 한글(라) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → A라000100)한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A라000100	꿀	Honey	-	-
A라000200	눈꽃동충하초	누에동충하초	Paecilomyces japonica / Paecilomyces tenuipes / Isaria japonica	전체
중 략 (A라000300 두나리엘라 ∼ A라001300 팔라티노스)
A라001400	Crypthecodinium cohnii	-	Crypthecodinium cohnii	-
A라001500	Haematococcus pluvialis	-	Haematococcus pluvialis	-

[별표 2] 1. 식물성 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(B), 한글(가) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → B가000100)하며, B가002950을 다음과 같이 신설한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용조건
B가000100	가는잎미선콩	블루루핀, Blue Lupin	Lupinus angustifolius L.	씨앗	Phomopsins 5㎍/kg이하, Lupin alkaloids 200mg/kg이하
B가000200	가는잎쐐기풀	가는쐐기풀, 꼬리쐐기풀, Narrow-leaf nettle	Urtica angustifolia Fisch. ex Hornem.	잎	-
중 략 (B가000300 가르시니아캄보지아 ∼ B가002900 도꼬마리)
B가002950	도두	작두콩	Canavalia gladiatia	어린(연한) 부풀기 전의 꼬투리에 한함
중 략 (B가003000 독활 ∼ B가014600 Valerian)
B가014700	Wenderot	-	Valeriana celtica	뿌리	-
B가014800	Zanthoxylum bungeanum	-	Zanthoxylum bungeanum	열매	-

[별표 2] 2. 동물성 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(B), 한글(나) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → B나000100)한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용조건
B나000100	녹각※	-	-	Cervus nippon T. / Cervus elaphus L. / Cervus canadensis E.	골질화된 뿔
B가000200	녹용※	-	-	Cervus nippon T. / Cervus elaphus L. / Cervus canadensis E.	골질화되지 않았거나 약간 골질화된 어린뿔
중 략 (B나003000 녹혈분말 ∼ B나000600 식용누에)
B나000700	생녹용	매화록· 마록· 대록의 건조되지 않은 뿔	Cervus nippon T. / Cervus elaphus L. / Cervus canadensis E.	골질화되지 않았거나 약간 골질화된 뿔	건조공정을 거치지 않은 뿔로서 털을 제거하거나 90℃이상의 열수 등을 이용하여 3회 이상 세척후, 냉동상태로 포장 및 보관·유통된 것이어야 하며 추출가공식품류에만 사용할 수 있다.
B나000800	용설란벌레	Agave worm	Comadia redtenbacheri	-	주류의 원료에 한함

[별표 2] 3. 미생물 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(B), 한글(다) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → B다000100)한다. 종전의 10, 12, 및 28를 삭제하며, 종전의 1∼9를 각각 B다00100〜B다00900으로 하고, 종전의 11 및 13〜27을 각각 B다001000 및 B다001100〜B다002500으로 하며, 종전의 28을 삭제하고, 종전의 29, 30을 각각 B다002600,  B다002700으로 한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용조건
B다000100	Acetobacter pasteurianus	Acetobacter pasteurianus subsp. ascendens, Acetobacter pasteurianus subsp. paradoxus, Acetobacter peroxydans	Acetobacte rpasteurianus	식초 제조에 한함
B다000200	Acetobacter xylinum	Acetobacter aceti subsp. xylinum, Acetobacter aceti subsp. xylinus, Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus	Acetobacter xylinum	바이오셀룰로즈 제조에 한함
중 략 (B다003000 Arthrobacter globiformis∼ B다000900 Enterococcus faecalis)
B다001000	Geotrichum candidum	Dipodascus geotrichum	Geotrichum candidum	치즈 제조에 한함
B다001100	Lactobacillus hilgardii	-	Lactobacillus hilgardii	주류 제조에 한함
중 략 (B다001200 Leuconostoc pseudomesenteroides ∼ B다002400 Staphylococcus vitulinus)
B다002500	Staphylococcus xylosus	-	Staphylococcus xylosus	발효육류 및 치즈제조에 한함
B다002600	Zygosaccharomyces rouxii	Kluyveromyces osmophilus	Zygosaccharomyces rouxii	장류 제조(간장, 된장)에 한함
B다002700	Zymomonas mobilis	Achromobacter anaerobium, Pseudomonas lindneri, Saccharomonas lindneri, Thermobacterium mobile, Zymomonas anaerobia	Zymomonas mobilis	주류 제조에 한함

[별표 2] 4. 기타 원료 목록 중 품목의 일련번호를 알파벳과(A), 한글(나) 및 숫자 6자리(십만단위)를 조합하여 품목번호를 다음과 같이 개정(종전 일련번호 1 → B라000100)한다.

품목번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용조건
B라000100	락툴로즈	Lactulose, Galactofructose	-	-
B라000200	N-아세틸 글루코사민	N-Acetylglucosamine	-	-
중 략 (B라000300 산호 ∼ B라001000 패각)
B라001100	Mortierella alpina	-	Mortierella alpina	-
B라001200	Schizochytrium	-	Schizochytrium spp.	-

[별표 3]의 내용 중 “콩류”를 각각 “두류”로 한다.

[별표 3], (1) 이미녹타딘(Iminoctadine) 중 “고추 1.0”을 “고추 2.0”으로 하고, “구기자(건조) 5.0”을 “구기자(건조) 10”으로 하며, “딸기 1.0”을 “딸기 2.0”으로 하고, “매실 1.0”을 “매실 2.0”으로 하며, “배 0.05”를 “배 0.1”로 하고, “복숭아 0.2”를 “복숭아 0.5”로 하며, “부추 1.0”을 “부추 2.0”으로 하고, “사과 0.3”을 “사과 1.0”으로 하며, “오이 0.3”을 “오이 0.5”로 하고, “율무 0.05”를 “율무 0.1”로 하며, “토마토 0.3”을 “토마토 0.7”로 하고, “포도 0.5”를 “포도 1.0”으로 하며, “피망 1.0”을 “피망 2.0”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

구기자	3.0

[별표 3], (7) 다미노자이드(Daminozide) 중 “감자 불검출”, “곡류 불검출”, “과일류 불검출”, “서류 불검출”, “종실류 불검출”, “채소류 불검출”, “콩류 불검출”, “대두 불검출”, “땅콩 불검출”, “멜론 불검출”, “밤 불검출”, “배 불검출”, “배추 불검출”, “버섯류 불검출”, “복숭아 불검출”, “사과 불검출”, “쌀 불검출”, “아몬드 불검출”, “은행 불검출”, “자몽 불검출”, “참깨 불검출”, “체리 불검출”, “카카오원두 불검출”, “커피원두 불검출”, “토마토 불검출”, “포도 불검출”, “피칸 불검출”, “호두 불검출”, “호프 불검출”을 삭제하고, 다음 항목을 신설한다.

농산물	0.01

[별표 3], (38) 메탈락실(Metalaxyl) 중 다음 항목을 신설한다.

아몬드	0.3†

[별표 3], (61) 비펜트린(Bifenthrin) 중 “풋마늘 0.05”를 “풋마늘 0.2”로 한다.

[별표 3], (63) 세톡시딤(Sethoxydim) 중 “대두 0.05”를 “대두 0.05†”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

유채씨	0.05†

[별표 3], (67) 사이플루트린(Cyfluthrin) 중 다음 항목을 신설한다.

밤	0.05

[별표 3], (101) 이미다클로프리드(Imidacloprid) 중 “대두 0.05”를 “대두 1.5†”로 하고, “딸기 0.3”을 “딸기 0.4†”로 한다.

[별표 3], (105) 이프로디온(Iprodione) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대추	5.0

대추(건조)	10

들깻잎	20

[별표 3], (112) 카벤다짐(Carbendazim) 중 “보리 0.05”를 “보리 0.3”으로 한다.

[별표 3], (131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos) 중 다음 항목을 신설한다.

밀	0.4†

[별표 3], (133) 테부코나졸(Tebuconazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

멜론	0.2†

자두	0.9†

[별표 3], (162) 페니트로티온(Fenitrothion : MEP) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고구마	0.05

배	0.5

양파	0.05

[별표 3], (186) 프로클로라즈(Prochloraz) 중 “딸기 0.5”를 “딸기 2.0”으로 하고, “수박 0.5”를 “수박 1.0”으로 한다.

[별표 3], (188) 프로파모카브(Propamocarb) 중 “토마토 1.0”을 “토마토 5.0”으로 한다.

[별표 3], (192) 프로피코나졸(Propiconazole) 중 “대두 0.05”를 “대두 0.06†”으로 하고, “바나나 0.1”을 “바나나 0.1†”로 한다.

[별표 3], (200) 헥사코나졸(Hexaconazole) 중 다음 항목을 신설한다.

자두	0.05

[별표 3], (210) 페나자퀸(Fenazaquin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	2.0

피망	2.0

[별표 3], (228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin) 중 다음 항목을 신설한다.

자두	1.0

[별표 3], (235) 포스티아제이트(Fosthiazate) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

마	0.05

바나나	0.04†

[별표 3], (238) 플루디옥소닐(Fludioxonil) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

강낭콩	0.4†

리마콩(생)	0.4†

풋콩	0.4†

[별표 3], (248) 아바멕틴(Abamectin) 중 다음 항목을 신설한다.

들깻잎	0.7

[별표 3], (285) 아크리나트린(Acrinathrin) 중 다음 항목을 신설한다.

배	0.2

[별표 3], (286) 에트리디아졸(Etridiazole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

[별표 3], (299) 티플루자마이드(Thifluzamide) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

취나물	5.0

[별표 3], (309) 플루톨라닐(Flutolanil) 중 다음 항목을 신설한다.

취나물	7.0

[별표 3], (321) 디노테퓨란(Dinotefuran) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

다채	7.0

살구	1.0

수수	1.0

우엉	0.7

우엉잎	20

자두	2.0

[별표 3], (332) 클로티아니딘(Clothianidin) 중 “블루베리 0.05”를 “블루베리 1.0”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

고구마	0.05

유채씨	0.1

[별표 3], (335) 트리플록시스트로빈(Trifloxystrobin) 중 다음 항목을 신설한다.

두류	0.01†

[별표 3], (337) 티아메톡삼(Thiamethoxam) 중 다음 항목을 신설한다.

유채씨	0.05

[별표 3], (345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin) 중 다음 항목을 신설한다.

시금치	10

[별표 3], (349) 노발루론(Novaluron) 중 다음 항목을 신설한다.

감	0.5

[별표 3], (352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide) 중 다음 항목을 신설한다.

양배추	0.05

[별표 3], (353) 메트코나졸(Metconazole) 중 “풋마늘 0.05”를 “풋마늘 0.2”로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

대추	1.0

대추(건조)	10

[별표 3], (380) 피리달릴(Pyridalyl) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

비트(뿌리)	0.5

비트(잎)	10

[별표 3], (386) 플로니카미드(Flonicamid) 중 “참외 0.3”을 “참외 0.5”로 한다.

[별표 3], (394) 비스트리플루론(Bistrifluron) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.1

옥수수	0.05

풋콩	1.0

[별표 3], (399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen) 중 “피망 1.0”을 “피망 2.0”으로 한다.

[별표 3], (403) 메타플루미존(Metaflumizone) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.05

시금치	10

토마토	0.7

풋콩	0.7

[별표 3], (408) 스피네토람(Spinetoram) 중 “파 0.7”을 “파 0.8†”로 하고, 다음 항목을 신설한다.

사과	0.05

[별표 3], (410) 옥솔린산(Oxolinic acid) 중 다음 항목을 신설한다.

오이	0.7

[별표 3], (415) 크로마페노자이드(Chromafenozide) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

대두	0.05

밤	0.05

풋콩	0.2

[별표 3], (422) 펜티오피라드(Penthiopyrad) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감귤	0.7

매실	1.0

복숭아	0.2

자두	0.2

[별표 3], (424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

건삼	0.05

수삼	0.05

[별표 3], (430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor) 중 “복숭아 0.3”을 “복숭아 0.5”로 한다.

[별표 3], (432) 사플루페나실(Saflufenacil) 중 “강낭콩 0.3†”, “대두 0.05†”, “완두콩 0.05†”, “이집트콩 0.01†”을 삭제하고, “밀 0.03†”을 “밀 0.5†”로 하며, 다음 항목을 신설한다.

두류	0.3†

[별표 3], (437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

매실	1.0

쌀	0.05

취나물	10

[별표 3], (439) 스피로테트라맷(Spirotetramat) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

건삼	0.05

건포도	4.0†

두류	2.0†

두류(생)	1.5†

셀러리	4.0†

수삼	0.05

양파	0.3†

엽채류	5.0†

크랜베리	0.2†

풋콩	1.5†

[별표 3], (442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone) 중 “◎ 잔류물의 정의 : Flupyradifurone과 Difluoroacetic acid의 합을  flupyradifurone으로 함”을 “◎ 잔류물의 정의 : Flupyradifurone”으로 하고, 다음 항목을 각각 신설한다.

감귤	2.0

감귤류	3.0†

감자	0.05†

곡류(쌀제외)	3.0†

당근	0.9†

두류	1.5†

딸기	1.5†

무	0.15†

밀	1.0†

박과과채류	0.4†

블루베리	4.0†

상추	15†

셀러리	9.0†

시금치	30†

양배추	1.5†

양상추	4.0†

옥수수	0.05†

완두	3.0†

핵과류	1.5†

호프	10†

[별표 3], (453) 만데스트로빈(Mandestrobin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

건삼	0.5

매실	5.0

상추	30

수삼	0.2

양상추	30

[별표 3], (455) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

[별표 3], (458) 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

감	0.05

감귤	0.3

무(뿌리)	0.2

무(잎)	7.0

배	0.2

복숭아	0.2

사과	0.2

수박	0.1

오이	0.2

옥수수	0.05

포도	0.5

[별표 3], (459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide) 중 다음 항목을 신설한다.

딸기	2.0

[별표 3], (460) 피카뷰트라족스(Picarbutrazox) 중 다음 항목을 각각 신설한다.

고추	2.0

피망	2.0

[별표 3], (464) ∼ (466)을 다음과 같이 신설한다.

(464) 스피록사민(Spiroxamine)

◎ 잔류물의 정의 : Spiroxamine

바나나	3.0†

(465) 톨펜피라드(Tolfenpyrad)

◎ 잔류물의 정의 : Tolfenpyrad

견과류	0.01†

(466) 펜플루펜(Penflufen)

◎ 잔류물의 정의 : Penflufen

쌀	0.05

[별표 4] (8)의 “가금류고기” 및 “포유류고기”를 각각 “가금류고기(닭고기 제외)” 및 “포유류고기(소고기, 돼지고기 제외)”로 하고, 유의 기준을 삭제한다.

[별표 4] (10)의 “포유류고기”를 “포유류고기(소고기, 돼지고기 제외)”로 하고, 유의 기준을 삭제한다.

[별표 4] (20)의 “가금류고기”를 “가금류고기(닭고기 제외)”로 하고, 알의 기준을 삭제한다.

[별표 4] (58) 포스멧(Phosmet)을 삭제한다.

[별표 4] (58)∼(63)를 각각 (57)∼(62)로 하고, (62) 프로폭서(Propoxur)의 “포유류고기”를 “포유류고기(소고기, 돼지고기 제외)”로 한다.

[별표 4] (64)∼(85)를 각각 (63)∼(84)로 한다.

[별표 5] (1) 겐타마이신(Gentamicin) 중  "닭근육“, ”닭간“, ”닭지방” 및 “닭신장”을 각각 “가금근육”, “가금간”, “가금지방” 및 “가금신장”으로 하고 “다음 항목을 신설한다.

염소근육	0.1

염소간	2.0

염소지방	0.1

염소신장	5.0

양근육	0.1

양간	2.0

양지방	0.1

양신장	5.0

말근육	0.1

말간	2.0

말지방	0.1

말신장	5.0

[별표 5] (2) 나이카바진(Nicarbazin) 중 "닭근육“, ”닭간“, ”닭지방/피부” 및 “닭신장”을 각각 “가금근육”, “가금간”, “가금지방/피부” 및 “가금신장”으로 한다.

[별표 5] (3) 네오마이신(Neomycin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.5

말간	0.5

말지방	0.5

말신장	10.0

[별표 5] (9) 디클라주릴(Diclazuril) 중 다음 항목을 신설한다.

소근육	0.5

소간	3.0

소지방	1.0

소신장	2.0

[별표 5] (17) 살리노마이신(Salinomycin) 중 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.02

양간	0.4

양지방	0.02

양신장	0.5

[별표 5] (22) 아목시실린(Amoxicillin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

[별표 5] (26) 에리스로마이신(Erythromycin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

[별표 5] (30) 옥소린산(Oxolinic acid) 중 "닭근육“, ”닭간“, ”닭지방” 및 “닭신장”을 각각 “가금근육”, “가금간”, “가금지방” 및 “가금신장”으로 하고, 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.05

염소근육	0.05

[별표 5] (31) 옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린 (Oxytetracycline /Chlortetracycline / Tetracycline, 합으로서) 중 "닭근육“, ”닭간“ 및 “닭신장”을 각각 “가금근육”, “가금간” 및 “가금신장”으로 하고, “칠면조근육”, “칠면조간” 및 “칠면조신장” 항목을 삭제하며, 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.2

말간	0.6

말신장	1.2

[별표 5] (41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) 중 다음 항목을 신설한다.

염소근육	0.2

염소간	0.3

염소지방	0.1

염소신장	0.3

[별표 5] (66) 콜리스틴(Colistin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.15

말간	0.15

말지방	0.15

말신장	0.2

[별표 5] (74) 이미도캅(Imidocarb) 중 다음 항목을 신설한다.

염소근육	0.3

염소간	1.5

염소지방	0.05

염소신장	2.0

말근육	0.3

말간	1.5

말지방	0.05

말신장	2.0

[별표 5] (86) 세파졸린(Cefazolin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

[별표 5] (94) 옥시벤다졸(Oxibendazole) 중 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.1

양간	0.2

양지방	0.5

양신장	0.1

염소근육	0.1

염소간	0.2

염소지방	0.5

염소신장	0.1

[별표 5] (96) 카나마이신(Kanamycin) 중 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.1

말간	0.6

말지방	0.1

말신장	2.5

[별표 5] (103) 트리메토프림(Trimethoprim) 중 다음 항목을 신설한다.

사슴근육	0.05

사슴간	0.05

사슴지방	0.05

사슴신장	0.05

토끼근육	0.05

토끼간	0.05

토끼지방	0.05

토끼신장	0.05

[별표 7] 중 제8조를 다음과 같이 한다.

제8조(결과 통보) 식약처장은 농약 또는 동물용의약품의 잔류허용기준 설정에 대한 검토가 완료되면, 시행규칙 별지 제1호의 3서식에 따라 신청자에 통보하여야 한다.

식품의약품안전처 고시 제2016-154호 부칙 제1조제2항 제4호를 다음과 같이 신설한다.

4. 시행일 : 2017년 9월 30일(아래 각 목의 식품유형 명칭 및 각 식품유형의 기준 및 규격)

가. 제4. 7-2 4) (5) 기타동물성유지

나, 제4. 20-1 4) (2) 기타 동물성가공식품

다. 제4. 20-2 곤충가공식품

라. 제4. 22-3 4) (2) 만두피

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1조제1항에도 불구하고 다음 각 호의 구분에 따른 개정규정은 다음 각 호에서 정한 날부터 시행한다.

1. 시행일 : 고시 후 2개월이 경과한 날

가. [별표 3] 농산물의 잔류허용기준 중 (1) 이미녹타딘, (7) 다미노자이드, (14) 디메토에이트, (19) 디코폴, (20) 다이쾃, (22) 디클로플루아니드, (23) 디클로란, (32) 말라티온, (34) 메빈포스, (35) 메토밀, (38) 메탈락실, (40) 메톨라클로르, (41) 메토브로뮤론, (43) 메톡시클로르, (44) 메트리뷰진, (46) 메틸브로마이드, (47) 모노크로토포스, (54) 벤타존, (58) 비에치시, (59) 비터타놀, (61) 비펜트린, (63) 세톡시딤, (66) 사이퍼메트린, (67) 사이플루트린, (68) 사이할로트린, (69) 사이헥사틴, (75) 아진포스메틸, (78) 알라클로르, (79) 알루미늄포스파이드, (82) 에티오펜카브, (84) 에탈플루랄린, (93) 오메토에이트, (101) 이미다클로프리드, (105) 이프로디온, (112) 카벤다짐, (113) 카보페노티온, (114) 카보퓨란, (115) 카복신, (118) 캡탄, (124) 클로로벤질레이트, (129) 클로르펜빈포스, (130) 클로르프로팜, (131) 클로르피리포스, (133) 테부코나졸, (148) 트리플루랄린, (152) 티오벤카브, (153) 파라티온, (155) 파라티온메틸, (157) 퍼메트린, (159) 페나미포스, (162) 페니트로티온, (163) 펜디메탈린, (164) 펜발러레이트, (166) 펜뷰타틴옥사이드, (177) 포스파미돈, (186) 프로클로라즈, (188) 프로파모카브, (192) 프로피코나졸, (194) 피레트린, (200) 헥사코나졸, (210) 페나자퀸, (228) 아족시스트로빈, (235) 포스티아제이트, (238) 플루디옥소닐, (248) 아바멕틴, (285) 아크리나트린, (286) 에트리디아졸, (299) 티플루자마이드, (309) 플루톨라닐, (321) 디노테퓨란, (332) 클로티아니딘, (335) 트리플록시스트로빈, (337) 티아메톡삼, (345) 피라클로스트로빈, (349) 노발루론, (352) 메톡시페노자이드, (353) 메트코나졸, (380) 피리달릴, (386) 플로니카미드, (394) 비스트리플루론, (399) 사이플루메토펜, (403) 메타플루미존, (408) 스피네토람, (410) 옥솔린산, (415) 크로마페노자이드, (422) 펜티오피라드, (424) 피리플루퀴나존, (430) 설폭사플로르, (432) 사플루페나실, (437) 플룩사피록사드, (439) 스피로테트라맷, (442) 플루피라디퓨론, (453) 만데스트로빈, (455) 옥사티아피프롤린, (458) 사이클라닐리프롤, (459) 피플루뷰마이드, (460) 피카뷰트라족스, (464) 스피록사민, (465) 톨펜피라드, (466) 펜플루펜의 개정 규정

2. 시행일 : 고시 후 1년이 경과한 날

가. [별표 4] 및 [별표 5]의 개정 규정

3. 시행일 : 2018년 1월 1일

가. 제1. 3. 62), 제2. 3. 4) (2) 나) ②, 제2. 3. 4) (2) 다) ①, 제4. 10. 10-1 5) (38), 제4. 18. 18-4 5) (6), 제4. 18. 18-5 5) (4), 제4. 18. 18-6 5) (7), 제4. 18. 18-7 5) (5), 제4. 18. 18-8 5) (6), 제4. 18. 18-11 5) (3), 제4. 18. 18-12 5) (4), 제4. 18. 18-13 5) (6)의 개정 규정

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

현  행

개  정(안)

제1. 총칙

1. ～ 3. (생  략

4. 식품원료 분류

1) (생   략)

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(생략)	(생략)
수산물	어류	(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		해양 어류	1) 가오리, 가자미, 갈치, 강달이, 고등어, 꽁치, 날치, 넙치(광어), 노래미, 농어, 다랑어, 대구, 도루묵, 도미, 망둑어, 멸치, 명태, 민어, 박대, 방어, 밴댕이, 뱅어, 병어, 복어, 볼기우럭, 조피볼락(우럭), 볼락, 붕장어, 삼치, 서대, 숭어, 쌍동가리, 양미리, 은대구, 임연수어, 전갱이, 전어, 정어리, 조기, 준치, 쥐치, 청어, 홍어 등 2) 심해성어류 : 쏨뱅이류(적어포함, 연안성제외), 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 체장메기(홍메기), 블랙오레오도리(Allocyttus niger),남방달고기(Pseudocyttus maculatus), 오렌지라피(Hoplostethus atlanticus), 붉평치, 먹장어(연안성 제외), 흑점샛돔(은샛돔), 이빨고기, 은민대구(뉴질랜드계군에 한함) 등 3) (생략)
	-	(생략)	(생략)
	(생략)	(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
기타 동물	-	(생략)	(생략)

2) 동물성 원료

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (생  략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (생  략)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) (생  략)

(2) 식중독균

(본문 생략)

가) (생  략)

나) 클로스트리디움 퍼프린젠스

① (생  략)

② 햄류, 소시지류, 식육추출가공품 : n=5, c=1, m=10, M=100

③ (생  략)

다) 황색포도상구균

① 햄류, 소시지류, 식육추출가공품 : n=5, c=1, m=10, M=100

② ∼ ③ (생  략)

5) ∼ 6) (생  략)

7) 농약의 잔류허용기준

(1) (생  략)

(2) 농산물의 농약 잔류허용기준

① (생   략)

② (생   략)

번호	유효성분
1～58	(생 략)
59	<신 설>
60	<신 설>
61	<신 설>

(3) ∼ (6) (생   략)

8) ∼ 17) (생  략)

4.. 보존 및 유통기준

1) ∼ 13) (생  략)

14) 냉동제품을 행동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통할 수 없다. 다만, 제조업자가 냉동제품인 빵류, 떡류, 초콜릿류, 젓갈류, 과·채주스, 치즈류, 버터류 또는 수산물가공품(살균 또는 멸균하여 진공 포장된 제품에 한함)에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

15) ∼ 27) (생  략)

제3. (생   략)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 9.  (생  략)

10. 특수용도식품

10-1 조제유류

1) ∼ 4)

5) 규격

유 형 항 목	영아용 조제유		성장기용 조제유
		최대권장 기준
(1) ∼ (37)	(생 략)
(38) 대장균군	n=5, c=1, m=<3, M=10(멸균제품은 제외한다.)
(39) ∼ (45)	(생 략)

6) (생  략)

10-2 ∼ 10-8 (생  략)

11. (생  략)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) (생  략)

<신  설>

4) ∼ 6) (생  략)

12-2 ∼ 12-6 (생  략)

13. ∼17. (생  략)

18. 유가공품

18-1 ∼ 18-3 (생  략)

18-4 발효유류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

유형 항목	발효유	농후 발효유	크림 발효유	농 후 크림발효유	발효 버터유	발효유 분말
(1) ∼ (5)	(생 략)
(6) 대장균군	n=5, c=2, m=<3, M=10
(7) ∼ (9)	(생 략)

6) (생  략)

18-5 버터유

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 대장균군: n=5, c=2, m=<3, M=10

(5) ∼ (7) (생  략)

6) (생  략)

18-6 농축유류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

유형 항목	농축우유, 탈지농축우유	가당연유	가당탈지연유	가공연유
(1) ∼ (6)	(생 략)
(7) 대장균군	n=5, c=2, m=<3, M=10	n=5, c=2, m=<3, M=10	n=5, c=2, m=<3, M=10	n=5, c=2, m=<3, M=10
(8) ∼ (9)	(생 략)

6) (생  략)

18-7 유크림류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

유형 항목	유크림	가공유크림
(1) ∼ (4)	(생 략)
(5) 대장균군	n=5, c=2, m=<3, M=10
(6) ∼ (8)	(생 략)

6) (생  략)

18-8 버터류

1) ∼ 4) (생  략)

유형 항목	버터	가공버터	버터오일
(1) ∼ (5)	(생 략)
(6) 대장균군	n=5, c=2, m=<3, M=10
(7) ∼ (11)	(생 략)

5) 규격

6) (생  략)

18-9 ∼ 18-10 (생  략)

18-11 유청류

1) ∼ 4) (생  략)

유형 항목	유청	농축유청	유청단백분말
(1) ∼ (2)	(생 략)
(3) 대장균군	n=5, c=2, m=<3, M=10
(4) ∼ (5)	(생 략)

5) 규격

6) (생  략)

18-12 유당

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 대장균군 : n=5, c=2, m=<3, M=10

(5) ∼ (6) (생  략)

6) (생  략)

18-13 유단백가수분해식품

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (5) (생  략)

(6) 대장균군 : n=5, c=2, m=<3, M=10

(7) ∼ (8) (생  략)

6) (생  략)

19. 수산가공식품류

19-1 어유가공품류

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) (생  략)

(2) 유통·판매하는 제품은 밀봉·포장하여야 한다.<신  설>

(3) (생  략)

19-2 ∼ 19-6 (생  략)

20. ∼ 23. (생  략)

제5. ∼ 제6. (생  략)

제7. 일반시험법

1. (생  략)

2. ∼ 2.2.1.15 (생  략)

2.2.2 비타민류

2.2.2.1 비타민A

가. 삼염화안티몬에 의한 비색정량법

1) ∼ 2) (생  략)

3) 시험용액의 조제

가) (생  략)

나) 추출 :  비누화 후 흐르는 물에 식혀 냉각시키고 실온으로 한 다음 정확히 석유에테르 100 mL를 가한다 유리마개를 하고 15초간 격렬하게 흔든다. 침전이 있으면 그것이 침전될 때까지 방치한다. 다음에 250～300 mL의 분액깔때기에 옮기고 비누화플라스크에 침전물을 남기고 침전물을 씻어 옮길 필요는 없다. 분액깔때기에 1N 수산화칼륨액 100 mL를 가하여 15초간 격렬히 흔든 후 방치하여 분리시킨다. 혼탁된 물층은 버리고 석유에테르층에 0.5N 수산화칼륨액 40 mL를 가해 진탕 혼합하고 다음에 벤젠층을 적어도 4회 물 40 mL씩 매회 15초간 격렬하게 진탕 혼합하여 수세를 반복한다.(수세액에 페놀프탈레인시액으로 알칼리의 반응을 나타내지 않을 때까지 행한다)

다) ∼ 마) (생  략)

4) ∼ 5) (생  략)

나. (생  략)

2.2.2.2 ∼ 3. (생  략)

4. 미생물시험법

4.1 ∼ 4.7 (생  략)

4.8 대장균

4.8.1 ∼ 4.8.2 (생  략)

별표 1. 3단계희석 시험관 5개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계)

(표 생략)

<후단 신설>

별표 2. 3단계희석 시험관 3개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계)

(생  략)

<후단 신설>

5. (생  략)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.7 (생  략)

6.8 농산가공식품류

6.8.1 ∼ 6.8.2 (생  략)

6.8.3 효소식품

6.3.3.1 α-아밀라아제

가. ∼ 나. (생  략)

<신    설>

다. 시험용액의 조제

검체 5.0 g을 정밀히 달아 물 또는 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과하여 검액으로 한다. 20 mL 시험관 2개를 준비하여 각각 시험용, 공시험용으로 한다. 시험용 시험관에 1% 가용성 전분용액 5 mL, 맥바인완충액(pH 7.0) 13 mL와 0.1% 염화칼슘용액 1 mL를 넣고 37℃로 가온하고 검액 1 mL를 넣은 후 37℃에서 20분간 방치 후, 100℃에서 10분간 가열하고 실온에서 냉각한 뒤 4℃, 10,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 사용한다. 별도로 100℃에서 10분간 가열하여 활성을 잃은 검액 1 mL를 위와 같이 조작하여 공시험용으로 한다. 시험용과 공시험용 반응액 0.4 mL에 DNS 용액 1.2 mL를 넣은 것을 시험용액으로 한다.

라. 시험조작

물을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용액의 흡광도는 공시험의 흡광도보다 커야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 검액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다.

<신    설>

마. 효소의 역가 계산

표준물질로 포도당(최순품)을 10 μg/mL ∼ 1,000 μg/mL 농도로 사용하여 검량선을 작성한다. α-아밀라아제의 역가(Unit/g)는 검체 1 g이 함유하는 역가로 1분간 효소가 반응하여 생성되는 포도당의 양을 검량선을 이용하여 포도당의 ug 수로 환산하여 계산한다.

6.8.3.2 프로테아제

가 ∼ 나 (생  략)

<신    설>

다. 시험용액의 조제

검체 약 5.0 g을 정밀히 달아 물 또는 완충액에 녹여 100 mL로 한 다음 여과하여 검액으로 한다. 0.6% 카제인용액 1 mL를 시험관에 넣고 37℃의 항온수욕중에서 가온한 다음 여기에 검액 1 mL를 정확히 넣고 잘 흔들어 섞는다. 곧 37℃의 항온수욕중에 넣고 정확히 10분간 반응시킨 다음 여기에 0.4 M 삼염화초산액 2 mL를 넣고 다시 37℃에서 25분간 방치한 다음 이것을 여과한다. 여액 1 mL를 시험관에 정확히 취하여 0.4 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 포린시액(원액을 3배 희석한 액) 1 mL를 넣어 잘 흔들어 섞는다. 37℃에서 20분간 방치한 다음 발색된 액을 시험용액으로 한다. 이와는 별도로 검액 1 mL를 정확히 취하여 시험관에 넣고 37℃에서 10분간 방치한 후 0.4 M 삼염화초산액 2 mL를 넣어서 혼화하고 0.6% 카제인용액 1 mL를 넣어 37℃에서 25분간 방치한 다음 이하 시험용액과 동일하게 조작하여 공시험용액으로 한다.

라. 시험조작

물을 대조액으로 하여 액층 1 cm, 파장 660 nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 시험용액의 흡광도는 공시험의 흡광도보다 커야 한다. 발색의 정도가 지나쳐 측정이 곤란한 경우는 검액을 희석하여 시험하고 희석배수를 적용한다.

<신    설>

마. 효소의 역가 계산

표준물질로 L-티로신(최순품)을 10 μg/mL ∼ 1,000 μg/mL 농도로 사용하여 검량선을 작성한다. 프로테아제의 역가(Unit/g)는 검체 1 g이 함유하는 역가로 1분간 효소가 반응하여 생성되는 포도당의 양을 검량선을 이용하여 L-티로신의 ug 수로 환산하여 계산한다.

6.9 ∼ 6.14 (생  략)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.3.11 (생   략)

7.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 5) (생   략)

6) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge) : 아민(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

7) (생   략)

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.3.13 ∼ 7.1.4.137 (생   략)

7.1.4.138 프로헥사디온칼슘(Prohexadione -calcium)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 8) (생   략)

9) 음이온 교환 카트리지 : 음이온 교환 수지 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 cc)를 사용한다.

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.139 테트라메쓰린(Tetramethrin)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (생   략)

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 cc)를 사용한다.

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.140 이소티아닐(Isotianil)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 6) (생   략)

7) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge) : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 cc)를 사용한다.

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.141∼7.1.4.145 (생   략)

7.1.4.146 이소펜포스-메틸(Isofenphos -methyl)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (생   략)

5) 후로리실(Florisil) 카트리지 : 후로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(500 mg, 6 cc)를 사용한다.

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.147∼7.1.4.154 (생   략)

7.1.4.155 펜티오피라드(Penthiopyrad)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 5) (생   략)

6) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

7) (생   략)

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.156 피리미설판(Pyrimisulfan)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (생   략)

5) 실리카 카트리지 : 실리카(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) (생   략)

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.157 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (생   략)

5) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc) 또는 이와 동등한 것을 사용한다.

6) (생   략)

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.158 (생   략)

7.1.4.159 설폭사플로르(Sulfoxflor)

가 ∼ 다 (생   략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (생   략)

5) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge) : 아민(1 g) 고정상이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 cc)를 사용한다.

6) (생   략)

마 ∼ 아 (생   략)

7.1.4.160∼7.1.4.175 (생   략)

7.1.4.176 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

가. 시험법 적용범위

과일류, 채소류, 콩류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 플루피라디퓨론 및 디플루오로아세트산을 1% 아세트산이 포함된 아세토니트릴로 추출한 후 헥산으로 액-액 분배한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) (생   략)

라. 시약 및 시액

1) 용매：잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) (생   략)

3) 표준원액 : 플루피라디퓨론 및 디플루오로아세트산 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) (생   략)

마. 시험용액의 조제

1) 추출
검체를 분쇄하여 균질화한 후 5 g(콩류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 것 중 5 g, 과일류․채소류는 약 1 kg을 잘게 갈아 혼합한 5 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(건조 검체의 경우 물 10 mL를 넣어 2시간 방치) 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 25 mL를 가하여 진탕기에서 5분간 진탕한다. 이 추출물에 무수 황산마그네슘 6 g을 첨가하여 1분간 추가로 진탕한 후 원심분리기를 이용하여 4℃에서 2,000 G 으로 원심분리하고 상등액을 250 mL 분액깔대기에 옮긴다. 상등액에 헥산 50 mL를 가하고 심하게 흔든 후, 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 헥산층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 여액 중 2 mL만 취해 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 측정조건

가) 칼럼 : C18 (2.1 mm i.d. × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상 :

(1) 이동상 A : 0.1% 아세트산 수용액

(2) 이동상 B : 0.1% 포름산 포함 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	100	0
3	100	0
6	50	50
7	70	30
8	90	10
10	100	0

라) 이동상 유량 : 0.2 mL/min

마) 주입량 : 5 μL

바) 이온화 :

(1) ESI positive-ion mode : 플루피라디퓨론

(2) ESI negative-ion mode : 디플루오로아세트산

사) Cone voltage : 30 V

아) 분자량 범위 : 30～500 m/z

<신    설>

2) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

A

B

그림.

액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

A, 플루피라디퓨론 (7.1 분);

B, 디플루오로아세트산 (2.1 분)

4) 정량한계

0.005 mg/kg

사. (생   략)

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성 이온으로 플루피라디퓨론 및 디플루오로아세트산을 확인한다.

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루피라디퓨론	288.7	289	90	40
			126	20
디플루오로 아세트산	96.5	95	51	10

7.1.4.177 ∼ 7.1.4.207 (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 일반사항

1) (생  략)

2) 시험법 적용범위에 대상식품이 해당되지 않을 경우에도 해당 동물용의약품의 정량시험법에 준하여 시험할 수 있다.

<신  설>

<신  설>

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.2 (생  략)

8.3.3 나이카바진(Nicarbazine), 데코퀴네이트(Decoquinate), 디싸이클라닐(Dicyclanil), 디아베리딘(Diaveridine), 디클라주릴(Diclazuril), 로베니딘(Robenidine), 록사손(Roxarsone), 암프롤리움(Amprolium), 에토파베이트(Ethopabate), 이미도캅(Imidocarb), 죠렌(Zoalene), 클로피돌(Clopidol), 할로푸지논(Halofuginone), 톨트라주릴(Toltrazuril)

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험조작

가) (생   략)

나) 질량분석기 조건

(1) ∼ (3) (생   략)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	(생 략)
2	(생 략)
3	디싸이클라닐 (Dicyclanil)	Nega tive	7.68	407.6	405.1	333.9	28.0
						299.0	42.0
					407.0	336.0	24.0
4	(생 략)
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Posi tive	2.10	190.2	191.0	150.0	27.0
						149.8	29.0
						163.1	23.0
6	(생 략)
7	(생 략)
8	(생 략)
9	(생 략)
10	(생 략)
11	(생 략)
12	(생 략)
13	(생 략)
14	(생 략)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) ∼ 8) (생   략)

8.3.4 (생   략)

8.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

바) (생   략)

5) ∼ 9) (생   략)

8.3.6 (생   략)

8.3.7 니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)

1) (생  략)

2) 분석원리

검체 중의 푸라졸리돈, 푸랄타돈, 니트로푸라존 및 니트로푸란토인의 대사물질을 염산용액으로 처리하여 니트로벤즈알데히드(NBA)로 유도체화한 후 에틸아세테이트로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) (생  략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 아) (생  략)

자) 0.125 M 염산(HCl) : 500 mL 용량플라스크에 5 M 염산 25 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) (생  략)

<신  설>

카) 1 M 인산칼륨 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 제이인산칼륨(K2HPO4) 175.6 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

타) 0.1 M 인산칼륨 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 제이인산칼륨(K2HPO4) 17.56 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

파) 1 M 수산화나트륨(NaOH) 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 수산화나트륨 39.99 g을 넣고 물로 녹인 후 표시선까지 채운다.

하) 10 mM 개미산암모늄 (Ammonium formate) : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

15) (생  략)

5) 시험용액의 조제

가) (생  략)

나) 축산물

균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하여,

㉡{내부표준물질 혼합용액(100 ng/mL)  40 μL를  첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 0.05 M 유도체화용액 100 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 10 mL와 1 M 수산화나트륨용액 1 mL를 가해서 약 pH 7.4로 조정한다.

이 시험용액의 잔류물을 제거하기 위해 4℃에서 4,800 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL를 가하여 혼합한 후 4℃에서 4,800 G로 15분간 원심분리하고 하층액을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 7 mL를 가하여 혼합하고 4℃에서 4,800 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다.

이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 40℃ 수욕액상에서 질소농축하여 건조한 후 50% 메탄올 1 mL에 용해시켜 7,500 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막 여과지(Membrane filter)로 여과하여} 시험용액으로 한다.

<신  설>

다) 수산물

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여, ㉢{내부표준물질 혼합용액(100 ng/mL) 200 μL를 첨가하여 15분간 정치한 후 0.125 M 염산 10 mL와 0.05 M 유도체화용액 200 μL를 넣고 37℃ 항온수조에서 흔들어 주면서 16시간 반응시킨다. 유도체화된 시험용액을 실온까지 냉각시킨 후 0.1 M 인산칼륨용액 1 mL과 1 M 수산화나트륨용액 500 μL를 가해서 혼합한다. 0.125 M 염산용액과 0.125 M 수산화나트륨용액으로 약 pH 7.0으로 조정한다. 이 시험용액의 잔류물을 제거하기 위해 4℃에서 4,800 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다. 상층액을 50 mL 원심분리관에 옮겨 헥산 10 mL를 가하여 혼합한 후 4℃에서 4,800 G로 15분간 원심분리하고 하층액을 새로운 원심분리관에 취하고 에틸아세테이트 8 mL를 가하여 혼합하고 4℃에서 4,800 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취하여 유리관에 넣는다. 이런 과정을 2회 반복하여 얻어진 상층액을 40℃ 수욕액상에서 질소농축하여 건조한 후 이동상 0.5 mL에 용해시켜 7,500 G에서 15분간 원심분리한다. 상층액을 0.2 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여} 시험용액으로 한다.

6) 표준용액의 유도체화

음성 검체(Blank sample) 5 g(벌꿀의 경우 2 g, 축산물의 경우 1 g)을 50 mL 원심 분리관에 넣고 니트로푸란계 대사물질 혼합표준용액 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 100 ng/mL(축산물의 경우 10 ng/mL, 20 ng/mL, 40 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL)를 각각 100 μL를 첨가하여 5)의 ㉠(벌꿀의 경우), ㉡(축산물의 경우), ㉢(수산물의 경우)을 각각 따른 후 표준용액으로 사용한다.

7) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프의 측정조건

(가) 칼럼：C18(2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상 : 메탄올 : 10 mM 개미산암모늄(55:45, 개미산으로 pH 3.5로 조정)

(다) 유속 : 0.2 mL/분

(라) 칼럼온도 : 40℃

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Capillary voltage : 4.0 kV

(라) Collision gas : Ar(아르곤)

(마) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

연번	물질명 (Compound)	분석물질	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	AOZ	2-NP -AOZ	2.5	235	236	78	30
						104	11
						149	11
						134	11
2	AMOZ	2-NP -AMOZ	1.9	334	335	128	21
						262	15
						291	8
3	SEM	2-NP -SEM	2.6	208	209	149	11
						166	7
						192	11
4	AHD	2-NP -AHD	2.5	248	249	104	20
						134	10
						178	16
5	AOZ-D4	2-NP -AOZ-D4	2.5	239	240	134	11
6	AMOZ-D5	2-NP -AMOZ-D5	1.9	339	340	296	11

8) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 유도체화된 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율이 20～30 % 이내에서 일치하여야 한다. ※ 주2) 참조

주2) 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %~≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %~≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

2-NP-AOZ (2.5분, 0.002 mg/L)

2-NP-AMOZ (1.9분, 0.002 mg/L)

2-NP-SEM (2.6분, 0.002 mg/L)

2-NP-AHD (2.5분, 0.002 mg/L)

2-NP-AOZ-d4 (2.5분, 0.002 mg/L)

2-NP-AMOZ-d5 (1.9분, 0.002 mg/L)

그림 1. 유도체화한 표준품의 크로마토그램

9) 정량시험

가) (생  략)

나) 정량한계：각각 0.001 mg/kg

8.3.8∼8.3.16 (생  략)

8.3.17 바시트라신(Bacitracin)

1) (생  략)

2) 분석원리

검체를 물로 균질화하여 끓이고 아세톤 및 염산을 넣어 교반한 후 원심분리하고 감압농축한다. 이 액을 수산화나트륨용액으로 알칼리화한 다음 부탄올 및 0.005 N 염산으로 추출하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

<신   설>

<신   설>

가) 표준원액 : 바시트라신 표준품의 무게를 달아 완전하게 용해되는 용매에서 용해시켜 1 mg/mL의 농도로 조제한다.

나) 표준용액 : 표준원액을 증류수로 적당히 희석해서 표준용액으로 한다.

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

<신   설>

5) 시험용액의 조제

검체 10 g을 달아 물 30 mL를 가하고 균질기로 균질화해서 5분간 끓이고 냉각한 후 아세톤 60 mL를 가해 4 N 염산으로 pH 3.5로 하여 2분간 교반한다. 이들을 원심분리하고 그 상등액을 취한다. 침전물은 60% 아세톤 100 mL로 씻어주고 그 세액을 상등액에 합하고 40 mL로 될 때까지 감압농축한다. 이들을 1 N 수산화나트륨용액으로 pH 8.0으로 조정한 후 분액깔때기에 옮기고 n-부탄올 80 mL씩으로 2회 각각 2분간 진탕 혼합해서 추출하고 n-부탄올을 따로 분액깔때기에 합한다. 0.005 N 염산 100 mL씩으로 2회 각각 3분간 진탕혼합 역추출하고 수층을 가지형 플라스크에 합하고 1 N 수산화나트륨용액으로 pH 8.0으로 조정하고 감압증발건조한 다음 물 1 mL로 녹여 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：길이 100 mm, 내경 2.1 mm, 전다공성화학결합실리카충전칼럼

(2) 검출기 및 파장：자외선흡광검출기(UV photometric detector) 254 nm

(3) 이동상：메탄올 50 mL와 물 750 mL를 1 L의 메스실린더에 취하고 이어서 0.1 M 인산이수소칼륨(pH 4.5) 200 mL를 가해서 잘 혼합한다.

(4) 유속：0.9 mL/분

7) 정량시험

표준용액을 측정조건에 따라서 액체크로마토그래피를 행하고 피크 머무름 시간(retention time)을 측정한다. 이어서 시험용액에 대해서도 똑같이 조작하고 검출한 검체 피크의 머무름 시간(retention time)을 구하고 미리 표준용액에 대해서 피크높이법에 따라 검량선을 작성하고 이에 따라 바시트라신의 양을 구한다.

8.3.18∼8.3.22 (생   략)

8.3.23 스펙티노마이신(Spectinomycin)

8.3.23.1 제1법

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 사) (생   략)

아) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (6 cc, 200 mg,) 또는 이와 동등한 것

자) (생   략)

5) ∼ 7) (생   략)

8.3.23.2 (생   략)

8.3.24∼8.3.25 (생   략)

8.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G), 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 옥사실린(Oxacillin), 페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 하) (생   략)

거) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지 (500 mg, 6 cc) 또는 이와 동등한 것

자) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.27 폭심(Phoxim)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 마) (생   략)

바) Silica 카트리지(6 cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

사) (생   략)

5) 시험용액의 조제

균질화한 시료 5 g을 원심분리관에 취하고 아세토나이트릴 20 mL를 가하여 200 G으로 20분간 진탕 추출한다. 원심분리기로 7℃에서 5000 G으로 5분간 원심분리 후 상층액을 취한 다음 다시 아세토나이트릴 20 mL를 가해 다시 추출한다. 모은 상층액 40 mL를 250 mL 농축플라스크에 넣어  감압 농축한 후 n-헥산 5 mL로 2번 재용해하여 n-헥산 10 mL로 활성화된 실리카 카트리지(6 cc, 500 mg)에 적재한다. 적재가 끝난 카트리지에 디클로로메탄 20 mL로 용출하여 40℃에서 질소로 농축시킨 후 아세토니트릴 500 μL로 재 용해한다. 이 시료용액을 막 여과지(membrane filter)를 사용하여 여과한 후 2 mL 갈색 바이알(Vial)에 옮겨 분석 전까지 -4℃이하의 냉장고에 보관하고, 이를 시험용액으로 한다.

6) ∼ 7) (생   략)

8.3.28∼8.3.32 (생  략)

8.3.33 에리스로마이신(Erythromycin), 버지니아마이신(Virginiamycin)

1) (생  략)

2) 분석원리

검체 중의 에리스로마이신과 버지니아마이신을 아세토니트릴/메탄올(95:5) 용액으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

(생  략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 나) (생  략)

다) 표준원액 : 에리스로마이신(에리스로마이신 A) 및 버지니아마이신(버지니아마이신 M1) 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 한다. 조제된 표준용액을 냉장보관 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 30% 아세토니트릴로 희석하여 사용한다.

<신   설>

<신   설>

마) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

가) 어류 및 갑각류

균질화한 검체 10 g을 500 mL 원심분리관에 취하고 70% 아세토니트릴 100 mL와 하이플로슈퍼셀(hyflosuper cell) 5 g을 각각 첨가하여 2분간 균질화한 후 4,000 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 500 mL 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 7 g을 첨가하여 10분간 강하게 진탕, 정치시킨 후 하층액은 버린다. 상층액에 아세토니트릴포화헥산 100 mL를 첨가하여 10분간 완전히 혼합한 후 정치시킨다. 하층을 45℃에서 감압 농축한 후 잔류물은 90% 메탄올 2 mL에 녹인다. 이 용액을 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 어류 및 갑각류 외 식품

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고, 아세토니트릴/메탄올(95:5) 용액 20 mL를 가한 후 5분간 균질화한다. 이 액을 2,500 G에서 10분간 원심분리하고 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 아세토니트릴포화헥산 20 mL를 가하여 15분간 흔들어 주고 2,500 G에서 10분간 원심분리한다. 하층액을 취하여 막 여과지(membrane filter)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 25℃

(다) 이동상 : 아세토니트릴/15 mM 개미산 암모늄(개미산으로 pH 4.5 조정)(40:60)

(라) 유속 : 0.2 mL/분

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy : 에리스로마이신 22 V, 버지니아마이신 14 V

7) 정량시험

표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후 크로마토그램으로부터 얻은 피크의 머무름 시간을 비교하고, 에리스로마이신은 m/z 576 이온, 버지니아마이신은 m/z 508 이온에 대한 면적을 각각 구하고 검량선을 작성하여 검체 중 에리스로마이신과 버지니아마이신 함량을 각각 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
에리스로마이신	734	576
버지니아마이신	526	508

<신   설>

제8.3.34∼8.3.36 (생  략)

8.3.37 오르메토프림(Ormethoprim)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 0.2 N 황산으로 추출하여 알카리성으로 하여 에틸아세테이트로 추출한다. 에틸아세테이트층을 감압증발건조한 후 잔류물을 0.5% 과염소산․메탄올(7：3)의 혼합액에 녹여 액체크로마토그래프로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 유기용매∶잔류농약 시험용

나) 표준원액：오르메토프림 10 mg을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mL로 한다.

다) 표준용액：오르메토프림 표준원액 5 mL를 취해 메탄올을 넣어 100 mL로 한다.

라) 완충용액(pH 11)：0.1 M 탄산나트륨 96.5 mL와 붕산-염화칼륨용액(붕산 6.2 g 및 염화칼륨 7.45 g을 물에 녹여 1,000 mL로 한다) 3.5 mL 혼합한다.

마) 기타시약：최순품

5) 시험용액의 조제

검체 5 g을 달아 0.2 N 황산 20 mL 및 클로로포름 15 mL를 넣어 균질기로 균질하게 한 후 2,500～3,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 분액깔때기에 취한다. 잔류물은 0.2 N 황산 15 mL로 위의 조작을 되풀이한 후 상등액을 위의 분액깔때기에 합한다. 이 액에 1 N 수산화나트륨용액을 넣어 pH 12로 조정하여 방치한 후 염화나트륨 5 g 및 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 10분간 진탕하여 상층액을 취한다. 다시 하층에 에틸아세테이트 50 mL로 위의 조작을 되풀이하여 상층액을 위의 액에 합한다. 에틸아세테이트층에 황산나트륨(무수) 5 g을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 방치한 후 탈수여과하고 감압증발건조한다. 잔류물을 0.5% 과염소산․메탄올(7：3)의 혼합액 1 mL로 녹여 이를 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：길이 250 mm, 안지름 4.6 mm Nucleosil 10 C18, 4.6 mm i.d.x 250 mm

(2) 이동상용매：0.5% 과염소산 및 메탄올(7：3)의 혼합액

(3) 측정파장：230 nm

7) 정량시험

오르메토프림 표준용액을 취하여 메탄올을 감압증발건조한 후 0.5% 과염소산․메탄올(7：3)의 혼합액으로 녹여 각각 0.25, 0.5, 1.0 및 2.0 μL/mL의 용액을 만든다. 이들 용액 및 시험용액 20 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 오르메토프림의 함량을 구한다.

8.3.38∼8.3.39 (생   략)

8.3.40 독시싸이클린(Doxycycline), 미노싸이클린(Minocycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline),  테트라싸이클린(Tetracycline)

8.3.40.1 (생   략)

8.3.40.2 제2법

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 바) (생   략)

아) 페닐(Phenyl) 카트리지 : 페닐 충진제(1,000 mg, 6cc) 또는 이와 동등한 것

사) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(150 mg, 6cc) 또는 이와 동등한 것

아) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.41 (생   략)

8.3.42 올레안도마이신(Oleandomycin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 올레안도마이신을 아세토니트릴/메탄올(95:5) 혼합용액으로 추출한 후 헥산으로 지방성분을 제거하고 디클로로메탄으로 추출하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：올레안도마이신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올 10 mL를 가하여 잘 녹인 다음 메탄올로 표시선까지 채워 100 mg/L의 농도가 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 메탄올로 적당한 농도가 되도록 희석하여 사용한다.

마) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하여 아세토니트릴/메탄올(95：5) 혼합용액 25 mL와 무수황산나트륨 5 g을 첨가하고 균질기로 2분간 균질화한 후 30분간 진탕한다. 이 액을 5분간 원심분리(3,000 G)하여 상층액을 취하여 농축플라스크에 옮기고 잔류물에 대하여는 아세토니트릴/메탄올(95：5) 혼합용액 15 mL를 가하여 5분간 원심분리(3,000 G)한 후 상층액을 합친다. 모아진 상층액은 2 mL 정도가 되도록 35℃에서 감압 농축한다. 이 농축액에 0.05 M 인산완충용액(pH 8.0)/아세토니트릴(70：30) 혼합용액 10 mL를 가하여 분액깔때기로 옮긴 후 헥산 10 mL를 가하고 진탕한다. 헥산층을 버리고 디클로로메탄 20 mL를 가하여 진탕한 후 디클로로메탄층을 취한다. 이를 35℃에서 감압농축으로 건조시키고, 30% 아세토니트릴 15 mL를 가하여 잔류물을 녹여 막 여과지(membrane filter)로 여과한 후 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼：C18(2.1×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상：0.2% 초산과 10 mM 초산암모늄을 포함하는 수용액：아세토니트릴(60:40)

(다) 칼럼온도：25℃

(라) 유속：0.2 mL/분

(마) 주입량：10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization：ESI(positive)

(나) Spray Voltage：4.0 kV

(다) Sheath gas：질소(40 psi)

(라) Capillary Temperature：350℃

(마) Auxiliary gas：질소 (18 psi)

(바) Collision gas：아르곤

(사) Collision Voltage：20 V

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간(retention time)을 비교하고 m/z 545의 피크에 대한 평균면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 올레안도마이신의 함량을 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
올레안도마이신	689	545

8.3.43∼8.3.54 (생   략)

8.3.55 틸미코신(Tilmicosin)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 메탄올로 균질화하여 원심분리한 후 추출액을 염용액으로 희석하고 사염화탄소로 분액화하여 수층을 알칼리화한 다음 클로로포름/헥산으로 틸미코신을 추출하여 건조시킨 후 잔류물을 용해하여 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 표준원액(240 μg/mL)：100 mL 메스플라스크에 건조하여 보정한 24.0 mg을 달아 메탄올로 용해한 후 알루미늄박으로 싸서 냉장보관한다

나) 표준용액：검량선을 작성하기 위하여 먼저 표준원액으로부터 5.0 mL를 취하여 메탄올로 100 mL가 되게 하여 12.0 μg/mL을 만든 후 2.4, 1.2, 0.48, 0.24 및 0.12 μg/mL를 만든다.

다) 1 M 디부틸암모늄 인산완충용액(DBAP, dibutyl Ammonium phosphate buffer)：물 700 mL에 디부틸아민 168 mL를 가하고 자석 교반막대로 서서히 회전시키면서 디부틸아민이 완전히 녹을 때까지 인산을 가한다. 실온으로 되게한 후 인산으로 pH 2.5～2.6으로 조정하여 물로 1 L가 되게 채운 다음 진공으로 여과한다.

라) 검체희석용액：물 400 mL에 메탄올 500 mL와 1 M DBAP 25 mL를 가하고 물로 1 L가 되게 한다.

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 10±0.1 g에 메탄올 30±1 mL를 가해 균질화하여 원심분리관에 넣고 2,000 rpm 10분간 원심분리한다. 이 때 양성대조시료(positive control)는 균질화한 음성대조 검체 10 g당 12.0 μg/mL용액 2 mL를 가하여 2.4 ppm으로 조제하여 사용한다. 상층액을 분액깔때기에 취하고 아래 부분에 남은 잔류물은 메탄올 30±1 mL를 가하여 완전히 재현탁시켜 다시 동일하게 원심분리한 후 상층액을 분액깔때기에 합한다. 조직추출액이 들어 있는 분액깔때기에 10% 염화나트륨용액 60±1 mL를 가하고 사염화탄소 50±1 mL(지방과 지방이 붙어있는 피부의 경우 15±1 mL)를 가하고 혼합하여 층이 분리되도록 한 후 아래층의 사염화탄소층을 제거한다. 다시 한번 사염화탄소 25±1 mL(지방과 지방이 붙어있는 피부의 경우 10±1 mL)를 가하여 혼합하여 층이 분리되게 한 후 아래층을 제거한다. 0.5 M 탄산나트륨용액을 가하여 추출용액의 pH를 9.0±0.4이 되도록 조정한다. 이때 pH 9.4를 초과하면 1 N 염산용액으로 낮춘다. 그 다음 클로로포름：헥산(2：1) 용액 20±1 mL를 가하여 혼합하고 층이 분리되도록 한 후 아래층의 클로로포름：헥산(2：1)을 200 mL용의 농축플라스크에 취한다. 다시 한번 클로로포름：헥산(2：1) 용액 20±1 mL을 가하여 혼합하고 농축플라스크에 합한 후 40℃이하 온도하에서 클로로포름：헥산층을 건조시킨다. 건조시킨 후 즉시 검체희석용액 2.0±0.05 mL를 가하여 용해한 다음 30초간 초음파를 가한다. 0.45 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：Adsorbspher Phenyl (Alltech사, 4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것.

(2) 이동상

(가) 이동상 A(아세토니트릴: 물(1:1), pH 2.5)  : 아세토니트릴 500 mL에 물을 가하여 약 950 mL가 되도록 한 후 자석 교반막대로 회전시키면서 pH 2.5로 조정하여 물로 1 L가 되게 한 후 여과한다.

(나) 이동상 B(물, pH 2.5)  : 인산을 사용하여 물의 pH 2.5로 조정한 후 여과한다.

(다) 이동상 C(0.08 M DBAP용액) : 1 M DBAP용액 80 mL를 물로 1 L가 되도록 한 후 여과한다.

(3) 유속：1.5 mL/분

(4) 측정파장：280 nm

(5) 주입량：100 μL

(6) 농도구배 조건

Time	%A	%B	%C
0.00	100	0	0
3.00	100	0	0
4.00	55	30	15
11.00	55	30	15
12.00	100	0	0
20.00	100	0	0

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 100 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 틸미코신의 함량을 구한다. 조직내 틸미코신의 농도(ppm)는 A x B x C/D〔A; 추출용액내 틸미코신의 농도(μg/mL), B; 검체희석용액의 첨가량(2.0 mL), C; 희석배수, D; 검체무게(10 g)로 계산한다.

8.3.56∼8.3.57 (생   략)

8.3.58 조사마이신(Josamycin), 키타사마이신(Kitasamycin)

1) (생   략)

2) 분석원리

검체 중 조사마이신, 키타사마이신을 메탄올:아세토니트릴(5:95) 혼합용액으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) (생   략)

나) 표준원액 : 조사마이신, 키타사마이신 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L로 한다.

다) 표준용액 : 표준원액을 30% 아세토니트릴 용액으로 희석하여 조사마이신은 0.1, 0.2, 0.4, 0.6 및 0.8 mg/L, 키타사마이신은 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 및 4.0 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준용액은 냉장보관 한다.

라) ∼ 마) (생   략)

5) (생   략)

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

- 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

- 칼럼온도 : 25℃

- 이동상 : 0.05% 개미산 용액:아세토니트릴 (3:7)

- 유속 : 0.3 mL/분

- 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

- Ionization : ESI(positive)

- Capillary Temperature : 350℃

- Collision gas : 아르곤(Ar)

- Collision energy : 조사마이신(65 V), 키타사마이신(49 V), 카페인(31 V)

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간(retention time)을 비교하고, 내부표준물질 카페인의 m/z 138에 대한 조사마이신 m/z 109, 키타사마이신 m/z 174의 면적비를 각각 구하고 검량선을 작성하여 시험용액 중 각각의 함량을 구한다.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
조사마이신	828	109, 174, 229
키타사마이신	772	174, 109, 215
내부표준물질 (카페인)	195	138

나) 정량한계

(1) 조사마이신 : 0.01 mg/kg

(2) 키타사마이신 : 0.03 mg/kg

8.3.59∼8.3.65 (생   략)

8.3.66 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 사) (생   략)

아) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(150 mg, 6cc) 또는 이와 동등한 것

자) ∼ 차) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.67 (생   략)

8.3.68 트리메토프림(Trimethoprim)

1) 시험법 적용범위

축산물과 수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 트리메토프림을 아세토니트릴 : 물 (1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% TCA 용액(1:1) 혼합액]으로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 클로로포름으로 분배하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 고속액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수

다) 표준원액 : 트리메토프림 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 용해시켜 100 mg/L로 한다.

라) 표준용액 : 표준원액을 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액으로 희석하여 알(卵)분석법 0.05, 0.1, 0.2, 0.3 및 0.4 mg/L가 되게 하고, 알(卵) 외의 분석법은 0.125, 0.25, 0.5, 0.75 및 1.0 mg/L가 되게 한다.

마) 5% 삼염화초산 용액 : 삼염화초산(Trichloroacetic acid) 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

바) 염화암모늄-암모니아 완충용액 : 염화암모늄 67.6 g을 암모니아수 570 mL에 녹이고 물을 넣어 1000 mL로 한다.

사) 기타시약 : 특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 : 물 (1:1) 혼합액[유(乳)의 경우는 아세토니트릴 : 5% 삼염화초산 용액(1:1) 혼합액] 20 mL를 가한 후 1분간 진탕한 다음 3,000 G에서 10분간 원심분리를 시킨다. 상층액 10 mL를 다른 원심분리관에 옮긴 후 헥산 5 mL를 가하여 1분간 진탕한다. 이 용액을 1,000 G에서 5분간 원심분리하여 헥산층(상층)을 버리고 남은 액에 염화암모늄-암모니아 완충용액을 넣어 pH 10으로 맞춘다. 이 용액에 20 mL 클로로포름을 넣고 1분간 진탕한 후 1,000 G에서 5분간 원심분리하고, 물층(상층)을 버린 후 클로로포름층(아랫층)을 40℃에서 질소농축한다. 잔사(residue)를 아세토니트릴 : 물(2:1) 혼합액 1 mL에 용해시킨 후 0.2 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(1.5 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도 : 40℃

(3) 이동상

․이동상 A : 0.1% 초산 용액

․이동상 B : 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴 용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	99.5	0.5
2.0	99.5	0.5
10.0	20	80
15.0	20	80
20.0	99.5	0.5
25.0	99.5	0.5

(4) 유속 : 0.25 mL/분

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 측정조건

(1) Inoization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350 ℃

(3) Collision gas : 아르곤

(4) Collision Energy : 23 V

다) 표준품의 크로마토그램

트리메토프림 RT 5.7분

7) 정량시험

가) 표준용액과 시험용액을 각각 질량분석기에 주입하여 아래표의 특이이온(specific ion)을 확인한다. 이후, 각각에서 얻은 크로마토그램으로부터 머무름 시간(retention time)을 비교하고, 표준용액의 피크의 면적으로 검량선을 작성하여 시험용액 중 트리메토프림의 함량을 구한다.

물 질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
트리메토프림	291	230

나) 정량한계 : 0.001 mg/kg

8.3.69∼8.3.86 (생   략)

8.3.87 카르바콜(Carbachol)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) 약양이온교환 카트리지 : WCX(Weak Cation Exchange) 카트리지(6cc, 500 mg) 또는 이와 동등한 것

바) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.88 ∼ 8.3.92 (생   략)

8.3.93 폴리믹신 비(Polymyxin B)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) Plexa 카트리지 : N-vinylpyrrolidine과 Divinylbenzene이 Copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) ∼ 자) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.94∼8.3.95 (생   략)

8.3.96 푸마길린(Fumagillin)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) Strata-X 카트리지 : 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) ∼ 차) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.97∼8.3.100 (생   략)

8.3.101 세파드록실(Cefadroxil)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) MCX 카트리지(3cc, 60 mg) 또는 이와 동등한 것

바) ∼ 자) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.102∼8.3.103 (생   략)

8.3.104 니트로푸라존(Nitrofurazone)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 바) (생   략)

사) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

아) ∼ 자) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.105∼8.3.106 (생   략)

8.3.107 콜리스틴(Colistin)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 마) (생   략)

바) HLB(Hydrophilic lipophilic balance) 카트리지(6 cc, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

사) ∼ 아) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.108∼8.3.115 (생   략)

<신  설>

9. (생  략)

10. 식품 중 유해물질

10.1∼ 10.8 (생  략)

10.9  3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol)

가. (생  략)

나. 분석원리

알루미늄옥사이드와 혼합하여 크로마토그래프용 유리칼럼에 충진한 다음 디클로로메탄으로 추출하고 HFBA(h eptafluorobutyric anhydride)로 유도체화한 후 기체크로마토그래프/질량분석기로 분석하는 방법이다.

다. (생  략)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (생  략)

3) 알루미늄옥사이드 : 알루미늄옥사이드(150 mesh) 또는 이와 동등한 것.

4) (생  략)

5) 표준용액 : 위의 표준원액을 초산에틸로 희석하여 4개 이상의 적당한 농도로 조제한다.

6) (생  략)

7) 내부표준용액 : 위의 내부표준원액을 초산에틸로 희석하여 적당한 농도로 조제한다.

8) (생  략)

마. 시험 용액의 조제

1) 추출

균질화한 검체 5 g을 정확히 달아 5 M NaCl용액을 가하여 30 mL가 되게 한 뒤 10분간 진탕한 후 원심분리 한다. 이 상층액 2 mL를 취해 알루미늄옥사이드 4 g과 내부표준용액 10 μL를 첨가하여 혼합한 후 크로마토그래프용 유리칼럼(25 mm x 200 mm)에 충진한다. 그리고, 충진물 상단에 무수황산나트륨 약 1 g을 가한 뒤 디클로로메탄 30 mL을 분당 약 2 mL 정도로 용출한다. 용출액을 농축플라스크에 모아 35℃의 항온수조에서 1 mL로 감압농축 한 후 농축액을 파스퇴르 피펫을 이용하여 눈금이 있는 시험관으로 옮긴다. 플라스크에 남아있는 잔류물을 디클로로메탄으로 씻어 시험관에 합친 후, 35℃의 항온수조에서 건조수준으로 질소 농축한다.

단, 지방함량이 많은 검체는 크로마토그래프용 유리칼럼 용출단계에서 먼저 헥산 20 mL로 과량의 지방성분을 제거한 후 디클로로메탄으로 용출하여 상기와 같은 방법으로 농축과정을 거친다.

2) 유도체화

위의 농축 시험관에 이소옥탄(Isooctane) 1 mL 및 HFBA 150 μL를 첨가하여 마개를 닫고 60℃의 항온수조에서 교반하며 30분간 반응시킨 후 상온에서 10분간 방치한 다음 증류수 5 mL를 가하고 가볍게 흔든 후 정치한다. 상층의 유기용매층을 취하여 소량의 무수황산나트륨이 들어있는 시험관에 넣어 가볍게 흔들어 정치시킨 다음 상층액을 취하여 시험용액으로 한다. 표준시험용액은 마개가 있는 시험관에 농축용액 대신에 이소옥탄(Isooctane) 900 μL와 농도가 다른 4개의 표준용액 100 μL, 내부표준용액 10 μL 및 HFBA 150 μL를 첨가하여 상기와 같은 순서로 유도체화한 용액을 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프/질량분석기 측정 조건

가) ∼ 사) (생  략)

아) 특성이온질량

MCPD 유도체 화합물 :

m/z 253, 275, 289, 291, 453

내부표준물질 유도체 화합물 :

m/z 257, 278, 294, 296, 456

2) (생  략)

3) 표준품의 크로마토그램

그림 1. 내부표준품(3-MCPD-d5)과 표준품(3-MCPD)의 크로마토그램

4) 표준품의 스펙트럼

그림 2. 내부표준품(3-MCPD-d5, 위)과 표준품(3-MCPD, 아래)의 질량스펙트럼‘

5) 정량한계 : 0.01 mg/kg

사. 정성시험

위의 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 표준물질 및 내부표준물질의 피크 머무름 시간(retention time)과 비교하여 일치 여부를 확인한다. 시험용액의 특성이온 m/z 253, 275, 289, 291 및 453이 확인되어야 하고 특성이온 m/z 453과 253, 275, 289 및 291간 4개의 반응세기의 비(response ratio)를 3-MCPD 표준물질의 특성이온 간 반응세기의 비와 비교하여 2개 이상의 반응세기의 비가 ± 20%이내에서 일치하여야 한다.

아. (생  략)

10.10 ∼ 10.13 (생  략)

11. 식품표시 관련 시험법

11.1 유전자변형식품의 시험법

11.1.1 ∼ 11.1.4 (생  략)

11.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (생  략)

다. 시약 및 시액

1) (생  략)

2) PCR용 시약의 조제

가) ∼ 다) (생  략)

표 1. 유전자변형 콩의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	콩 lectin (118 bp)	(생 략)	(생 략)
	콩 lectin (74 bp)	(생 략)	(생 략)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(생 략)	(생 략)
	tNOS (151 bp)	(생 략)	(생 략)
구조 유전자	RRS (GTS40-3-2) (121 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON89788 (139 bp)	(생 략)	(생 략)
	A2704-12 (153 bp)	(생 략)	(생 략)
	A2704-12 (64 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP356043-5 (145 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP356043-5 (99 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP305423-1 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP305423-1 (93 bp)	(생 략)	(생 략)
	A5547-127 (150 bp)	(생 략)	(생 략)
	A5547-127 (75 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87701 (150 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87701 (89 bp)	(생 략)	(생 략)
	CV127 (135 bp)	(생 략)	(생 략)
	CV127 (88 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87705 (92 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87705 (86 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87708 (105 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87708 (96 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87769 (111 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87769 (87 bp)	(생 략)	(생 략)
	FG72 (115 bp)	(생 략)	(생 략)
	FG72 (70 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS-44406-6 (145 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS-44406-6 (99 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS-68416-4 (128 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS-68416-4 (87 bp)	(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(생 략)	(생 략)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(생 략)	(생 략)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(생 략)	(생 략)
	옥수수 hmg (79 bp)	(생 략)	(생 략)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(생 략)	(생 략)
	NOS (151 bp)	(생 략)	(생 략)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
	Bt11 (127 bp)	(생 략)	(생 략)
	GA21 (133 bp)	(생 략)	(생 략)
	T25 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON810 (113 bp)	(생 략)	(생 략)
	NK603 (143 bp)	(생 략)	(생 략)
	NK603 (108 bp)	(생 략)	(생 략)
	TC1507 (103 bp)	(생 략)	(생 략)
	TC1507 (58 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON863 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON863 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON88017 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON88017 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
	MIR604 (142 bp)	(생 략)	(생 략)
	MIR604 (76 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON89034 (112 bp)	(생 략)	(생 략)
	MIR162 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
	MIR162 (92 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (147 bp)	(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (80 bp)	(생 략)	(생 략)
	3272 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
	3272 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87460 (85 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87460 (82 bp)	(생 략)	(생 략)
	5307 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
	5307 (107 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87427 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON87427 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (144 bp)	(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (98 bp)	(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>

표 3. ∼ 표 4. (생  략)

라. 시험조작(PCR)

(본문 생략)

① 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인된 경우 : RRS,　MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705(이상 콩), Bt176, Bt11, GA21, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON 88017, MIR604, MON89034, MIR162, DP098140-6, 3272, MON87460, 5307, MON87427, DAS-40278-9(이상 옥수수)

② 35S 프로모터 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4(이상 콩), Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP098140-6, DAS-40278-9(이상 옥수수)

③ NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4(이상 콩), GA21, MIR604, MIR162, DP098140-6, 3272, 5307, DAS-40278-9(이상 옥수수)

④ 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인되지 않은 경우 : MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4(이상 콩), DP098140-6, DAS-40278-9 (이상 옥수수)

1) ∼ 3) (생  략)

마. (생  략)

바. 분석 결과의 판정 및 처리

1) ∼ 2) (생  략)

3) 유전자변형 이벤트 중 35S 프로모터 및 NOS 종결인자(terminator)를 모두 사용하는 것으로는 RRS, Bt11, NK603, MON863, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427이 있고,  35S 프로모터를 사용하는 것으로는 RRS, A2704-12, A5547-127, Bt176, Bt11, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427이 있으며, NOS 종결인자(terminator)를 사용하는 것으로는 RRS, FG72, Bt11, GA21, NK603, MON863, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, 3272, MON87460, 5307, MON87427이 있다.

4) (생  략)

11.1.6. ∼ 11.1.10 (생  략)

11.1.11 유전자변형 면화

(생  략)

가. ∼ 나. (생  략)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	면화 (76 bp)	(생 략)	(생 략)
구조 유전자	531* (72 bp)	(생 략)	(생 략)
	1445 (87 bp)	(생 략)	(생 략)
	15985 (82 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON88913 (94 bp)	(생 략)	(생 략)
	LLCotton25 (79 bp)	(생 략)	(생 략)
	281/3006 (111 bp)	(생 략)	(생 략)
	GHB614 (120 bp)	(생 략)	(생 략)
	T304-40 (79 bp)	(생 략)	(생 략)
	GHB119 (90 bp)	(생 략)	(생 략)
	COT102 (101 bp)	(생 략)	(생 략)
	MON88701 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>

표 9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

다. ∼ 라. (생  략)

11.1.12  (생  략)

11.1.13 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)

(생  략)

가. ∼ 나. (생  략)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	(생 략)	(생 략)
	알팔파(alfalfa) (127 bp)	(생 략)	(생 략)
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	(생 략)	(생 략)
	알팔파(alfalfa) J101 (121bp)	(생 략)	(생 략)
	알팔파(alfalfa) J163 (105bp)	(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>

표 23. 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)

다. ∼ 라. (생  략)

11.1.14 (생  략)

11.2 ∼ 11.5 (생  략)

12. ∼ 13. (생  략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
1 ∼ 476	(생 략)
477	도두	작두콩	Canavalia gladiatia	열매(꼬투리제외)
478 ∼ 818	(생 략)
819	베라알로에	알로에베라, Aloe barbadensis	Aloe vera (L.) Burm. f.	잎(껍질 제외)
820 ∼ 826	(생 략)
827	벨벳빈	Velvet bean	Mucuna pruriens	순, 열매(전처리과정 확인)
828 ∼ 3687	(생 략)

2. 동물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
1 ∼ 951	(생 략)
상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다. 다만, 수산물은 상기에서 명시된 동물성 수산물 이외에도 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nations의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase, World Register of Marine Species 등)에서 어획량에 대한 정보가 확인되고, 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우는 식품에 사용가능한 원료로 사용할 수 있다. 다만, 별표 2에서 정하고 있는 원료는 제외한다.

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	비고
1 ∼ 60	(생 략)
61	Saccharomyces fragilis	Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces marxianus, Saccharomyces marxianus	Saccharomyces fragilis	-
62 ∼ 70	(생 략)

4. 기타

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
1 ∼ 15	(생 략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)	사용 조건
1 ∼ 29	(생 략)
<신 설>
30 ∼ 148	(생 략)

2. 동물성

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
1 ∼ 8	(생 략)

3. 미생물

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
1 ∼ 9	(생 략)
10	Geobacillus stearothermophilus	Bacillus thermoliquefaciens, Bacillus strearothermophilus	Geobacillus stearothermophilus	효소제조(α-Amlyase, Protease)에 한함
11	(생 략)
12	Kluyveromyces marxianus	Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces cicerisporus, Candida pseudotropicalis, Candida kefyr	Kluyveromyces marxianus	효소제조(5'-Adenylic acid, 5'-Cytidylic acid)에 한함
13 ∼ 27
28	Streptoverticillium mobaraense	-	Streptomyces mobaraense, Streptoverticillium ladhankaeanum,Streptoverticillium ladakanum, Streptomyces ladhankaeanus, Streptomyces ladakanum, Streptomyces mobaraensis	효소제조(Transglutaminase(TG))에 한함
29 ∼ 30	(생 략)

4. 기타

	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
1 ∼ 8	(생 략)

[별표 3] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이미녹타딘(Iminoctadine)

(생   략)

고추	1.0

구기자(건조)	5.0

딸기	1.0

매실	1.0

배	0.05

복숭아	0.2

부추	1.0

사과	0.3

오이	0.3

율무	0.05

토마토	0.3

포도	0.5

피망	1.0

<신    설>

(2) ∼ (6) (생   략)

(7) 다미노자이드(Daminozide)

감자	불검출

곡류	불검출

과일류	불검출

서류	불검출

종실류	불검출

채소류	불검출

콩류	불검출

대두	불검출

땅콩	불검출

멜론	불검출

밤	불검출

배	불검출

배추	불검출

버섯류	불검출

복숭아	불검출

사과	불검출

쌀	불검출

아몬드	불검출

은행	불검출

자몽	불검출

참깨	불검출

체리	불검출

카카오원두	불검출

커피원두	불검출

토마토	불검출

포도	불검출

피칸	불검출

호두	불검출

호프	불검출

<신    설>

(8) ∼ (13) (생   략)

(14) 디메토에이트(Dimethoate)

(생   략)

콩류	2.0

(15) ∼ (18) (생   략)

(19) 디코폴(Dicofol)

(생   략)

콩류	0.1

(20) 다이쾃(Diquat)

(생   략)

콩류	0.5

(21) (생   략)

(22) 디클로플루아니드(Dichlofluanid)

(생   략)

콩류	0.2

(23) 디클로란(Dicloran)

(생   략)

콩류	20.0

(24) ∼ (31) (생   략)

(32) 말라티온(Malathion)

(생   략)

콩류	0.5

(33) (생   략)

(34) 메빈포스(Mevinphos)

(생   략)

콩류	0.1

(35) 메토밀(Methomyl)

(생   략)

콩류	0.1

(36) ∼ (37) (생   략)

(38) 메탈락실(Metalaxyl)

(생   략)

<신    설>

(39) (생   략)

(40) 메톨라클로르(Metolachlor)

(생   략)

콩류	0.3

(41) 메토브로뮤론(Metobromuron)

(생   략)

콩류	0.2

(42) (생   략)

(43) 메톡시클로르(Methoxychlor)

(생   략)

콩류	14.0

(44) 메트리뷰진(Metribuzin)

(생   략)

콩류	0.05

(45) (생   략)

(46) 메틸브로마이드(Methylbromide)

(생   략)

콩류	50

(47) 모노크로토포스(Monocrotophos)

(생   략)

콩류	0.2

(48) ∼ (53) (생   략)

(54) 벤타존(Bentazone)

(생   략)

콩류	0.2

(55) ∼ (57) (생   략)

(58) 비에치시(BHC)

(생   략)

콩류	0.01

(59) 비터타놀(Bitertanol)

(생   략)

콩류	0.2

(60) (생   략)

(61) 비펜트린(Bifenthrin)

(생   략)

풋마늘	0.05

(62) (생   략)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(생   략)

대두	0.05

콩류	30.0

<신    설>

(64) ∼ (65) (생   략)

(66) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(생   략)

콩류	0.05

(67) 사이플루트린(Cyfluthrin)

(생   략)

콩류	0.5

<신    설>

(68) 사이할로트린(Cyhalothrin)

(생   략)

콩류	0.2

(69) 사이헥사틴(Cyhexatin)

(생   략)

콩류	0.2

(70) ∼ (74) (생   략)

(75) 아진포스메틸(Azinphos-methyl)

(생   략)

콩류	0.2

(76) ∼ (77) (생   략)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(생   략)

콩류	0.1

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium phosphide(Hydrogen phosphide)]

(생   략)

콩류	0.1

(80) ∼ (81) (생   략)

(82) 에티오펜카브(Ethiofencarb)

(생   략)

콩류	1.0

(83) (생   략)

(84) 에탈플루랄린(Ethalfluralin)

(생   략)

콩류	0.05

(85) ∼ (92) (생   략)

(93) 오메토에이트(Omethoate)

(생   략)

콩류	0.01

(94) ∼ (100) (생   략)

(101) 이미다클로프리드(Imidacloprid)

(생   략)

대두	0.05

딸기	0.3

(102) ∼ (104) (생   략)

(105) 이프로디온(Iprodione)

(생   략)

콩류	0.2

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(106) ∼ (111) (생   략)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(생   략)

보리	0.05

(113) 카보페노티온(Carbophenothion)

(생   략)

콩류	0.02

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(생   략)

콩류	0.2

(115) 카복신(Carboxin)

(생   략)

콩류	0.2

(116) ∼ (117) (생   략)

(118) 캡탄(Captan)

(생   략)

콩류	5.0

(119) ∼ (123) (생   략)

(124) 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate)

(생   략)

콩류	0.02

(125) ∼ (128) (생   략)

(129) 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos)

(생   략)

콩류	0.05

(130) 클로르프로팜(Chlorpropham)

(생   략)

콩류	0.2

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(생   략)

<신    설>

(132) (생   략)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(134) ∼ (147) (생   략)

(148) 트리플루랄린(Trifluralin)

(생   략)

콩류	0.1

(149) ∼ (151) (생   략)

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(생   략)

콩류	0.2

(153) 파라티온(Parathion)

(생   략)

콩류	0.3

(154) (생   략)

(155) 파라티온메틸(Parathion-Methyl)

(생   략)

콩류	1.0

(156) (생   략)

(157) 퍼메트린[Permethin(Permetrin)]

(생   략)

콩류	0.2

(158) (생   략)

(159) 페나미포스(Fenamiphos)

(생   략)

콩류	0.05

(160) ∼ (161) (생   략)

(162) 페니트로티온(Fenitrothion: MEP)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(163) 펜디메탈린(Pendimethalin)

(생   략)

콩류	0.2

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(생   략)

콩류	0.5

(165) (생   략)

(166) 펜뷰타틴옥사이드(Fenbutatin Oxide)

(생   략)

콩류	0.5

(167) ∼ (176) (생   략)

(177) 포스파미돈(Phosphamidon)

(생   략)

콩류	0.2

(178) ∼ (185) (생   략)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(생   략)

딸기	0.5

수박	0.5

(187) (생   략)

(188) 프로파모카브(Propamocarb)

(생   략)

토마토	1.0

(189) ∼ (191) (생   략)

(192) 프로피코나졸(Propiconazole)

(생   략)

대두	0.05

바나나	0.1

(193) (생   략)

(194) 피레트린(Pyrethrins)

(생   략)

콩류	1.0

(195) ∼ (199) (생   략)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(생   략)

<신    설>

(201) ∼ (209) (생   략)

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(211) ∼  (227) (생   략)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(생   략)

<신    설>

(229) ∼ (234) (생   략)

(235) 포스티아제이트(Fosthiazate)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(236) ∼ (237) (생   략)

(238) 플루디옥소닐(Fludioxonil)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(239) ∼ (247) (생   략)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(생   략)

<신    설>

(249) ∼ (284) (생   략)

(285) 아크리나트린(Acrinathrin)

(생   략)

<신    설>

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(287) ∼ (298) (생   략)

(299) 티플루자마이드(Thifluzamide)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(300) ∼ (308) (생   략)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(생   략)

<신    설>

(310) ∼ (320) (생   략)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(322) ∼ (331) (생   략)

(332) 클로티아니딘(Clothianidin)

(생   략)

블루베리	0.05

<신    설>

<신    설>

(333) ∼ (334) (생   략)

(335) 트리플록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(생   략)

<신    설>

(336) (생   략)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(생   략)

<신    설>

(338) ∼ (344) (생   략)

(345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin)

(생   략)

<신    설>

(346) ∼ (348) (생   략)

(349) 노발루론(Novaluron)

(생   략)

<신    설>

(350) ∼ (351) (생   략)

(352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)

(생   략)

<신    설>

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(생   략)

풋마늘	0.05

<신    설>

<신    설>

(354) ∼ (379) (생   략)

(380) 피리달릴(Pyridalyl)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(381) ∼ (385) (생   략)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(생   략)

참외	0.3

(387) ∼ (393) (생   략)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(395) ∼ (398) (생   략)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(생   략)

피망	1.0

(400) ∼ (402) (생   략)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(404) ∼ (407) (생   략)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(생   략)

<신    설>

파	0.7

(409) (생   략)

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(생   략)

<신    설>

(411) ∼ (414) (생   략)

(415) 크로마페노자이드(Chromafenozide)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(416) ∼ (421) (생   략)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(423) (생   략)

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(425) ∼ (429) (생   략)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(생   략)

복숭아	0.3

(431) (생   략)

(432) 사플루페나실(Saflufenacil)

(생   략)

강낭콩	0.3†

대두	0.05†

완두콩	0.05†

이집트콩	0.01†

밀	0.03†

<신    설>

(433) ∼ (436) (생   략)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(생   략)

콩류	0.3†

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(438) (생   략)

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(440) ∼ (441) (생   략)

(442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

◎ 잔류물의 정의 : Flupyradifurone과 Difluoroacetic acid의 합을  flupyradifurone으로 함

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(443) ∼ (452) (생   략)

(453) 만데스트로빈(Mandestrobin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(454) (생   략)

(455) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(456) ∼ (457) (생   략)

(458) 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

<신    설>

(459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

(생   략)

<신    설>

(460) 피카뷰트라족스(Picarbutrazox)

(생   략)

<신    설>

<신    설>

(461) ∼ (463) (생   략)

<신    설>

<신    설>

<신    설>

* 주1. ∼ 주9. (생  략)

[별표 4] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (7) (생   략)

(8) 디클로르보스(Dichlorvos)

(생   략)

가금류고기	0.05

포유류고기	0.05

유	0.02

(9) (생   략)

(10) 메토밀(Methomyl)

(생   략)

포유류고기	0.02

유	0.02

(11) ∼ (19) (생   략)

(20) 사이로마진(Cyromazine)

(생   략)

가금류고기	0.05

알	0.2

(21) ∼ (57) (생   략)

(58) 포스멧(Phosmet)

◎ 잔류물의 정의 : Phosmet

소고기	1.0

(59) ∼ (62) (생   략)

(63) 프로폭서(Propoxur)

(생   략)

포유류고기	0.05

(64) ∼ (85) (생   략)

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 겐타마이신(Gentamicin) : 항균제

(생   략)

닭근육	0.1

닭간	0.1

닭지방	0.1

닭신장	0.1

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제

(생  략)

닭근육	0.2

닭간	0.2

닭지방/피부	0.2

닭신장	0.2

(3) 네오마이신(Neomycin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(4) ∼ (8) (생   략)

(9) 디클라주릴(Diclazuril) : 항원충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(10) ∼ (16) (생   략)

(17) 살리노마이신(Salinomycin) : 항원충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(18) ∼ (21) (생   략)

(22) 아목시실린(Amoxicillin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(23) ∼ (25) (생   략)

(26) 에리스로마이신(Erythromycin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(27) ∼ (29) (생   략)

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 항균제

(생  략)

닭근육	0.1

닭간	0.15

닭지방	0.05

닭신장	0.15

<신  설>

<신  설>

(31) 옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린 (Oxytetracycline /Chlortetracycline / Tetracycline, 합으로서) : 항균제

(생  략)

닭근육	0.2

닭간	0.6

닭신장	1.2

칠면조근육	0.2

칠면조간	0.6

칠면조신장	1.2

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(32) ∼ (40) (생   략)

(41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(41) ∼ (65) (생   략)

(66) 콜리스틴(Colistin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(67) ∼ (73) (생   략)

(74) 이미도캅(Imidocarb) : 항원충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(75) ∼ (85) (생   략)

(86) 세파졸린(Cefazolin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(87) ∼ (93) (생   략)

(94) 옥시벤다졸(Oxibendazole) : 구충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(95) (생   략)

(96) 카나마이신(Kanamycin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(97) ∼ (102) (생   략)

(103) 트리메토프림(Trimethoprim) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(104) ∼ (184) (생   략)

[별표 6] (생   략)

[별표 7]

제1조 ∼ 7조 (생   략)

제8조(결과 통보) 식약처장은 농약 또는 동물용의약품의 잔류허용기준 설정에 대한 검토가 완료되면, 시행규칙 별지 제3호 서식에 따라 신청자에 통보하여야 한다.

제1. 총칙

1. ～ 3. (현행과 같음)

4. 식품원료 분류

1) (현행과 같음)

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
수산물	어류	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과같음))	(현행과 같음)
		해양 어류	1) -------------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ -------------------------------------------------------------- --------------------------------------------------- 양미리, 임연수어, ----------------- ------------------------------------------------------------- 2) 심해성어류 : -------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 은민대구(뉴질랜드계군에 한함), 은대구 등 3) (현행과 같음)
	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
기타 동물	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)

2) 동물성 원료

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ～ 3) (현행과 같음)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) (현행과 같음)

(2) 식중독균

(현행과 같음)

가) (현행과 같음)

나) -------------------

① (현행과 같음)

② ------------ 식육추출가공품, 알가공품 : ----

----------

③ (현행과 같음)

다) ------------

① ------------ 식육추출가공품, 건포류 : -----

------

② ∼ ③ (현행과 같음)

5) ∼ 6) (현행과 같음)

7) 농약의 잔류허용기준

(1) (현행과 같음)

(2) 농산물의 농약 잔류허용기준

① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

번호	유효성분
1～58	(현행과 같음)
59	차나무오일(Tea tree oil)
60	코퍼설페이트펜타하이드레이트(Copper sulfate pentahydrate)
61	폴리옥신디(Polyoxin D)

(3) ∼ (6) (현행과 같음)

8) ∼ 17) (현행과 같음)

4. 보존 및 유통기준

1) ∼ 13) (현행과 같음)

14)  ---------------------------

---------------------. 다만, 식품제조·가공업 영업자가 냉동제품인 빵류, 떡류, 초콜릿류, 젓갈류, 과·채주스, 또는 수산물가공품(살균 또는 멸균하여 진공 포장된 제품에 한함)에, 축산물가공업 중 유가공업 영업자가 냉동된 치즈류 또는 버터류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

15) ∼ 27) (현행과 같음)

제3. (현행과 같음)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. ～ 9. (현행과 같음)

10. 특수용도식품

10-1 조제유류

1) ∼ 4)

5) 규격

유 형 항 목	영아용 조제유		성장기용 조제유
		최대권장 기준
(1) ∼ (37)	(현행과 같음)
(38) 대장균군	-----, -----, m=0, ------(-----------------------)
(39) ∼ (45)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

10-2 ∼ 10-8 (현행과 같음)

11.. (현행과 같음)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) (현행과 같음)

(2) 참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)은 과일 또는 과즙을 주원료로 하여 제조한 발효식초에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성 전에 제거하여야 한다. 단, 오크칩(바)에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니 된다.

4) ∼ 6) (현행과 같음)

12-2 ∼ 12-6 (현행과 같음)

13. ∼17. (현행과 같음)

18. 유가공품

18-1 ∼ 18-3 (현행과 같음)

18-4 발효유류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유형 항목	발효유	농후 발효유	크림 발효유	농 후 크림발효유	발효 버터유	발효유 분말
(1) ∼ (5)	(현행과 같음)
(6) 대장균군	n=5, c=2, m=0, M=10
(7) ∼ (9)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-5 버터유

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) --------: ------- m=0

-------

(5) ∼ (7) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-6 농축유류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유형 항목	농축우유, 탈지농축우유	가당연유	가당탈지연유	가공연유
(1) ∼ (6)	(현행과 같음)
(7) 대장균군	n=5, c=2, m=0, M=10	n=5, c=2, m=0, M=10	n=5, c=2, m=0, M=10	n=5, c=2, m=0, M=10
(8) ∼ (9)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-7 유크림류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

유형 항목	유크림	가공유크림
(1) ∼ (4)	(현행과 같음)
(5) 대장균군	n=5, c=2, m=0, M=10
(6) ∼ (8)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-8 버터류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

유형 항목	버터	가공버터	버터오일
(1) ∼ (5)	(현행과 같음)
(6) 대장균군	n=5, c=2, m=0, M=10
(7) ∼ (11)	(현행과 같음)

5) 규격

6) (현행과 같음)

18-9 ∼ 18-10 (현행과 같음)

18-11 유청류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

유형 항목	유청	농축유청	유청단백분말
(1) ∼ (2)	(현행과 같음)
(3) 대장균군	n=5, c=2, m=0, M=10
(4) ∼ (5)	(현행과 같음)

5) 규격

6) (현행과 같음)

18-12 유당

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) --------: ------- m=0

-------

(5) ∼ (6) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

18-13 유단백가수분해식품

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (5) (현행과 같음)

(6) --------: ------- m=0

-------

(7) ∼ (8) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

19. 수산가공식품류

19-1 어유가공품류

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) (현행과 같음)

(2) ----------------------

---------------. 다만, 연육 및 어육반제품은 밀봉하지 아니할 수 있다.

(3) (현행과 같음)

19-2 ∼ 19-6 (현행과 같음)

20. ∼ 23. (현행과 같음)

제5. ∼ 제6. (현행과 같음)

제7. 일반시험법

1. (현행과 같음)

2. ∼ 2.2.1.15 (현행과 같음)

2.2.2 비타민류

2.2.2.1 비타민A

가. 삼염화안티몬에 의한 비색정량법

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 시험용액의 조제

가) (현행과 같음)

나)  ---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

--------------- 석유에테르층 ---------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

--

다) ∼ 마) (현행과 같음)

4) ∼ 5) (현행과 같음)

나. (현행과 같음)

2.2.2.2 ∼ 3. (현행과 같음)

4. 미생물시험법

4.1 ∼ 4.7 (현행과 같음)

4.8 대장균

4.8.1 ∼ 4.8.2 (현행과 같음)

별표 1. 3단계희석 시험관 5개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계)

(현행과 같음)

※ 최확수법을 이용한 판정 시 양성 시험관수가 모두 0인 경우 결과값은 0으로 간주한다.

별표 2. 3단계희석 시험관 3개씩 시험하였을 때 양성에 대한 최확수(95%의 신뢰한계)

(현행과 같음)

※ 최확수법을 이용한 판정 시 양성 시험관수가 모두 0인 경우 결과값은 0으로 간주한다.

5. (현행과 같음)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.7 (현행과 같음)

6.8 농산가공식품류

6.8.1 ∼ 6.8.2 (현행과 같음)

6.8.3 효소식품

6.3.3.1 α-아밀라아제

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 표준용액의 조제

검량선 작성을 위해 포도당(99% 이상)을 증류수에 용해하여 10 μg/mL ∼ 1,000 μg/mL의 농도로 제조한다. 제조된 포도당 용액과 증류수 0.4 mL에 각각 DNS 용액 1.2 mL를 가한다. 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

라. 시험용액의 조제

----------------------  또는 맥바인 완충액에 ------ ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 이와는 별도로 100℃에서 10분간 가열하여 활성을 잃은 검액 1 mL를 위와 같이 가용성 전분용액, 맥바인완충액, 염화칼슘용액에 넣고 조작하여 공시험용으로 한다. 시험용과 공시험용 반응액 0.4 mL에 DNS 용액 1.2 mL을 넣은 후, 100℃에서 5분간 가열하여 실온에서 냉각한 것을 시험용액으로 한다.

마. 시험조작

------------------------

------------------------

--------- 시험용 시험용액의

---- 공시험용 시험용액의 ---

------------------------

------------------------

------------------------

----------

검량선은 농도별 포도당 표준용액의 흡광도 값에 증류수 표준용액 흡광도 값을 빼준 수치를 이용하여 작성한다. 시험용액 중 효소반응에 의해 생성된 포도당의 양은 시험용 시험용액의 흡광도 값에 공시험용 시험용액 흡광도 값을 뺀 수치를 검량선에 대입하여 산출한다.

바. 효소의 역가 계산

검체 중 α-아밀라아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 전분으로부터 포도당 1 mg을 분해해내는데 필요한 α-아밀라아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 포도당 양(μg) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 50(20 mL 중 0.4 mL 발색 반응)
	20(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

6.8.3.2 프로테아제

가 ∼ 나 (현행과 같음)

다. 표준용액의 조제

검량선 작성을 위해 L-티로신(99% 이상)을 2 N HCl 용액에 용해하여 10 μg/mL ∼ 1,000 μg/mL 농도로 제조한다. 제조된 L-티로신 용액과 2 N HCl 용액 1 mL를 시험관에 정확히 취하여 0.4 M 탄산나트륨용액 5 mL 및 포린시액(원액을 3배 희석한 액) 1 mL를 넣어 잘 흔들어 섞는다. 37℃에서 20분간 방치한 다음 발색된 액을 표준용액으로 한다.

라. 시험용액의 조제

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

----- 시험용 시험용액으로 --

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

--- 시험용 시험용액과 ----

---공시험용 시험용액으로 -.

마. 시험조작

------------------------

------------------------

---- 시험용 시험용액의 ----

공시험용 시험용액의 -------

------------------------

------------------------

-----------------------.

검량선은 농도별 L-티로신 용액의 흡광도 값에 2 N HCl 용액 흡광도 값을 빼준 수치를 이용하여 작성한다. 시험용액 중 효소반응에 의해 생성된 L-티로신의 양은 시험용 시험용액의 흡광도 값에 공시험용 시험용액 흡광도 값을 뺀 수치를 검량선에 대입하여 산출한다.

바. 효소의 역가 계산

검체 중 프로테아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 카제인으로부터 L-티로신 1 mg을 분해해내는데 필요한 프로테아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 L-티로신 양(μg) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 4(4 mL 중 1 mL 발색 반응)
	10(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

6.9 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.1.3.11 (현행과 같음)

7.1.3.12 아바멕틴(Abamectin), 밀베멕틴(Milbemectin), 레피멕틴(Lepimectin)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) ------------------------ ----------------------   -------------------------------- 6 mL-----

7) (현행과 같음)

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.3.13 ∼ 7.1.4.137 (현행과 같음)

7.1.4.138 프로헥사디온칼슘(Prohexadione -calcium)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 8) (현행과 같음)

9) ------------------------ ----------------------   ------------------------6 mL--------

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.139 테트라메쓰린(Tetramethrin)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------ ----------------------   ------------------- 6 mL ------

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.140 이소티아닐(Isotianil)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 6) (현행과 같음)

7) ------------------------ ----------------------   ------------------- 6 mL ------

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.141∼7.1.4.145 (현행과 같음)

7.1.4.146 이소펜포스-메틸(Isofenphos -methyl)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------ ----------------------   ------------------------6 mL--------

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.147∼7.1.4.154 (현행과 같음)

7.1.4.155 펜티오피라드(Penthiopyrad)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) ------------------------ ----------------------   ------------6 mL-------- ----------

7) (현행과 같음)

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.156 피리미설판(Pyrimisulfan)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------ ----------------------   ---------------- 6 mL--- ----------

6) (현행과 같음)

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.157 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------ ----------------------   ---------------- 6 mL--- --------------

6) (현행과 같음)

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.158 (현행과 같음)

7.1.4.159 설폭사플로르(Sulfoxflor)

가 ∼ 다 (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------ ----------------------   --------------------------------- 6 mL------

6) (현행과 같음)

마 ∼ 아 (현행과 같음)

7.1.4.160∼7.1.4.175 (현행과 같음)

7.1.4.176 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

가. 시험법 적용범위

두류, 과일류, 채소류--------- ---------.

나. 분석원리

------ 플루피라디퓨론을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후---------------- -------------------------------------------------------------------.

다. 장치

1) (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) 용매: ----------------- ----- 특급

2) (현행과 같음)

3) 표준원액: 플루피라디퓨론 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: --------- 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다. (무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

-------분쇄하여 5 g(두류는 ----------------------------------------------------------------, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 5 g)을------------------ ----------------------- --------------------------1% 아세트산함유 아세토니트릴----------------- --------------------- ---------무수황산마그네슘--------------------------------------------------------2,000 G 로 원심분리하고 상징액을 분액깔대기에 옮긴다. 상징액에---------- -------------------------------------------------------------------------------------------- 아세토니트릴층 중 2 mL만 취해 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 --------.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 칼럼: C18(Capcell pak, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 1.7 μm) ---------

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	0	100
3.0	0	100
6.0	50	50
7.0	30	70
8.0	10	90
10.0	0	100

라) 이동상 유속: 0.2 mL/분

마) 주입량: 5 μL

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법: ESI positive- ion mode

나) Collision gas: 아르곤(Ar)

다) Cone voltage: 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루피라디퓨론 (Flupyradifurone)	288.7	288.04	289	126	20
				90	40

* 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

------------------------------------------------------------- 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의------ --------------면적 값으로 -------------.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 플루피라디퓨론(9.5분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. (현행과 같음)

<삭    제>

7.1.4.177 ∼ 7.1.4.207 (현행과 같음)

7.1.4.208 스피록사민(Spiroxamine)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 스피록사민을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 스피록사민 표준품(cis와 trans 이성질체의 혼합물)을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 10 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 서류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 물 100 mL를 가하여 녹인 후 1 N 수산화나트륨용액을 천천히 가해 pH 7로 조절하여 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로로메탄 30 mL를 차례로 가하고 심하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산 10 mL를 가하여 녹인다.

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 10 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산 5 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 아세톤/헥산(5/95, v/v) 10 mL를 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피를 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18(XBridge, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 10 mM 암모늄아세테이트 함유 메탄올

(2) 이동상 B: 10 mM 암모늄아세테이트 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	2	98
2.0	50	50
5.0	98	2
7.0	2	98
10.0	2	98

라) 이동상 유속: 0.3 mL/분

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법: ESI positive- ion mode

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라) Cone voltage: 30 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피록사민 (Spiroxamine)	297.5	297.26	298	144	20
				100	30

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램

스피록사민(5.8분)

5) 정량한계

0.001 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 스피록사민을 확인한다.

7.1.4.209 톨펜피라드(Tolfenpyrad)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 견과종실류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 톨펜피라드를 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 톨펜피라드 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로  혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 10 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 10 g, 서류, 견과종실류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 10 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 가하여 진탕기에서 10분간 진탕한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기를 이용해 흡인여과한 뒤 아세토니트릴 20 mL로 잔사 및 용기를 씻어내려 앞의 여액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한다. 농축 후 잔류물에 디클로로메탄 30 mL를 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고 물 100 mL를 가한다. 포화식염수 20 mL를 넣고 가하고 심하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 가하여 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축하여 용매를 모두 날려버린 후 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다[지방성 검체의 경우 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고, 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL를 가하여 녹인다.].

2) 정제

플로리실 카트리지에 디클로로메탄 10 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 씻어 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄 5 mL를 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 아세톤/디클로로메탄(5/95, v/v) 10 mL를 가하고 1∼2  방울/초의 속도로 용출시켜 받은 시험액을 감압농축플라스크에 모은다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 가하여 최종부피를 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: C18(XBridge, 2.1 mm i.d. × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도: 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴

(2) 이동상 B: 0.1% 포름산 함유 물

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
4.0	80	20
6.0	80	20
8.0	20	80
10.0	20	80

라) 이동상 유속: 0.2 mL/분

마) 주입량: 1 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) 이온화 방법: ESI positive- ion mode

나) Capillary voltage: 2.14 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라) Cone voltage: 40 V

표. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, [M+H]+, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
톨펜피라드 (Tolfenpyrad)	383.9	383.14	384	197	20
				145	25

1) 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 각 생성이온에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 톨펜피라드(5.5분)

5) 정량한계

0.005 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

액체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 특성이온으로 톨펜피라드를 확인한다.

7.1.4.210 펜플루펜(Penflufen)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 펜플루펜을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소·인 검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 특급

2) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 펜플루펜 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액:  표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 잔류농약 시험용 또는 특급

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 50 g(곡류 및 두류는 약 1 kg을 혼합하여 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄한 후 50 g, 서류, 과일류, 채소류는 약 1 kg을 분쇄한 후 50 g)을 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 30 mL를 가한 후 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL을 가하여 진탕기에서 3분간 진탕한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인여과한 후 여액을 염화나트륨 15 g이 들어있는 분액깔때기에 옮긴 후 심하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한다. 아세토니트릴 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 가하여 최종부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴 층 20 mL를 취하여 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다[지방성 검체의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 잔류물에 가하여 녹인 후 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴 층을 40℃ 이하 수욕상에서 감압농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 4 mL를 가하여 용해한다].

2) 정제

플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고, 아세톤/헥산(20/80, v/v) 5 mL를 추가로 가하여 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. ‘1)추출’로부터 얻은 추출액 4 mL를 카트리지 상단에 넣은 후 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 감압농축플라스크에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤/헥산(20/80, v/v) 5 mL를 가하고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 동일한 감압농축플라스크에 합친다. 이를 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세톤/헥산(20/80, v/v)을 가하여 최종부피를 2 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼: DB-5(Agilent, 0.25 mm i.d. × 30 m, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상가스 및 유속: 질소, 1.0 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 칼럼 온도: 80℃에서 2분간 유지한 후 10℃/분의 속도로 280℃까지 승온하고 15분간 유지

마) 검출기 온도: 280℃

바) 주입모드: splitless

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품의 크로마토그램

그림. 기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램

펜플루펜(20.4분)

4) 정량한계

0.01 mg/kg

사. 정량시험

위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 펜플루펜을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기의 분석조건

가) 칼럼: DB-5MS(Agilent, 0.25 mm i.d. x 30 m, 0.25 μm)

나) 이동상가스 및 유속: 헬륨, 1.0 mL/분

다) 칼럼 온도: 150℃에서 2분간 유지한 후 10℃/분의 속도로 280℃까지 승온하고 15분간 유지

라) 주입부 온도: 260℃

마) 검출기 온도: 280℃

바) 이온화: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입모드: splitless

아) 주입량: 1 μL

표. 기체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	평균분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	관측이온 (Monitoring ion, m/z)
펜플루펜 (Penflufen)	317.4	317.19	141
			274

8. 식품 중 잔류동물용의약품시험법

8.1 일반사항

1) (현행과 같음)

2) --------------- 가공식품 등 대상식품이 -----------

-----------------------

-----------------------

-----.

3) 검체는 원료의 함량, 특히 건조 등의 과정으로 인하여 수분 함량이 변화된 경우 수분 함량을 고려하여 시험용액의 조제과정에서 검체량을 조정할 수 있다.

4) 검체

식품의 종류에 따라 아래 표에서와 같이 처리한 것을 검체로 하여 균질화한다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 식품은 원칙적으로 가식부를 시험부위로 한다.

식 품	검 체	최소요구량
식육류 소, 돼지, 말, 양 등	근육 부위	100 g
	지방(육안으로 확인되는 지방 10 g을 채취하거나 분석을 위한 지방 10 g을 수집할 수 있는 충분한 양의 부위)	10 g
	신장, 간	50 g
가금류 닭, 오리, 거위, 칠면조 등	피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위	100 g
	지방(복부지방 또는 지방 10 g을 수집할 수 있는 충분한 양의 부위)	10 g
	신장, 간	전체 또는 50 g
우유류 우유, 산양유 등	전체를 균질화 한 것	500 g 또는 500 mL
알류 계란, 오리알 메추리알 등	10개 또는 이와 동등한 양 20개 또는 이와 동등한 양	500 g 200 g
어류 미꾸라지, 빙어, 멸치	머리, 꼬리, 뼈, 내장, 껍질 포함한 전체	500 g
그 외 어류(넙치, 조피볼락(우럭) 등)	머리, 꼬리, 뼈, 내장, 비늘을 제거한 껍질 포함한 근육부위	500 g
갑각류 새우류(대하, 흰다리새우 등)	껍질, 머리, 꼬리, 다리 등을 제거한 근육부위	500 g
작은 민물새우류(6 cm이하)	껍질을 포함한 전체	500 g
기타 갑각류	껍질, 내장 등을 제거한 근육부위	500 g
패류 가리비, 새조개, 키조개	껍질과 내장을 제거한 근육부위와 관자	500 g
전복, 큰우렁(골뱅이), 고둥, 논우렁, (참)소라	껍질과 내장을 제거한 근육부위	500 g
기타패류(꼬막, 재첩, 굴 등)	껍질을 제거한 전체	500 g
벌꿀 액화소밀	벌집을 으깨어 0.5 mm×0.5 mm(또는 0.42 mm×0.42 mm) 크기의 정사각형 망체에 걸러 꿀을 벌집과 완전히 분리시킨 것	250 g
밀랍, 나뭇가지, 벌, 벌집 조각 등 이물질이 있는 경우	40℃ 수욕조에서 시료를 따뜻하게 하고, 면직포를 이용하여 걸러낸 것	250 g
시판 꿀	병 또는 통 전체를 균질화 한 것	250 g

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.2 (현행과 같음)

8.3.3 --------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

--------------------

----------------------

------------

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) (현행과 같음)

나) 질량분석기 조건

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성 이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	(현행과 같음)
2	(현행과 같음)
3	디싸이클라닐 (Dicyclanil)	Posi tive	2.10	190.2	191.0	150.0	27.0
						149.8	29.0
						163.1	23.0
4	(현행과 같음)
5	디클라주릴 (Diclazuril)	Nega tive	7.68	407.6	405.1	333.9	28.0
						299.0	42.0
					407.0	336.0	24.0
6	(현행과 같음)
7	(현행과 같음)
8	(현행과 같음)
9	(현행과 같음)
10	(현행과 같음)
11	(현행과 같음)
12	(현행과 같음)
13	(현행과 같음)
14	(현행과 같음)

(현행과 같음)

7) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.4 (현행과 같음)

8.3.5 노보비오신(Novobiocin)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (현행과 같음)

마) 실리카 카트리지(1 g, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

바) (현행과 같음)

5) ∼ 9) (현행과 같음)

8.3.6 (현행과 같음)

8.3.7 니트로푸란계 대사물질(AOZ, AMOZ, SEM, AHD)

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

----. 다만, 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(SEM)의 경우, 조직과 결합되어 있는 SEM을 정량한다.

3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 아) (현행과 같음)

자) ---------------1,000 mL

-----------------------

-----------------------

---------.

차) (현행과 같음)

카) 10 mM 유도체화용액：100 mL 갈색용량플라스크에 2-니트로벤즈알데히드(2-NBA, MW 151.12, 99%) 0.152 g을 넣고 디메틸설폭사이드(DMSO)에 녹여 표시선까지 채운다. 이 용액은 사용직전에 만들어 사용한다.

타) 1 M 인산칼륨 용액 : --------

-----------------------

-----------------------

-----------------------.

파) 0.1 M 인산칼륨 용액 : -------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-------------..

하) 1 M 수산화나트륨(NaOH) 용액 :

--------------------------

--------------------------

--------------------------

----.

거) 10 mM 개미산암모늄 함유 0.1% 개미산 용액: ---------------

--------------------------

--------------------------

-------.

너) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

가) (현행과 같음)

나) 축·수산물

------------ 2 g을 50 mL ----------- 취한다. ★[메탄올 8 mL과 물 1 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 , 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다. 다시 원심분리관에 메탄올 5 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다. 다시 원심분리관에 에탄올 5 mL을 넣고 30초간 진탕한 후 4℃에서 3,400 G로 10분간 원심분리하고 상층액을 버린다.] 여기에 ㉡--------------- 혼합용액 100 μL를 첨가하여 --------

----------------- 10 mM 유도체화용액 200 μL를 넣고 ------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

--------- 0.1 M 인산칼륨용액 10 mL(수산물의 경우 1 mL).--------------------

------------------------.

------------------------

--------------- 4,500 G로

------------------------

------- 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 옮겨 -----

------------------------

--- 4,500 G로 15분간 원심분리한다. 하층액을 또다른 새로운 원심분리관에 취하고 ----

------------------------

---------- 4,500 G로 ----

-- 원심분리한 후 상층액을 취한다.

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

---.

※ ★과정(메탄올과 에탄올 세척)은 세미카바자이드(SEM) 검출시 확인 및 정량시험시에만 적용한다.

<삭  제>

6) 표준용액의 유도체화

-------------------- 2 g을

-----------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

200 ng/mL를 각각 100 μL를 첨가하여 5)의 ㉠(벌꿀의 경우), ㉡(축·수산물의 경우)의 시험용액의 조제 과정을 각각 따른 후 표준용액으로 사용한다.

7) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼：C18 (Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산 암모늄 함유 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 메탄올

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
0.5	90	10
7.0	10	90
10.0	10	90
10.1	90	10
13.0	90	10

(3) 유속 : 0.4 mL/분

(4) 칼럼온도 : 35℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석 대상 및 개별조건(MRM 조건)

(현행과 같음)

연번	물질명 (Compound)	분석물질	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)1	충돌에너지 (Collision Energy,eV)
1	AOZ	2-NP -AOZ	4.4	235	236	78	20
						104	20
						134	10
2	AMOZ	2-NP -AMOZ	3.6	334	335	128	20
						262	15
						291	10
3	SEM	2-NP -SEM	4.6	208	209	134	9
						166	9
						192	9
4	AHD	2-NP -AHD	4.4	248	249	104	20
						134	10
						178	15
5	AOZ-D4	2-NP -AOZ-D4	4.4	239	240	134	15
6	AMOZ-D5	2-NP -AMOZ-D5	3.5	339	340	296	10

8) 정성시험

가) 정성

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

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----------------- ※ 주 1. 참조

주 1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

2-NP-AOZ (4.6분)

2-NP-AMOZ (3.7분)

2-NP-SEM (4.7분)

2-NP-AHD (4.5분)

2-NP-AOZ d4 (4.6분)

2-NP-AMOZ d5 (3.7분)

그림 1. 유도체한 표준품의 크로마토그램(각 0.001 mg/L)

9) 정량시험

가) 정량

(현행과 같음)

나) 정량한계

벌꿀 : 0.001 mg/kg

축·수산물 : 0.0005 mg/kg (단, 수산물 중 AHD의 경우는 0.001 mg/kg)

8.3.8∼8.3.16 (현행과 같음)

8.3.17 바시트라신(Bacitracin)

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 삼염화초산 함유 아세토니트릴용액과 삼불화초산으로 추출하여 Plexa 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 바시트라신을 정밀히 달아 물에 녹여 100 mg/L이 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 표준원액을 0.1% 개미산 용액으로 희석하여 적당한 농도가 되게 하여 사용한다.

마) Plexa 카트리지 : N-vinyl pyrrolidine과 divinylbenzene이 copolymer의 형태로 결합된 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL, 200 mg) 또는 이와 동등한 것

바) 0.1% 개미산 (Formic acid) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 10% 삼염화초산(Trichloroacetic acid) 함유 아세토니트릴 용액 : 100 mL 용량플라스크에 삼염화초산 10 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 0.5% 삼불화초산(Trifluoroacetic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 삼불화초산 5 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

차) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화된 검체 5 g을 50 mL 원심 분리관에 취한다. 10% 삼염화초산 함유 아세토니트릴 용액 3 mL(알의 경우는 12 mL)을 가한 후 5분간 진탕하고 0.5% 삼불화초산 용액 12 mL(알의 경우는 3 mL)을 가하고 5분간 진탕한다. 4℃에서 2,600 G로 20분간 원심분리한 후 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 12 mL 이하가 되도록 질소 농축한다. 이를 1분간 진탕하고 4℃, 15,000 G에서 20분간 원심분리한 후 이 액을 추출액으로 한다. 미리 메탄올 5 mL과 물 5 mL로 Plexa 카트리지를 활성화시킨 후 추출액을 흡착시키고 2% 메탄올 수용액 5 mL로 2회 세척한다. 2% 개미산 함유 아세토니트릴 : 메탄올(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 새로운 원심분리관으로 용출시킨 후 40℃ 이하의 수욕액상에서 질소농축 한다. 0.1% 개미산 용액 2.5 mL로 재분산하여 1분간 진탕한 후 4℃, 15,000 G에서 10분간 원심분리하고 이 액을 0.45 μm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：C18 (XBridge  2.1 × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
4	95	5
8	30	70
16	30	70
20	95	5
25	95	5

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 20℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary Temperature : 350℃

(3) Collision gas : N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구 이온 (Precusor ion, m/z)	생성 이온 (product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
바시트라신 (Bacitracin)	11.3	1301.56	475.0	199.2	43
				226.80	33

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

그림 1. 바시트라신(11.3분) 표준품의 크로마토그램(0.05 mg/kg)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

바시트라신(Bacitracin) : 0.05 mg/kg

8.3.18∼8.3.22 (현행과 같음)

8.3.23 스펙티노마이신(Spectinomycin)

8.3.23.1 제1법

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 사) (현행과 같음)

아) ----------------------

--------------- 6 mL,

--------------------------

자) (현행과 같음)

5) ∼ 7) (현행과 같음)

8.3.23.2 (현행과 같음)

8.3.24∼8.3.25 (현행과 같음)

8.3.26 나프실린(Nafcillin), 디클록사실린(Dicloxacillin), 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G), 아목시실린(Amoxicillin), 암피실린(Ampicillin), 클록사실린(Cloxacillin), 옥사실린(Oxacillin), 페녹시메틸페니실린 (Phenoxymethyl penicillin, Penicillin V)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 하) (현행과 같음)

거) ----------------------

--------------------- 6 mL --------------

자) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.27 폭심(Phoxim)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 마) (현행과 같음)

바) ------------(6 mL, 500

---------------------

사) (현행과 같음)

5) 시험용액의 조제

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------- 6 mL

-----------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------

6) ∼ 7) (생   략)

8.3.28∼8.3.32 (현행과 같음)

8.3.33. 버지니아마이신(Virginiamycin), 올레안도마이신(Oleandomycin), 에리스로마이신(Erythromycin), 조사마이신(Josamycin), 틸미코신(Tilmicosin)

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 메탄올/아세토니트릴(25:75)용액으로 추출하고 아세토니트릴 포화헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

(현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 나) (현행과 같음)

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 50% 메탄올로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 메탄올/아세토니트릴(25:75)용액 10 mL를 가하여 30초간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 포화헥산 10 mL를 가한다. 10분간 진탕한 후 하층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후 0.2 μm 막 여과지(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	15	85
11	50	50
11.1	15	85
16	15	85

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 0.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy,eV)
버지니아마이신 (Virginiamycin)	9.80	525.6	526.2	109.0	32
				133.0	24
				337.0	22
				355.0	16
올레안도마이신 (Oleandomycin)	6.70	687.8	688.4	116.0	40
				158.0	24
				554.3	14
에리스로마이신 (Erythromycin)	7.31	733.9	734.2	82.9	46
				157.9	26
				576.1	16
조사마이신 (Josamycin)	10.03	827.9	828.1	82.9	38
				108.9	40
				173.9	30
틸미코신 (Tilmicosin)	6.19	869.2	869.2	88.0	60
				173.9	42
				696.2	36

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

버지니아마이신(9.80분)

올레안도마이신(6.70분)

에리스로마이신(7.31분)

조사마이신(10.03)분

틸미코신(6.19분)

그림 1. 버지니아마이신, 올레안도마이신, 에리스로마이신, 조사마이신, 틸미코신 표준품의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 음성검체에(Blank sample)에 혼합표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

버지니아마이신 : 0.005 mg/kg

올레안도마이신 : 0.0005 mg/kg

에리스로마이신 : 0.001 mg/kg

조사마이신 : 0.0005 mg/kg

틸미코신 : 0.001 mg/kg

8.3.34∼8.3.36 (현행과 같음)

8.3.37 오르메토프림(Ormethoprim), 트리메토프림(Trimethoprim)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 오르메토프림, 트리메토프림 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 아세토니트릴 10 mL를 가하여 1분간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,500 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 C18 분말 100 mg을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 옮겨 1분간 균질화한 후 상온에서 4,500 G로 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 질소농축한다. 여기에 0.1% 개미산 용액 1 mL를 가하여 재분산하고 5분간 초음파처리한 후 0.2 μm 막여과지(PVDF membrane filter)로 여과시킨 것을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	10	90
1.0	10	90
6.0	40	60
10.0	95	5
15.0	95	5
15.1	10	90
20.0	10	90

(3) 유속 : 0.2 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.4 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy,eV)
오르메토 프림	5.08	274.31	274.90	80.90	43
				122.90	25
				258.90	27
트리메토 프림	4.77	290.31	291.15	123.04	24
				230.06	22
				261.14	24

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

오르메토프림(5.08분)

트리메토프림(4.77분)

그림 1. 오르메토프림, 트리메토프림 표준품의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

오르메토프림 : 0.001 mg/kg

트리메토프림 : 0.0005 mg/kg

8.3.38∼8.3.39 (현행과 같음)

8.3.40 독시싸이클린(Doxycycline), 미노싸이클린(Minocycline), 옥시테트라싸이클린(Oxytetracycline), 클로르테트라싸이클린(Chlortetracycline),  테트라싸이클린(Tetracycline)

8.3.40.1 (현행과 같음)

8.3.40.2 제2법

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 아) (현행과 같음)

사) ----------------------

-------------- 6 mL--

---------------

아) --------------------

----------------

--------------------

6 mL) 또는 이와 동등한 것

자) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.41 (현행과 같음)

<삭  제>

8.3.42∼8.3.53 (현행과 같음)

<삭  제>

8.3.54∼8.3.55 (현행과 같음)

8.3.56 키타사마이신(Kitasamycin)

1) (현행과 같음)

2) 분석원리

검체 중 키타사마이신을 ------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-----------------.

3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) (현행과 같음)

나) 표준원액 : 키타사마이신 표준품을 ----------------

-----------------------

------------.

다) 표준용액 : -------------

-----------------------

--- 0.5, 1.0, 2.0, 3.0 및 4.0 mg/L가 되게 한다. -------

--------------------.

라) ∼ 마) (현행과 같음)

5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 액체크로마토그래프 조건

(가) 칼럼 : C18(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 칼럼온도 : 25℃

(다) 이동상 : 0.05% 개미산 용액:아세토니트릴 (3:7)

(라) 유속 : 0.3 mL/분

(마) 주입량 : 10 μL

(2) 질량분석기 조건

(가) Ionization : ESI(positive)

(나) Capillary Temperature : 350℃

(다) Collision gas : 아르곤(Ar)

(라) Collision energy : 키타사마이신(49 V), 카페인(31 V)

7) 정량시험

가) ----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

----------, 내부표준물질 카페인의 m/z 138에 대한 키타사마이신 m/z 174의 면적비를 구하고 ------------

-----------------------

--.

물질	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)
키타사마이신	772	174, 109, 215
내부표준물질 (카페인)	195	138

나) 정량한계

키타사마이신 : 0.03 mg/kg

8.3.57∼8.3.63 (현행과 같음)

8.3.64 겐타마이신(Gentamicin), 네오마이신(Neomycin)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 사) (현행과 같음)

아) ---------------------

----------------

----------------------

6 mL ----------------

자) ∼ 차) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.65 (현행과 같음)

<삭  제>

8.3.66∼8.3.83 (현행과 같음)

8.3.84 카르바콜(Carbachol)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (현행과 같음)

마) ---------------------

---------------------

-----------------(6 mL,

---------------------

바) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.85∼8.3.89 (현행과 같음)

8.3.90 폴리믹신 비(Polymyxin B)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (현행과 같음)

마) Plexa 카트리지 : ----------------------------------------------------------------------------------------------------6 mL,----- ------------------

바) ∼ 자) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.91∼8.3.92 (현행과 같음)

8.3.93 푸마길린(Fumagillin)

1) ∼ 3) (생   략)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (생   략)

마) ----------------------

------------------------

---6 mL---------------

---------

바) ∼ 차) (생   략)

5) ∼ 8) (생   략)

8.3.94∼8.3.97 (생   략)

8.3.98 세파드록실(Cefadroxil)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 라) (현행과 같음)

마) ------------3 mL, --

---------------------

바) ∼ 자) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.99∼8.3.100 (현행과 같음)

8.3.101 니트로푸라존(Nitrofurazone)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 바) (현행과 같음)

사) ---------------------

---------------- 6 mL,

-------------------------

아) ∼ 자) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.102∼8.3.103 (현행과 같음)

8.3.104 콜리스틴(Colistin)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 시약 및 시액

가) ∼ 마) (현행과 같음)

바) ----------------------

--------------- 6 mL,

------------------------

사) ∼ 아) (현행과 같음)

5) ∼ 8) (현행과 같음)

8.3.105∼8.3.112 (현행과 같음)

8.3.113. 아미트라즈(Amitraz)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 아세토니트릴, 황산마그네슘, 염화나트륨, 시트르산나트륨, 시트르산수소나트륨 또는 헥산, 이소프로필알코올, 수산화나트륨으로 추출하여 C18 으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 아미트라즈, 2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline, 아미트라즈대사체)표준품을 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도가 되게 한다.

마) 10 mM 개미산암모늄(Ammonium formate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산(Formic acid) 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

사) 0.1 M 수산화나트륨용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 수산화나트륨(NaOH) 4.04 g을 넣고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 가금육

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL을 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가한 뒤 1분간 진탕하고 4℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 취하여 40°C 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리하여 상층액을 취하고 0.2 µm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 후 시험용액으로 한다.

나) 알

균질화한 검체 2 g을 15 mL 원심분리관에 취한다. 여기에 0.1 M 수산화나트륨용액 2 mL, 헥산 4 mL, 이소프로필알코올 1.2 mL을 가한 뒤 1분간 진탕한 후 4℃에서 2,700 G로 5분간 원심분리하여 상층액 ⓐ를 취한다. 잔류물에 다시 0.1 M 수산화나트륨용액 2 mL, 헥산 4 mL, 이소프로필알코올 1.2 mL을 가한 뒤 1분간 진탕한 후 4℃에서 2,700 G로 5분간 원심분리하여 상층액 ⓑ를 취한다. 새로운 50 mL 원심분리관에 상층액 ⓐ와 ⓑ를 합한 후 40°C 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리하여 상층액을 취하고 0.2 µm 막여과지(PTFE membrane filter)로 여과시킨 후 시험용액으로 한다.

다) 우유

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 10 mL을 가한 후 1분간 진탕한다. 여기에 황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 시트르산나트륨 1 g, 시트르산수소나트륨 0.5 g을 가한 뒤 1분간 진탕한 것을 4 ℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 150 mg PSA, 150 mg C18, 900 mg MgSO4를 담겨진 새로운 15 mL 원심분리관에 넣은 후 1분간 진탕하고, 4℃에서 2,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 40℃ 수용액상에서 질소농축한 후 아세토니트릴 1 mL를 가하여 재분산한다. 이를 5분간 초음파처리한 후, 4℃에서 13,500 G로 3분간 원심분리한다. 상층액을 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼: C18 (Phenomenex Luna, 2.0 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 개미산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
3	0	100
9	0	100
10	90	10
15	90	10

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 10 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI (Positive)

(2) Gas Temperature: 350℃

(3) Collision gas: N2(질소)

(4) 분석대상물질의 개별 조건

연번	물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision Energy, eV)
1	아미 트라즈 (Amitraz)	9.2	293.41	294.13	163.20	19
					122.10	43
					107.10	59
2	2,4-디메틸아닐린 (2,4-Dimethylaniline)	6.7	121.18	122.06	107.10	23
					77.00	39
					105.10	23

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성시험

가) 정성

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Response ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

아미트라즈(9.2분)

2,4-디메틸아닐린(6.7분)

그림 1. 아미트라즈, 2,4-디메틸아닐린 표준품의 크로마토그램 (각 0.005 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

정성시험과 똑같은 조건에서 표준용액을 일정농도로 제조한 후 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성하고, 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 각각 정량한다.

나) 정량한계

아미트라즈(Amitraz): 0.001 mg/kg

2,4-디메틸아닐린(2,4-Dimethylaniline): 0.005 mg/kg

9. (현행과 같음)

10. 식품 중 유해물질

10.1∼ 10.8 (현행과 같음)

10.9  3-MCPD(3-Monochloropropane-1,2-diol)

가. (현행과 같음)

나. 분석원리

원심분리한 시험액의 상층액을 정제칼럼에 적재한 ---- ------------------------------------------------------------------------------------.

다. (현행과 같음)

라. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 정제칼럼 : 다공성 규조토 정제칼럼(최대 시료부피 3 mL)

-----------------.

4) (현행과 같음)

5) --------------------- -------------------5개---------------------.

6) (현행과 같음)

7) ---------------------- ----------------------10 ㎍/mL-----------.

8) (현행과 같음)

마. 시험 용액의 조제

1) 추출

---------------------------------------------------------------------------------------정제칼럼 상단에 무수황산나트륨 약 1 g을 가한 뒤 위의 상층액 2 mL과 내부표준용액 50 μL를 적재하고, 약 10분간 정치하여 흡착시킨 후 디클로로메탄 60 mL을 분당 약 2 mL 정도로 용출한다. 용출액을--------------------

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 100 uL가 되도록 -- ------.

<삭 제>

2) 유도체화

------------------------------ 900 μL --------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 5개 - ------- 50 μL, ----------

-- 50 μL ---------------- ------------------------

------------------------.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프/질량분석기 측정 조건

가) ∼ 사) (현행과 같음)

아) 특성이온질량 :

3-MCPD 유도체 화합물 :

m/z 253, 275, 289, 291, 453

내부표준물질 유도체 화합물   :

m/z 257, 278, 294, 456

2) (현행과 같음)

3) 표준품의 크로마토그램

3-MCPD-d5

3-MCPD

그림 1. 내부표준품(3-MCPD-d5)과 표준품(3-MCPD)의 크로마토그램

4) 표준품의 스펙트럼

그림 2. 내부표준품(3-MCPD-d5, 위)과 표준품(3-MCPD, 아래)의 질량스펙트럼

5) 정량한계 : 0.002 mg/kg

사. 정성시험

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 253과 275, 289, 291 및 453 ------------

------------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------.

아. (현행과 같음)

10.10 ∼ 10.13 (현행과 같음)

11. 식품표시 관련 시험법

11.1 유전자변형식품의 시험법

11.1.1 ∼ 11.1.4 (현행과 같음)

11.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 시약 및 시액

1) (현행과 같음)

2) PCR용 시약의 조제

가) ∼ 다) (현행과 같음)

표 1. 유전자변형 콩의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	콩 lectin (118 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	콩 lectin (74 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	tNOS (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조 유전자	RRS (GTS40-3-2) (121 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON89788 (139 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	A2704-12 (153 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	A2704-12 (64 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP356043-5 (145 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP356043-5 (99 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP305423-1 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP305423-1 (93 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	A5547-127 (150 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	A5547-127 (75 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87701 (150 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87701 (89 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	CV127 (135 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	CV127 (88 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87705 (92 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87705 (86 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87708 (105 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87708 (96 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87769 (111 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87769 (87 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	FG72 (115 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	FG72 (70 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS-44406-6 (145 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS-44406-6 (99 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS-68416-4 (128 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS-68416-4 (87 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	SYHT0H2 (140 bp)	FE5313 F	5'-CGC GCA AAC TAG GAT AAA TTA TCG C-3'
		FE08317 R	5'-TGT GTG CCA TTG GTT TAG GGT-3'
	SYHT0H2 (88 bp)	FE08316 fwd	5'-GGG AAT TGG GTA CCA TGC C-3'
		FE08317 rev	5'-TGT GTG CCA TTG GTT TAG GGT-3'
		FE08318 probe	5'-FAM-CCA GCA TGG CCG TAT CCG CAA-BHQ1-3'
	DAS-81419-2 (117 bp)	814-F1	5'-ACA GCA CTT ATT GGT ACT TGT CC-3'
		814-R4	5'-GGA TCA ACA GGC ACC GAT G-3'
	DAS-81419-2 (105 bp)	DAS81419-f2	5'-TCT AGC TAT ATT TAG CAC TTG ATA TTC AT-3'
		DAS81419-r1	5'-GCT TCA AGA TCC CAA CTT GCG-3'
		DAS81419-p3	5'-FAM-ATC AAC AGG CAC CGA TGC GCA CCG-TAMRA-3'
	MON87751 (202 bp)	87751G1	5'-TCG AAC ATT GCA CGA CTC CCA TGA-3'
		87751G2	5'-GGC CTA ACT TTT GGT GTG ATG ATG-3'
	MON87751 (87 bp)	MON 87751 Q1	5'-GGC CTA ACT TTT GGT GTG ATG ATG-3'
		MON 87751 Q2	5'-CTA AAT TGC TCT TTG GAG TTT ATT TTG TAG-3'
		MON 87751 Q3	5'-FAM-TGA CTG GAG ATC TCC AAA GTG AGG GGA AA-TAMRA-3'

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 hmg (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NOS (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	Bt11 (127 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GA21 (133 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	T25 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON810 (113 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (143 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (108 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (103 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (58 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (142 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (76 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON89034 (112 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (92 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (147 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (80 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (85 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (82 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (107 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (144 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (98 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP004114-3 (118 bp)	DP4114-3-F	5'-TTA AAA ACG TCC GCA ATG TG-3'
		DP4114-3-R	5'-CCG CGC TGT TTT CTA GTT TT-3'
	DP004114-3 (90 bp)	08-O-2677	5'-CGT TTG TAG CAC TTG CAC GTA GT-3'
		08-O-2678	5'-GGT AAC CGC TCT TCC AGT TGA A-3'
		08-QP74	5'-FAM-AAG CTT CAA CAC AGA TC-MGB-3'
	MON87411 (112 bp)	87411 primer G1	5'-TAG AGC GGC CGC GTT TAA ACT ATC-3'
		87411 primer G2	5'-ACC AGT TCA ATA GAA AAG TAT GCA CAC-3'
	MON87411 (109 bp)	87411 QF	5'-CTC TGT AAC AGA AAA CAC CAT CTA GAG-3'
		87411 QR	5'-ACA AAA GTG AAC TAG TTC TAG GGT AGA T-3'
		87411 QP	5'-FAM-CCG CGT TTA AAC TAT CAG TGT TTA GAG AAT-TAMRA-3'
	MON 87419 (184 bp)	87419-184G1	5'-GGT CGC TGC CAG GTA TTG ATG TG-3'
		87419-184G2	5'-GAT TCG CTA CCT TAG GAC CGT TAT AG-3'
	MON87419 (97bp)	87419 QF	5'-CGG TCG CTG CCA GGT ATT G-3'
		87419 QR	5'-CAG ACC TCA ATT GCG AGC TTT CT-3'
		87419 QP	5'-FAM-TGT GCG CCA GTC AGC ATC ATC ACA CC-TAMRA-3'

표 3. ∼ 표 4. (현행과 같음)

라. 시험조작(PCR)

(현행과 같음)

① ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS- 44406-6, DAS-68416-4, SYHT0H2, DAS81419-2, MON87751(이상 콩),-----

----------------------

---------------------- DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

② ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

③ ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

④ ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

------------ DAS-68416-4, DAS-81419 -2, MON87751(이상 콩), --------, DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

마. (현행과 같음)

바. 분석 결과의 판정 및 처리

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) ------------------------

-----------------------

-----------------------

--------RRS, SYHT0H2, Bt11, -----------------

-----------------------

-----------------------

----------------------- RRS, SYHT0H2, A2704-12,

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

MON87427, DP004114-3, MON87411이  ----------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-------------.

4) (현행과 같음)

11.1.6 ∼ 11.1.10 (현행과 같음)

11.1.11 유전자변형 면화

(현행과 같음)

가. ∼ 나. (현행과 같음)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	면화 (76 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조 유전자	531* (72 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	1445 (87 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	15985 (82 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88913 (94 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	LLCotton25 (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	281/3006 (111 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GHB614 (120 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	T304-40 (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GHB119 (90 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	COT102 (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88701 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS81910-7 (120 bp)	1706-f2	5'-AAG CTT AGG TGA TTT CGA TGA TG-3'
		1706-r3	5'-GAC CTC AAT TGC GAG CTT TC-3'
		1706-p3	5'-FAM-CAC ACC AAA AGT TAG GCC CG-TAMRA-3'

표 9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

다. ∼ 라. (현행과 같음)

11.1.12 (현행과 같음)

11.1.13 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)

(현행과 같음)

가. ∼ 나. (현행과 같음)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	알팔파(alfalfa) (127 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	알팔파(alfalfa) J101 (121bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	알팔파(alfalfa) J163 (105bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	알팔파(alfalfa) KK179 (88 bp)	KK179 primer1	5'-GAA GCT AGC TTG ATG GGG ATC AGA-3'
		KK179 primer2	5'-AAA GTA ACT AGG CTA AAG TAA GAT ATC GAA GA-3'
		KK179 probe	5'-FAM-AAG AGG TTT TGA AGG CGG GAA ACG ACA-TAMRA-3'

표 23. 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)

다. ∼ 라. (현행과 같음)

11.1.14 (현행과 같음)

11.2 ∼ 11.5 (현행과 같음)

12. ∼ 13. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
A가000100 ∼ A가047600	(현행과 같음)
A가047700	도두	작두콩	Canavalia gladiatia	씨앗
A가047800 ∼ A가081800	(현행과 같음)
A가081900	베라알로에	알로에베라, Aloe barbadensis	Aloe vera (L.) Burm. f.	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함)] 제외
A가082000 ∼ A가082600	(현행과 같음)
A가082700	벨벳빈	Velvet bean	Mucuna pruriens	순, 열매(열매를 물에 침지한 후 2-3차례 물을 교체하면서 3일동안 침지시킨 후 물을 버린 후 사용)
A가082800 ∼ A가368700	(현행과 같음)

2. 동물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사사용 부위 (생약명)
A나000100 ∼ A나095100	(현행과 같음)
	상기의 ※ 표시된 품목은 「대한민국약전외한약(생약)규격집」(식품의약품안전처 고시)에 적합한 것이어야 한다. 다만, 수산물은 상기에서 명시된 동물성 수산물 이외에도 국제적으로 공인된 기구(Food and Agriculture Organization of the United Nations의 Fisheries & Aquaculture, WorldFish의 Fishbase, World Register of Marine Species 등)에서 어획량에 대한 정보가 확인되고, 식용 근거, 학명·이명 등이 확인된 경우는 식품에 사용가능한 원료로 사용할 수 있다. 다만, 별표 2에서 정하고 있는 원료와 기름치는 제외한다.

3. 미생물

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	비고
A다000100 ∼ A다006000	(현행과 같음)
A다006100	Saccharomyces fragilis	Kluyveromyces fragilis, Kluyveromyces marxianus, Saccharomyces marxianus, Kluyveromyces cicerisporus, Candida pseudotropicalis, Candida kefyr	Saccharomyces fragilis	-
A다006200 ∼ A다007000	(현행과 같음)

4. 기타

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
A라000100 ∼ A라001500	(현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가002900	(현행과 같음)
B가002950	도두	작두콩	Canavalia gladiatia	어린(연한) 부풀기 전의 꼬투리에 한함	-
B가003000 ∼ B가014800	(현행과 같음)

2. 동물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B나000100 ∼ B나000800	(현행과 같음)

3. 미생물

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
B다000100 ∼ B다000900	(현행과 같음)
<삭 제>
B다001000	(현행과 같음)
<삭 제>
B다001100 ∼ B다002500	(현행과 같음)
<삭 제>
B다002600 ∼ B다002700	(현행과 같음)

4. 기타

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B라000100 ∼ B라000800	(현행과 같음)

[별표 3] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) 이미녹타딘(Iminoctadine)

(현행과 같음)

고추	2.0

구기자(건조)	10

딸기	2.0

매실	2.0

배	0.1

복숭아	0.5

부추	2.0

사과	1.0

오이	0.5

율무	0.1

토마토	0.7

포도	1.0

피망	2.0

구기자	3.0

(2) ∼ (6) (현행과 같음)

(7) 다미노자이드(Daminozide)

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

농산물	0.01

(8) ∼ (13) (현행과 같음)

(14) 디메토에이트(Dimethoate)

(현행과 같음)

두류	2.0

(15) ∼ (18) (현행과 같음)

(19) 디코폴(Dicofol)

(현행과 같음)

두류	0.1

(20) 다이쾃(Diquat)

(현행과 같음)

두류	0.5

(21) (현행과 같음)

(22) 디클로플루아니드(Dichlofluanid)

(현행과 같음)

두류	0.2

(23) 디클로란(Dicloran)

(현행과 같음)

두류	20.0

(24) ∼ (31) (현행과 같음)

(32) 말라티온(Malathion)

(현행과 같음)

두류	0.5

(33) (현행과 같음)

(34) 메빈포스(Mevinphos)

(현행과 같음)

두류	0.1

(35) 메토밀(Methomyl)

(현행과 같음)

두류	0.1

(36) ∼ (37) (현행과 같음)

(38) 메탈락실(Metalaxyl)

(현행과 같음)

아몬드	0.3†

(39) (현행과 같음)

(40) 메톨라클로르(Metolachlor)

(현행과 같음)

두류	0.3

(41) 메토브로뮤론(Metobromuron)

(현행과 같음)

두류	0.2

(42) (현행과 같음)

(43) 메톡시클로르(Methoxychlor)

(현행과 같음)

두류	14.0

(44) 메트리뷰진(Metribuzin)

(현행과 같음)

두류	0.05

(45) (현행과 같음)

(46) 메틸브로마이드(Methylbromide)

(현행과 같음)

두류	50

(47) 모노크로토포스(Monocrotophos)

(현행과 같음)

두류	0.2

(48) ∼ (53) (현행과 같음)

(54) 벤타존(Bentazone)

(현행과 같음)

두류	0.2

(55) ∼ (57) (현행과 같음)

(58) 비에치시(BHC)

(현행과 같음)

두류	0.01

(59) 비터타놀(Bitertanol)

(현행과 같음)

두류	0.2

(60) (현행과 같음)

(61) 비펜트린(Bifenthrin)

(현행과 같음)

풋마늘	0.2

(62) (현행과 같음)

(63) 세톡시딤(Sethoxydim)

(현행과 같음)

대두	0.05†

두류	30.0

유채씨	0.05†

(64) ∼ (65) (현행과 같음)

(66) 사이퍼메트린(Cypermethrin)

(현행과 같음)

두류	0.05

(67) 사이플루트린(Cyfluthrin)

(현행과 같음)

두류	0.5

밤	0.05

(68) 사이할로트린(Cyhalothrin)

(현행과 같음)

두류	0.2

(69) 사이헥사틴(Cyhexatin)

(현행과 같음)

두류	0.2

(70) ∼ (74) (현행과 같음)

(75) 아진포스메틸(Azinphos-methyl)

(현행과 같음)

두류	0.2

(76) ∼ (77) (현행과 같음)

(78) 알라클로르(Alachlor)

(현행과 같음)

두류	0.1

(79) 알루미늄포스파이드[Aluminium phosphide(Hydrogen phosphide)]

(현행과 같음)

두류	0.1

(80) ∼ (81) (현행과 같음)

(82) 에티오펜카브(Ethiofencarb)

(현행과 같음)

두류	1.0

(83) (현행과 같음)

(84) 에탈플루랄린(Ethalfluralin)

(현행과 같음)

두류	0.05

(85) ∼ (92) (현행과 같음)

(93) 오메토에이트(Omethoate)

(현행과 같음)

두류	0.01

(94) ∼ (100) (현행과 같음)

(101) 이미다클로프리드(Imidacloprid)

(현행과 같음)

대두	1.5†

딸기	0.4†

(102) ∼ (104) (현행과 같음)

(105) 이프로디온(Iprodione)

(현행과 같음)

두류	0.2

대추	5.0

대추(건조)	10

들깻잎	20

(106) ∼ (111) (현행과 같음)

(112) 카벤다짐(Carbendazim)

(현행과 같음)

보리	0.3

(113) 카보페노티온(Carbophenothion)

(현행과 같음)

두류	0.02

(114) 카보퓨란(Carbofuran)

(현행과 같음)

두류	0.2

(115) 카복신(Carboxin)

(현행과 같음)

두류	0.2

(116) ∼ (117) (현행과 같음)

(118) 캡탄(Captan)

(현행과 같음)

두류	5.0

(119) ∼ (123) (현행과 같음)

(124) 클로로벤질레이트(Chlorobenzilate)

(현행과 같음)

두류	0.02

(125) ∼ (128) (현행과 같음)

(129) 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos)

(현행과 같음)

두류	0.05

(130) 클로르프로팜(Chlorpropham)

(현행과 같음)

두류	0.2

(131) 클로르피리포스(Chlorpyrifos)

(현행과 같음)

밀	0.4†

(132) (현행과 같음)

(133) 테부코나졸(Tebuconazole)

(현행과 같음)

멜론	0.2†

자두	0.9†

(134) ∼ (147) (현행과 같음)

(148) 트리플루랄린(Trifluralin)

(현행과 같음)

두류	0.1

(149) ∼ (151) (현행과 같음)

(152) 티오벤카브(Thiobencarb)

(현행과 같음)

두류	0.2

(153) 파라티온(Parathion)

(현행과 같음)

두류	0.3

(154) (현행과 같음)

(155) 파라티온메틸(Parathion-Methyl)

(현행과 같음)

두류	1.0

(156) (현행과 같음)

(157) 퍼메트린[Permethin(Permetrin)]

(현행과 같음)

두류	0.2

(158) (현행과 같음)

(159) 페나미포스(Fenamiphos)

(현행과 같음)

두류	0.05

(160) ∼ (161) (현행과 같음)

(162) 페니트로티온(Fenitrothion: MEP)

(현행과 같음)

고구마	0.05

배	0.5

양파	0.05

(163) 펜디메탈린(Pendimethalin)

(현행과 같음)

두류	0.2

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(현행과 같음)

두류	0.5

(165) (현행과 같음)

(166) 펜뷰타틴옥사이드(Fenbutatin Oxide)

(현행과 같음)

두류	0.5

(167) ∼ (176) (현행과 같음)

(177) 포스파미돈(Phosphamidon)

(현행과 같음)

두류	0.2

(178) ∼ (185) (현행과 같음)

(186) 프로클로라즈(Prochloraz)

(현행과 같음)

딸기	2.0

수박	1.0

(187) (현행과 같음)

(188) 프로파모카브(Propamocarb)

(현행과 같음)

토마토	5.0

(189) ∼ (191) (현행과 같음)

(192) 프로피코나졸(Propiconazole)

(현행과 같음)

대두	0.06†

바나나	0.1†

(193) (현행과 같음)

(194) 피레트린(Pyrethrins)

(현행과 같음)

두류	1.0

(195) ∼ (199) (현행과 같음)

(200) 헥사코나졸(Hexaconazole)

(현행과 같음)

자두	0.05

(201) ∼ (209) (현행과 같음)

(210) 페나자퀸(Fenazaquin)

(현행과 같음)

고추	2.0

피망	2.0

(211) ∼ (227) (현행과 같음)

(228) 아족시스트로빈(Azoxystrobin)

(현행과 같음)

자두	1.0

(229) ∼ (234) (현행과 같음)

(235) 포스티아제이트(Fosthiazate)

(현행과 같음)

마	0.05

바나나	0.04†

(236) ∼ (237) (현행과 같음)

(238) 플루디옥소닐(Fludioxonil)

(현행과 같음)

강낭콩	0.4†

리마콩(생)	0.4†

풋콩	0.4†

(239) ∼ (247) (현행과 같음)

(248) 아바멕틴(Abamectin)

(현행과 같음)

들깻잎	0.7

(249) ∼ (284) (현행과 같음)

(285) 아크리나트린(Acrinathrin)

(현행과 같음)

배	0.2

(286) 에트리디아졸(Etridiazole)

(현행과 같음)

배추	0.07

엇갈이배추	0.2

(287) ∼ (298) (현행과 같음)

(299) 티플루자마이드(Thifluzamide)

(현행과 같음)

배추	0.2

엇갈이배추	0.5

취나물	5.0

(300) ∼ (308) (현행과 같음)

(309) 플루톨라닐(Flutolanil)

(현행과 같음)

취나물	7.0

(310) ∼ (320) (현행과 같음)

(321) 디노테퓨란(Dinotefuran)

(현행과 같음)

다채	7.0

살구	1.0

수수	1.0

우엉	0.7

우엉잎	20

자두	2.0

(322) ∼ (331) (현행과 같음)

(332) 클로티아니딘(Clothianidin)

(현행과 같음)

블루베리	1.0

고구마	0.05

유채씨	0.1

(333) ∼ (334) (현행과 같음)

(335) 트리플록시스트로빈(Trifloxystrobin)

(현행과 같음)

두류	0.01†

(336) (현행과 같음)

(337) 티아메톡삼(Thiamethoxam)

(현행과 같음)

유채씨	0.05

(338) ∼ (344) (현행과 같음)

(345) 피라클로스트로빈(Pyraclostrobin)

(현행과 같음)

시금치	10

(346) ∼ (348) (현행과 같음)

(349) 노발루론(Novaluron)

(현행과 같음)

감	0.5

(350) ∼ (351) (현행과 같음)

(352) 메톡시페노자이드(Methoxyfenozide)

(현행과 같음)

양배추	0.05

(353) 메트코나졸(Metconazole)

(현행과 같음)

풋마늘	0.2

대추	1.0

대추(건조)	10

(354) ∼ (379) (현행과 같음)

(380) 피리달릴(Pyridalyl)

(현행과 같음)

비트(뿌리)	0.5

비트(잎)	10

(381) ∼ (385) (현행과 같음)

(386) 플로니카미드(Flonicamid)

(현행과 같음)

참외	0.5

(387) ∼ (393) (현행과 같음)

(394) 비스트리플루론(Bistrifluron)

(현행과 같음)

대두	0.1

옥수수	0.05

풋콩	1.0

(395) ∼ (398) (현행과 같음)

(399) 사이플루메토펜(Cyflumetofen)

(현행과 같음)

피망	2.0

(400) ∼ (402) (현행과 같음)

(403) 메타플루미존(Metaflumizone)

(현행과 같음)

대두	0.05

시금치	10

토마토	0.7

풋콩	0.7

(404) ∼ (407) (현행과 같음)

(408) 스피네토람(Spinetoram)

(현행과 같음)

사과	0.05

파	0.8†

(409) (현행과 같음)

(410) 옥솔린산(Oxolinic acid)

(현행과 같음)

오이	0.7

(411) ∼ (414) (현행과 같음)

(415) 크로마페노자이드(Chromafenozide)

(현행과 같음)

대두	0.05

밤	0.05

풋콩	0.2

(416) ∼ (421) (현행과 같음)

(422) 펜티오피라드(Penthiopyrad)

(현행과 같음)

감귤	0.7

매실	1.0

복숭아	0.2

자두	0.2

(423) (현행과 같음)

(424) 피리플루퀴나존(Pyrifluquinazon)

(현행과 같음)

건삼	0.05

수삼	0.05

(425) ∼ (429) (현행과 같음)

(430) 설폭사플로르(Sulfoxaflor)

(현행과 같음)

복숭아	0.5

(431) (현행과 같음)

(432) 사플루페나실(Saflufenacil)

(현행과 같음)

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

<삭    제>

밀	0.5†

두류	0.3†

(433) ∼ (436) (현행과 같음)

(437) 플룩사피록사드(Fluxapyroxad)

(현행과 같음)

두류	0.3†

매실	1.0

쌀	0.05

취나물	10

(438) (현행과 같음)

(439) 스피로테트라맷(Spirotetramat)

(현행과 같음)

건삼	0.05

건포도	4.0†

두류	2.0†

두류(생)	1.5†

셀러리	4.0†

수삼	0.05

양파	0.3†

엽채류	5.0†

크랜베리	0.2†

풋콩	1.5†

(440) ∼ (441) (현행과 같음)

(442) 플루피라디퓨론(Flupyradifurone)

◎ 잔류물의 정의 : Flupyradifurone

(현행과 같음)

감귤	2.0

감귤류	3.0†

감자	0.05†

곡류(쌀제외)	3.0†

당근	0.9†

두류	1.5†

딸기	1.5†

무	0.15†

밀	1.0†

박과과채류	0.4†

블루베리	4.0†

상추	15†

셀러리	9.0†

시금치	30†

양배추	1.5†

양상추	4.0†

옥수수	0.05†

완두	3.0†

핵과류	1.5†

호프	10†

(443) ∼ (452) (현행과 같음)

(453) 만데스트로빈(Mandestrobin)

(현행과 같음)

건삼	0.5

매실	5.0

상추	30

수삼	0.2

양상추	30

(454) (현행과 같음)

(455) 옥사티아피프롤린(Oxathiapiprolin)

(현행과 같음)

배추	0.7

엇갈이배추	2.0

(456) ∼ (457) (현행과 같음)

(458) 사이클라닐리프롤(Cyclaniliprole)

(현행과 같음)

감	0.05

감귤	0.3

무(뿌리)	0.2

무(잎)	7.0

배	0.2

복숭아	0.2

사과	0.2

수박	0.1

오이	0.2

옥수수	0.05

포도	0.5

(459) 피플루뷰마이드(Pyflubumide)

(현행과 같음)

딸기	2.0

(460) 피카뷰트라족스(Picarbutrazox)

(현행과 같음)

고추	2.0

피망	2.0

(461) ∼ (463) (현행과 같음)

(464) 스피록사민(Spiroxamine)

◎ 잔류물의 정의 : Spiroxamine

바나나	3.0†

(465) 톨펜피라드(Tolfenpyrad)

◎ 잔류물의 정의 : Tolfenpyrad

견과류	0.01†

(466) 펜플루펜(Penflufen)

◎ 잔류물의 정의 : Penflufen

쌀	0.05

* 주1. ∼ 주9. (현행과 같음)

[별표 4] 축산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (7) (현행과 같음)

(8) 디클로르보스(Dichlorvos)

(현행과 같음)

가금류고기(닭고기 제외)	0.05

포유류고기(소고기, 돼지고기 제외) 0.05

<삭  제>

(9) (현행과 같음)

(10) 메토밀(Methomyl)

(현행과 같음)

포유류고기(소고기, 돼지고기 제외)	0.02

<삭  제>

(11) ∼ (19) (현행과 같음)

(20) 사이로마진(Cyromazine)

(현행과 같음)

가금류고기(닭고기 제외)	0.05

<삭  제>

(21) ∼ (57) (현행과 같음)

<삭  제>

(58) ∼ (61) (현행과 같음)

(62) 프로폭서(Propoxur)

(현행과 같음)

포유류고기(소고기, 돼지고기 제외)	0.05

(63) ∼ (84) (현행과 같음)

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 겐타마이신(Gentamicin) : 항균제

(현행과 같음)

가금근육	0.1

가금간	0.1

가금지방	0.1

가금신장	0.1

염소근육	0.1

염소간	2.0

염소지방	0.1

염소신장	5.0

양근육	0.1

양간	2.0

양지방	0.1

양신장	5.0

말근육	0.1

말간	2.0

말지방	0.1

말신장	5.0

(2) 나이카바진(Nicarbazin) : 항원충제

(현행과 같음)

가금근육	0.2

가금간	0.2

가금지방/피부	0.2

가금신장	0.2

(3) 네오마이신(Neomycin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.5

말간	0.5

말지방	0.5

말신장	10.0

(4) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 디클라주릴(Diclazuril) : 항원충제

(현행과 같음)

소근육	0.5

소간	3.0

소지방	1.0

소신장	2.0

(10) ∼ (16) (현행과 같음)

(17) 살리노마이신(Salinomycin) : 항원충제

(현행과 같음)

양근육	0.02

양간	0.4

양지방	0.02

양신장	0.5

(18) ∼ (21) (현행과 같음)

(22) 아목시실린(Amoxicillin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

(23) ∼ (25) (현행과 같음)

(26) 에리스로마이신(Erythromycin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

(27) ∼ (29) (현행과 같음)

(30) 옥소린산(Oxolinic acid) : 항균제

(현행과 같음)

가금근육	0.1

가금간	0.15

가금지방	0.05

가금신장	0.15

양근육	0.05

염소근육	0.05

(31) 옥시테트라싸이클린/클로르테트라싸이클린/테트라싸이클린 (Oxytetracycline /Chlortetracycline / Tetracycline, 합으로서) : 항균제

(현행과 같음)

가금근육	0.2

가금간	0.6

가금신장	1.2

<삭  제>

<삭  제>

<삭  제>

말근육	0.2

말간	0.6

말신장	1.2

(32) ∼ (40) (현행과 같음)

(41) 트리클라벤다졸(Triclabendazole) : 구충제

(현행과 같음)

염소근육	0.2

염소간	0.3

염소지방	0.1

염소신장	0.3

(41) ∼ (65) (현행과 같음)

(66) 콜리스틴(Colistin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.15

말간	0.15

말지방	0.15

말신장	0.2

(67) ∼ (73) (현행과 같음)

(74) 이미도캅(Imidocarb) : 항원충제

(현행과 같음)

염소근육	0.3

염소간	1.5

염소지방	0.05

염소신장	2.0

말근육	0.3

말간	1.5

말지방	0.05

말신장	2.0

(75) ∼ (85) (현행과 같음)

(86) 세파졸린(Cefazolin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.05

말간	0.05

말지방	0.05

말신장	0.05

(87) ∼ (93) (현행과 같음)

(94) 옥시벤다졸(Oxibendazole) : 구충제

(현행과 같음)

양근육	0.1

양간	0.2

양지방	0.5

양신장	0.1

염소근육	0.1

염소간	0.2

염소지방	0.5

염소신장	0.1

(95) (현행과 같음)

(96) 카나마이신(Kanamycin) : 항균제

(현행과 같음)

말근육	0.1

말간	0.6

말지방	0.1

말신장	2.5

(97) ∼ (102) (현행과 같음)

(103) 트리메토프림(Trimethoprim) : 항균제

(현행과 같음)

사슴근육	0.05

사슴간	0.05

사슴지방	0.05

사슴신장	0.05

토끼근육	0.05

토끼간	0.05

토끼지방	0.05

토끼신장	0.05

(104) ∼ (184) (현행과 같음)

[별표 6] (현행과 같음)

[별표 7]

제1조 ∼ 7조 (현행과 같음)

제8조(결과 통보) ----------------

------------------------------

------------------------시행규칙 별지 제1호의 3 서식에 따라 -----

---------------.

부칙(제2016-154호)

제1조(시행일) ① (생  략)

② (생  략)

1. ∼ 3. (생  략)

<신설>

③ ∼ ④ (생  략)

제2조 ∼ 제5조 (생  략)

부칙(제2016-154호)

제1조(시행일) ① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

1. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 시행일 : 2017년 9월 30일(아래 각 목의 식품유형 명칭 및 각 식품유형의 기준 및 규격)

가. 제4. 7-2 4) (5) 기타동물성유지

나, 제4. 20-1 4) (2) 기타 동물성가공식품

다. 제4. 20-2 곤충가공식품

라. 제4. 22-3 4) (2) 만두피

③ ∼ ④ (현행과 같음)

제2조 ∼ 제5조 (현행과 같음)

신․ 구조문 대비표