식품의약품안전처 공고 제2017-124호

축산물의 가공기준 및 성분규격

일부개정고시(안) 행정예고

2017.3.13.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2017-124호

｢축산물 위생관리법｣ 제4조제2항의 규정에 따라 ｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣을 다음과 같이 개정함에 있어 개정의 취지와 내용을 국민에게 미리 알려 의견을 듣고자 ｢행정절차법｣ 제46조의 규정에 의하여 다음과 같이 공고합니다.

2017년 3월 13일

식품의약품안전처장

｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣ 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

불량 달걀을 유통·판매하거나 가공품의 원료로 사용하는 등 위반사례가 지속되고 있고, 달걀의 신선도 등에 대한 관심이 증대됨에 따라 안전한 신선란 공급을 위해 달걀의 세척기준 및 보존·유통기준을 신설하고, 알가공품의 가공기준을 개정하여 국민에게 안전한 축산물을 공급하고자 함

냉동 자연치즈, 가공치즈, 버터류를 해동판매할 수 있도록 보존 및 유통기준을 합리적으로 개선하고자 함

미생물의 신속한 검사를 위해 분자생물학적 검사법을 도입하고, 식용란의 살모넬라 시험법을 개정하여 검사의 효율성 및 신속성을 제고하고자 함

현행 고시에서 원료알과 식용란의 구분이 모호하므로 원료알 관련 용어를 개정하여 그 의미를 명확히 하고자 함

2. 주요 내용

가. 달걀의 세척 및 보관방법 신설[안 제2. 7. 자, 차]

1) 달걀의 신선도 및 위생확보를 위하여 세척기준 및 보존·유통기준 마련 필요

2) 달걀 세척 시, 차아염소산 나트륨이 함유된 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물로 세척하도록 하고, 세척란 및 냉장보관 중인 달걀은 냉장에서 보존·유통하도록 규정 신설

3) 달걀의 세척방법과 보존유통 온도를 신설하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

나. 달걀의 유통기간 산출기준 등 개정[안 제2. 7. 러, 제2. 7. 머]

1) 유통기간 산출기준의 합리적 설정 필요

2) 혼합 또는 단순처리 제품에 대한 유통기한 설정시점을 명확히 하기 위해 문구 개정

3) 달걀을 장기간 냉장보관한 후, 포장일자를 유통기간 산출시점으로 하는 현행 규정에 따라 포장일로부터 유통기간을 표시하고 신선란인 것처럼 유통하는 것을 방지하기 위해 달걀의 유통기간 산출시점을 ‘산란일자(채집일자)’로 하도록 단서조항 신설

4) 냉동 자연치즈, 가공치즈, 버터류의 해동 판매 허용

5) 축산물에 대한 보존 및 유통기준을 합리적으로 개정하여 소비자의 편의를 제고하고 국민에게 안전한 식품을 제공하고자 함

다. 알가공품의 가공기준 개정[안 제2. 1. 가. (9), 제3. 3. (3) (가), 제3. 3. (3) (다), 제3. 3. (3) (라), 제3. 3. (3) (차), 제3. 3. (3) (타)]

1) 위생상태가 불량한 알가공품이 유통되지 않도록 알가공품의 제조·가공기준 개정 필요

2) 본 규정에서 정하는 원료알이 알가공품의 제조·가공에 사용하는 식용란임을 명확히 하도록 원료알의 보관기준을 알가공품의 가공기준으로 이동

3) 가공용 식용란의 세척기준 개정 및 보관기준 신설

4) 할란한 상태의 알내용물은 쉽게 부패·변질될 수 있으므로, 5℃이하에서 72시간 이내에 사용하도록 규정 신설

5) 알내용물 채취 시 난각표면에 묻어 있는 오염물질 등이 알내용물에 교차오염되는 것을 방지하기 위해 원심분리 또는 압착방법을 통한 알내용물 채취 금지 규정 신설

6) 알가공품의 제조·가공기준을 개정하여 위생상 안전성을 확보함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

라. 미생물시험법 신설 및 개정[안 제1. 1. 도, 제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (다), 제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (라), 제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (마), 제4. Ⅱ. 9. 파. (가) 4) 및 안 제4. Ⅱ. 9. 어]

1) 식중독균 등 미생물의 신속한 검출을 위해 분자생물학적 시험방법 도입 필요

2) 분자생물학적 방법을 사용할 수 있도록 총칙 및 일반사항 개정

3) 식용란의 살모넬라 검출을 위한 관련 시험법 개정

4) 축산물 중 미생물시험법을 개정하여 검사 신뢰도 및 효율성을 제고함으로써 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

마. 용어 개정[안 제2. 1. 가. (10), , 제3. 3. (3) (카), 제4. Ⅱ. 9. 파. (3) (가) 2), 제4. Ⅱ. 9. 파. (3) (가) 3), 제4. Ⅱ. 9. 거. (3) (가) 2), 제4. Ⅱ. 9. 거. (3) (가) 3), 제4. Ⅲ, 제4. Ⅲ. 3, 제4. Ⅲ. 3. 다. (1) (나)]

‘원료알’과 ‘식용란’의 명확히 전달될 수 있도록 관련 용어 개정

3. 의견 제출

｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣ 일부개정 고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2017년 4월 2일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처(우편번호 : 363-700, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187(연제리 643번지) 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조: 식품기준과, 전화 043-719-2414, 2420, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2017-   호

｢축산물 위생관리법｣ 제4조제2항의 규정에 따른 ｢축산물의 가공기준 및 성분규격｣(식품의약품안전처 고시 제2016-130호, 2016.12.5.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2017년    월    일

식품의약품안전처장

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부개정고시(안)

축산물의 가공기준 및 성분규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 1. 도 중 “Kit”를 “키트(kit) 또는 장비”로 한다.

제2. 1. 가. (9)를 다음과 같이 한다.

원유는  0～10℃에, 원료육은 냉장 시 5℃이하, 냉동 시는 -18℃이하에서 보존하여야 한다.

제2. 1. 가. (10) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제2. 7. 중 자를 다음과 같이 한다.

자. 식용란은 가능한 한 냉소(0∼15℃)에, 알가공품은 10℃ 이하(다만, 액란제품은 5℃ 이하)에서 냉장 또는 냉동 보관·유통하여야 한다. 다만, 건조, 당장, 염장 등 부패를 막을 수 있도록 가공된 제품은 냉장 또는 냉동하지 않을 수 있으며, 냉장보관 중인 식용란은 냉장으로 보관·유통하여야 한다.

제2. 7. 중 종전의 차를 카로 하고 차를 다음과 같이 신설한다.

차. 달걀을 세척하는 경우, 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(150 ppm 이상의 차아염소산 나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균효력이 있는 물)로 세척하여야 하고, 세척한 달걀은 냉장으로 보존·유통하여야 한다.

제2. 7. 중 종전의 카, 타, 파, 하, 거, 너.를 각각 타, 파, 하, 거, 너, 더.로 한다.

제2. 7. 중 종전의 더를 러로 하고 러를 다음과 같이 한다.

러. “유통기간”의 산출은 포장완료(단, 포장 후 가공공정을 거치는 제품은 최종공정을 마친)시점으로 하고 선물 세트와 같이 유통기한이 상이한 제품이 혼합된 경우와 단순 절단, 식품 등을 이용한 단순 결착 등 원료 제품의 저장성이 변하지 않는 단순가공처리만을 하는 제품은 유통기한이 먼저 도래하는 원료 제품의 유통기한을 최종제품의 유통기한으로 정하여야 한다. 다만, 달걀은 ‘산란일자(채집일자)’를 유통기간 산출시점으로 한다.

제2. 7. 중 러를 머로 하고 후단을 다음과 같이 신설한다.

다만, 제조업자가 냉동제품인 자연치즈, 가공치즈, 버터류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

제2. 7. 중 종전의 머를 각각 버로 한다.

제3. 3. (3) 중 종전의 (가)를 (나)로 하고 (가)를 다음과 같이 신설한다.

(가) 실금란, 오염란, 연각란은 입고 후 24시간 이내에 가공처리(단, 즉시 10℃이하에서 보관하는 경우 72시간 이내에 가공)하여야 하고, 정상란을 3일이상 보관할 경우 10℃ 이하에서 보관하여야 한다.

제3. 3. (3) 중 종전의 (나)를 (다)로 하고 (다)를 다음과 같이 한다.

(다) 세척하지 않은 식용란을 사용하는 경우에는 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(150 ppm 이상의 차아염소산 나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균효력이 있는 물)로 세척하여야 한다.

제3. 3. (3) 중 종전의 (다), (라), (마), (바), (사)를 각각 (마), (바), (사), (아), (자)로 하고 (라)를 다음과 같이 신설한다.

(라) 할란을 한 상태의 식용란은 5℃이하로 냉각하여야 하며, 72시간을 초과하여 보관하여서는 아니된다.

제3. 3. (3) 중 종전의 (아)를 (차)로 하고 (차)를 다음과 같이 한다.

알가공품의 제조·가공에 사용하는 식용란은 직사광선을 피하여 냉소(0∼15℃)에서 보관하여야 하고, 냉장보관 할 때에는 알가공품과 구획하여 보관하여야 한다.

제3. 3. (3) 중 (자)를 (카)로 하고 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제3. 3. (3)에 (타)를 다음과 같이 신설한다.

(타) 식용란은 압착이나 원심분리 등의 방법으로 내용물을 채취하여서는 아니된다.

제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (다)를 다음과 같이 한다.

(다) 균의 확인시험에서 각종 생화학시험은 국제적으로 공인된 키트(kit) 또는 장비를 이용할 수 있다. 또한, 필요한 경우 혈청형 확인시험, 독소 유전자 확인시험, 상동성 분석시험을 추가할 수 있다.

① 혈청형 확인시험: 비브리오 혈청형 확인(O1, O139 등), 장출혈성대장균 혈청형 확인(O157, O111, O26 등), 살모넬라 혈청형 확인(Salmonella Enteritidis, S. Typhimurium 등) 등

②  독소 유전자 확인시험: 장출혈성 대장균 (VT1, VT2) 등

③ 상동성 분석시험: PFGE(Pulsed-Field Gel Electrophoresis) 등

제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (라)를 다음과 같이 신설한다.

(라) 식품의약품안전처장이 필요하다고 인정하는 경우에는 식중독균 증균배양 후 PCR 등 분자생물학적 시험법을 활용한 스크리닝 시험을 통하여 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 유전자가 확인된 경우 분리배양 후 생화학적 검사를 통하여 해당 식중독균으로 동정되면 검출로 판정한다.

제4. Ⅱ. 9. 가. (5) (마)를 다음과 같이 신설한다.

(마) 발효제품에서 균주 확인이 필요한 경우 차세대염기서열분석기를 활용한 유전체 분석(전장유전체, 메타게놈 등)을 할 수 있다.

제4. Ⅱ. 9. 파. (3), (가), 2) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅱ. 9. 파. (3), (가), 3) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅱ. 9. 파. (3) (가) 4)를 다음과 같이 한다.

식용란: 식용란 20개를 채취하여 제4. 축산물시험방법 Ⅲ. 원유·식육·식용란의 시험법 3. 식용란의 시험법 다. 세균학적 시험법 (1) 시료채취 및 조제에 따라 소독한 후 말린 식용란을 깨서 4 L 용량의 멸균 비이커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료에 2L의 멸균 TSB를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균한다. 1차 배양액은 1)축산물가공품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

제4. Ⅱ. 9. 거. (3), 2) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅱ. 9. 거. (3), 3) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅱ. 9. 중 어를 다음과 같이 신설한다.

어. 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

(1) 살모넬라 시험법

(가) 주형유전자 준비

증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 10 ∼20 μL를 취하여 시료로 사용한다.

※ 상기의 방법과 동등 이상인 유전자 추출키트 및 장비를 사용할 수 있다.

유전자	프라이머/프로브	염기서열(5‘→3’)
invA	invA-F invA-R invA-P	5‘-GAA TCC TCA GTT TTT CAA CGT TTC-3’ 5‘-CGA ATT GCC CGA ACG TGG CGA-3’ 5‘-FAM - CTC TTT CGT CTG GCA TTA TCG ATC AGT ACC AG - BHQ1-3’

(나) Real-time PCR 프라이머 및 프로브 염기서열

(다) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix1)	1×	2×	10 μL
invA 프라이머(F)	0.5 pmol/μL	10 pmol/μL	1 μL
invA 프라이머(R)	0.5 pmol/μL	10 pmol/μL	1 μL
invA 프로브(P)	0.1 pmol/μL	2 pmol/μL	1 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
증류수	-	-	2 μL
총량	-	-	20 μL

1) PowerAmpTM Real-time PCR Master Mix와 동등 이상의 시약을 사용할 수 있다.

(라) Real-time PCR 반응조건

PCR 반응조건은 50℃에서 2분간 유지 및 95℃에서 10분간 방치하여 최초 변성이 일어나게 한 후, 95℃에서 15초간 변성시키고, 60℃에서 1분간 유전자 결합 및 신장반응이 일어나는 것을 1회로 하여 총 40회의 증폭반응을 한다.

구분	온도	시간	반응회수
	50℃	2분	1회
초기변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	1회
변성(denaturation)	95℃	15초	40회
결합(annealing)/ 신장(extension)	60℃	1분

* 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

(마) 결과 확인

PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되는 경우 살모넬라가 검출된 것으로 판정한다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

제4. Ⅲ. 원유·식육·원료알의 시험법 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅲ. 3. 원료알의 시험법 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

제4. Ⅲ. 3. 다. (나) 중 “원료알”을 “식용란”으로 한다.

부칙 <제2017-   호, 2017.  .  .>

제1조(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다. 다만, 제2. 7. 머의 개정 규정은 2017년 7월 1일부터 시행하고 제2. 7. 자 및 차, 제3. 3. (3) (다)의 개정 규정은 2018년 1월 1일부터 시행한다.

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 후 제조·가공 또는 수입(선적일 기준)하는 축산물부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시 시행 당시 접수되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정을 적용한다.

현  행

개 정 안

제1. 총칙

1. 일반원칙

가. ∼ 노. (생  략)

도. 이 축산물의 가공기준 및 성분규격에 정하여진 가공기준 및 성분규격에 대한 적·부판정은 제4. 축산물 시험방법에서 규정한 시험방법으로 실시하여 판정하는 것을 원칙으로 한다. 다만, 제4. 축산물 시험방법에서 규정한 시험방법보다 더 정밀하다고 인정된 때에는 그 방법을 사용할 수 있고, 특히 미생물 및 독소 등에 대한 시험에는 상품화된 Kit를 사용할 수 있으나, 그 결과에 대하여 의문이 있다고 인정될 때에는 규정한 방법에 의하여 시험하고 판정하여야 한다.

로. (생  략)

2. (생  략)

제2. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. 원료 등의 구비요건

가. 축산물원료

(1) ∼ (8) (생  략)

(9) 원료알은 직사광선을 피하여 냉소(0～15℃)에, 원유는  0～10℃에, 원료육은 냉장 시 5℃이하, 냉동 시는 -18℃이하에서 보존하여야 한다.

(10) 축산물의 제조･가공 등에 사용하는 원료알은 부패된 알, 산패취가 있는 알, 곰팡이가 생긴 알, 이물이 혼입된 알, 혈액이 함유된 알, 내용물이 누출된 알, 난황이 파괴된 알(단, 물리적 원인에 의한 것은 제외한다), 부화를 중지한 알, 부화에 실패한 알 등 식용에 부적한 알이 아니어야 한다.

나. (생  략)

2. ∼ 6. (생  략)

7. 보존 및 유통기준

가. ∼ 아. (생  략)

자. 식용란은 가능한 한 냉소(0∼15℃)에, 알가공품은 10℃ 이하(다만, 액란제품은 5℃ 이하)에서 냉장 또는 냉동 보관·유통하여야 한다. 다만, 건조, 당장, 염장 등 부패를 막을 수 있도록 가공된 제품은 냉장 또는 냉동하지 않을 수 있다.

<신  설>

차. (생  략)

카. ∼ 너. (생  략)

더. “유통기간”의 산출은 포장완료(단, 포장 후 가공공정을 거치는 제품은 최종공정을 마친)시점으로 하고 선물 세트와 같이 유통기한이 상이한 제품이 혼합된 경우에는 유통 기한이 짧은 제품을 전체 제품의 유통기한으로 정하여야 한다. 원료제품의 저장성이 변하지 않는 단순가공 처리만을 하는 제품은 원료제품의 포장시점을 유통기간 산출 시점으로 하여야 한다.

러. 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통시켜서는 아니된다.(신  설)

머. (생  략)

제1. 총칙

1. 일반원칙

가. ∼ 노. (현행과 같음)

도. -----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

키트(kit) 또는 장비를 ----

-----------------------

-----------------------

-----------------------

---.

로. (현행과 같음)

2. (현행과 같음)

제2. 축산물에 대한 공통기준 및 규격

1. 원료 등의 구비요건

가. 축산물원료

(1) ∼ (8) (현행과 같음)

(9) 원유는  0～10℃에, 원료육은 냉장 시 5℃이하, 냉동 시는 -18℃이하에서 보존하여야 한다.

(10)  ---------------------

------ 식용란--------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------------

---------------.

나. (현행과 같음)

2. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 보존 및 유통기준

가. ∼ 아. (현행과 같음)

자. 식용란은 가능한 한 냉소(0∼15℃)에, 알가공품은 10℃ 이하(다만, 액란제품은 5℃ 이하)에서 냉장 또는 냉동 보관·유통하여야 한다. 다만, 건조, 당장, 염장 등 부패를 막을 수 있도록 가공된 제품은 냉장 또는 냉동하지 않을 수

있으며, 냉장보관 중인 달걀은 냉장으로 보관·유통하여야 한다.

차. 달걀을 세척하는 경우 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(150 ppm 이상의 차아염소산 나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균효력이 있는 물)로 세척하여야 하며, 세척한 달걀은 냉장으로 보존·유통하여야 한다.

카. (현행과 같음)

타. ∼ 더. (현행과 같음)

러.  ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

---------------- 경우와 단순 절단, 식품 등을 이용한 단순 결착 등 원료 제품의 저장성이 변하지 않는 단순가공 처리만을 하는 제품은 유통기한이 먼저 도래하는 원료 제품의 유통기한을 최종제품의 유통기한으로 정하여야 한다. 다만, 달걀은 산란일자(채집일자)를 유통기간 산출시점으로 한다.

머.  ----------------------

----------------------

--------. 다만, 제조업자가 냉동제품인 자연치즈, 가공치즈, 버터류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

버. (현행과 같음)

제3. 축산물별 기준 및 규격

1. ∼ 2. (생  략)

3. 알가공품

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 가공기준

<신  설>

(가) (생  략)

(나) 난각이 분변 등에 오염된 알을 사용하는 경우에는 깨끗이 세척하는 동시에 150 ppm 이상의 차아염소산 나트륨으로 살균 또는 이와 동등 이상의 효력이 있는 방법으로 살균하여야 한다.

<신  설>

(다) ∼ (사) (현행과 같음)

(아) 원료용 알을 냉장보관 할 때에는 알가공품과 구획하여 보관하여야 한다.

(자) 혈반, 육반이 함유된 원료알은 이를 적절한 방법으로 제거하고 사용하여야 한다.

<신  설>

제3. 축산물별 기준 및 규격

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 알가공품

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 가공기준

(가) 실금란, 오염란, 연각란은 입고 후 24시간 이내에 가공처리(단, 즉시 10℃이하에서 보관하는 경우 72시간 이내에 가공)하여야 하고, 정상란을 3일이상 보관할 경우 10℃ 이하에서 보관하여야 한다.

(나) (현행과 같음)

(다) 세척하지 않은 식용란을 사용하는 경우에는  30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(150 ppm 이상의 차아염소산 나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균효력이 있는 물)로 세척하여야 한다.

(라) 할란을 한 상태의 식용란은 5℃이하로 냉각하여야 하며, 72시간을 초과하여 보관하여서는 아니된다.

(마) ∼ (자) (현행과 같음)

(차) 알가공품의 제조·가공에 사용하는 식용란은 직사광선을 피하여 냉소(0∼15℃)에서 보관 하여야 하고, 냉장보관 할 때에는 알가공품과 구획하여 보관하여야 한다.

(카) -------------- 식용란은

----------------------

--------------------.

(타) 식용란은 압착이나 원심분리 등의 방법으로 내용물을 채취하여서는 아니된다.

제4. 축산물 시험방법

Ⅰ. (생  략)

Ⅱ. 일반시험법

1. ∼ 8. (생  략)

9. 미생물시험법

가. 일반사항

(1) ∼ (4) (생  략)

(5) 기타사항

(가) ∼ (나) (생  략)

(다) 균의 확인을 위한 각종 생화학적 성상시험은 API킷트 또는 Vitek 등의 미생물동정기를 이용할 수 있다.

<신  설>

<신  설>

나. ∼ 타. (생  략)

파. 살모넬라(Salmonella spp.)

(1)∼(2) (생  략)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

1) (생  략)

2) 소, 돼지도체: 제4. 축산물 시험방법 Ⅲ .원유·식육·원료알의 시험법...(이하 생략)

3) 닭, 오리도체: 제4. 축산물 시험방법 Ⅲ.원유·식육·원료알의 시험법...(이하 생략)

4) 식용란: 식용란 20개를 채취하여 제4. 축산물시험방법 Ⅲ. 원유·식육·원료알의 시험법 3. 원료알의 시험법 다. 세균학적 시험법 (1) 시료채취 및 조제에 따라 소독한 후 말린 식용란을 깨서 멸균비닐팩에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 손으로 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료는 상온(20~24℃)에서 96±2시간 동안 정치한 후 25 mL을 채취하여 225 mL의 ferrous sulfate supplemented TSB(35 mg ferrous sulfate+1,000 mL TSB)와 섞어 균질화를 시킨 후 60±5분 동안 상온에 두고 균질화를 시키고 test paper를 사용하여 pH를 측정한다. pH 조절이 필요하다면 6.8±0.2로 조절한다. 이 용액은 36±1℃에서 18~24시간 증균한다. 1차 배양액은 1)축산물가공품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

(나) ∼ (라) (생  략)

하. (생  략)

거. 캠필로박터 제주니/콜리

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

1) (생  략)

2) 소, 돼지도체: 제4. 축산물시험방법 Ⅲ.원유·식육·원료알의 시험법 ...(이하 생략)

3) 닭, 오리도체: 제4. 축산물시험방법 Ⅲ.원유·식육·원료알의 시험법 ...(이하 생략)

(나) ∼ (다) (생  략)

너. ∼ 서. (생  략)

<신  설>

11. ∼ 16. (생  략)

제4. 축산물 시험방법

Ⅰ. (현행과 같음)

Ⅱ. 일반시험법

1. ∼ 8. (현행과 같음)

9. 미생물시험법

가. 일반사항

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 기타사항

(가) ∼ (나) (현행과 같음)

(다) 균의 확인시험에서 각종 생화학시험은 국제적으로 공인된 키트(kit) 또는 장비를 이용할 수 있다. 또한, 필요한 경우 혈청형 확인시험, 독소 유전자 확인시험, 상동성 분석시험을 추가할 수 있다.

① 혈청형 확인시험: 비브리오 혈청형 확인(O1, O139 등), 장출혈성대장균 혈청형 확인(O157, O111, O26 등), 살모넬라 혈청형 확인(Salmonella Enteritidis, S. Typhimurium 등) 등

②  독소 유전자 확인시험: 장출혈성 대장균 (VT1, VT2) 등

③ 상동성 분석시험: PFGE(Pulsed-Field Gel Electrophoresis) 등

(라) 식품의약품안전처장이 필요하다고 인정하는 경우에는 식중독균 증균배양 후 PCR 등 분자생물학적 시험법을 활용한 스크리닝 시험을 통하여 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 유전자가 확인된 경우 분리배양 후 생화학적 검사를 통하여 해당 식중독균으로 동정되면 검출로 판정한다.

(마) 발효제품에서 균주 확인이 필요한 경우 차세대염기서열분석기를 활용한 유전체 분석(전장유전체, 메타게놈 등)을 할 수 있다.

나. ∼ 타. (현행과 같음)

파. 살모넬라(Salmonella spp.)

(1)∼(2) (현행과 같음)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

1) (현행과 같음)

2) --------------------

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--------------식용란-

-----...(현행과 같음)

3) --------------------

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--------------식용란-

-----...(현행과 같음)

4) 식용란: 식용란 20개를 채취하여 제4. 축산물시험방법 Ⅲ. 원유·식육·원료알의 시험법 3. 원료알의 시험법 다. 세균학적 시험법 (1) 시료채취 및 조제에 따라 소독한 후 말린 식용란을 깨서  4 L 용량의 멸균 비이커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료에 2L의 멸균 TSB를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균한다. -------

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(나) ∼ (라) (현행과 같음)

하. (현행과 같음)

거. 캠필로박터 제주니/콜리

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 시험방법

(가) 증균배양

1) (현행과 같음)

2) --------------------

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--------------식용란-

------- ...(현행과 같음)

3) --------------------

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--------------식용란-

-------...(현행과 같음)

(나) ∼ (다) (현행과 같음)

너. ∼ 서. (현행과 같음)

어. 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

(1) 살모넬라 시험법

(가) 주형유전자 준비

증균 배양액(1~2 mL)을 취한 후, 10분간 끓여 원심분리하고, 상등액 10 ~20 μL를 취하여 시료로 사용한다.

※ 상기의 방법과 동등 이상인 유전자 추출키트 및 장비를 사용할 수 있다.

(나) Real-time PCR 프라이머 및 프로브 염기서열

유전자	프라이머/프로브	염기서열(5‘→3’)
invA	invA-F invA-R invA-P	5‘-GAA TCC TCA GTT TTT CAA CGT TTC-3’ 5‘-CGA ATT GCC CGA ACG TGG CGA-3’ 5‘-FAM - CTC TTT CGT CTG GCA TTA TCG ATC AGT ACC AG - BHQ1-3’

(다) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Master Mix1)	1×	2×	10 μL
invA 프라이머(F)	0.5 pmol/μL	10 pmol/μL	1 μL
invA 프라이머(R)	0.5 pmol/μL	10 pmol/μL	1 μL
invA 프로브(P)	0.1 pmol/μL	2 pmol/μL	1 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
증류수	-	-	2 μL
총량	-	-	20 μL

1) PowerAmpTM Real-time PCR Master Mix와 동등 이상의 시약을 사용할 수 있다.

(라) Real-time PCR 반응조건

PCR 반응조건은 50℃에서 2분간 유지 및 95℃에서 10분간 방치하여 최초 변성이 일어나게 한 후, 95℃에서 15초간 변성시키고, 60℃에서 1분간 유전자 결합 및 신장반응이 일어나는 것을 1회로 하여 총 40회의 증폭반응을 한다.

구분	온도	시간	반응회수
	50℃	2분	1회
초기변성(Initial denaturation)	95℃	10분	1회
변성(denaturation)	95℃	15초	40회
결합(annealing)/ 신장(extension)	60℃	1분

* 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

(마) 결과 확인

PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되는 경우 살모넬라가 검출된 것으로 판정한다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

11. ∼ 16. (현행과 같음)

Ⅲ. 원유 · 식육 · 원료알의 시험법

1. ∼ 2. (생  략)

3. 원료알의 시험법

가. ∼ 나. (생  략)

다. 세균학적 시험법

(1) 시료채취 및 조제

(가) (생  략)

(나) 시료의 조제법

달걀(실금란·오란·연란을 제외한 정상란)의 껍질에 묻어있는 잔물질을 제거하고 루골솔루션 (iodine/potassium iodide solution) 250 mL과 750 mL의 70% 알콜을 섞은 소독액에 10초간 담근 후 꺼내어 말린다. 소독한 원료알을 멸균백에 깨 넣고 충분히 교반하여 균일하게 한다.

(2) ∼ (6) (생  략)

Ⅳ. ∼ Ⅷ. (생  략)

Ⅲ. 원유 · 식육 · 식용란의 시험법

1. ∼ 2. (현행과 같음)

3. 식용란의 시험법

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 세균학적 시험법

(1) 시료채취 및 조제

(가) (현행과 같음)

(나) 시료의 조제법

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식용란-----------------

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(2) ∼ (6) (현행과 같음)

Ⅳ. ∼ Ⅷ. (현행과 같음)

신․ 구조문 대비표