식품의약품안전처 공고 제2018-488호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

행정예고

2018. 11. 29.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 공고 제2018-488호

｢식품의 기준 및 규격｣ (식품의약품안전처고시 제2018-91호, 2018. 11. 14.)을 일부 개정함에 있어 국민에게 미리 알려 의견을 수렴하고자 그 취지, 개정 이유 및 주요 내용을 ｢행정절차법｣ 제46조에 따라 다음과 같이 공고합니다.

2018년 11월 29일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유

식생활의 변화에 따라 다양한 식품이 개발·생산될 수 있도록 발효식초 제조 시 착향의 목적으로 오크칩(바)을 사용할 수 있도록 하고, 덱스트린 제조시 다양한 전분질 원료를 사용할 수 있도록 개선하고, 가열여부와 상관없이 갈비부위를 주원료로 제조하는 경우 갈비가공품에 해당할 수 있도록 하는 등 식품별 정의 및 제조·가공기준을 합리적으로 개정하고자 함

발효주의 경우 과일 또는 곡류를 원료로 제조한 것을 구분하여 메탄올 규격을 달리 정하고 있으므로, 이를 원료로 제조하는 일반증류주의 메탄올 규격을 합리적으로 개선하여 식품산업활성화에 기여하고자 함

국제 공인기관에서 식용 근거가 확인된 미생물 7종을 식품원료 목록에 추가하고, 현장에서 적용이 용이하도록 미생물 시험법을 개선하며 유전자변형식품의 추가 승인 품목에 대한 시험법을 신설하여 식품안전관리를 강화하고자 함

식품제조의 원료로 사용되는 제한적 사용 원료의 사용 기준을 개정하고 수산물 3종을 식품에 사용할 수 있는 원료 목록에 추가하며 학명, 이명 보완을 통해 식품원료사용 편의성과 식품원료목록 사용의 편리성을 증진하여 식품산업 활성화에 기여하고자 함

또한, 국내외에서 사용되는 식품 중 옻의 우루시올 동시 시험법 분석 대상을 확대하여 신속한 검사 및 검사의 신뢰성을 확보하고자 함

국내외에서 사용되는 농약 및 동물용의약품에 대한 잔류허용기준 및 시험법을 신설·개정하여 국민에게 안전한 식품을 공급하고자 함

2. 주요 내용

가. 식품별 정의 및 제조·가공기준 개정[안 제4. 4. 4-6 4) (3), 제4. 4. 4-7 1), 제4. 4. 7. 7-1 6), 제4. 7. 7-2 3) (1), 제4. 12. 12-1 3) (2), 제4. 12. 12-2 4), 제4. 12. 12-2 5),  제4. 16. 16-5 4) (3)]

1) 다양한 식품이 생산될 수 있도록 식품별 정의 및 제조·가공기준 개정 필요

2) 동물성유지류의 제조시 정제공정을 거치도록 제조·가공기준 개정

3) 덱스트린 제조시 전분 또는 곡분 이외에도 다양한 전분질 원료를 사용할 수 있도록 식품유형 정의 개정

4) 당류가공품의 원료로 벌꿀류 등 다양한 당류를 사용할 수 있도록 식품유형 정의 개정

5) 발효식초 제조 시 착향 목적으로 오크칩(바)를 사용할 수 있도록 제조가공·기준 개정

6) 수분함량이 8%를 초과하는 고형제품은 소스류 규격을 초과하는 경우라도 다른 식품유형으로 분류될 수 있도록 수분 규격은 삭제하고, 식품유형 정의에 수분함량 기준 추가

7) 갈비부위를 주원료로 양념하거나 단순히 가열처리한 제품도 갈비가공품 유형에 포함될 수 있도록 식품유형 정의 개정

8) 식품별 정의 및 제조·가공기준의 합리적 개선으로 식품산업 활성화에 기여

나. 일반증류주의 메탄올 규격 개정[안 제4. 14. 14-9 5) (2)]

1) 과일 등을 주원료로 한 일반증류주의 메탄올 규격 개선 필요

2) 일반증류주의 메탄올 규격을 개정

3) 원료의 특성을 반영한 합리적인 기준·규격 개선을 통한 식품산업활성화 및 소비자의 선택기회 보장

다. 보존 및 유통기준 개정[안 제2. 4. 5), 제2. 4. 6), 제2. 4. 13)]

1) 보존 및 유통기준의 적용 대상 명확화 필요

2) 일반적인 냉장 또는 냉동온도를 적용받는 식품의 범위 명확화

3) 소비자에게 빠른 시간내에 공급하여야 하는 즉석섭취편의식품류의 범위 명확화

4) 냉장보관하여야 하는 세척란은 물로 세척한 달걀로 한정하도록 문구 개정

5) 보존 및 유통기준이 적용되는 대상을 구체적으로 명시함으로써 해석상의 혼란 해소

라. 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료 사용기준 개정[안 제2 1]

1) 제한적 사용원료를 다른 식품의 원료로 사용할 경우 제한적 원료 사용기준을 적용을 받아야 하는지 여부에 대한 명확화 필요

2) 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료에 “다른 식품의 원료로 사용하는 경우에는 ‘식품에 사용할 수 있는 원료’로 사용할 수 있다.”는 문구를 명시

3) 민원인의 불편해소 및 식품원료 사용에 따른 혼란을 방지

마. 식품원료 목록 정비[안 별표 1 및 별표 2]]

1) 식용근거가 확인된 수산물 및 미생물의 식품원료 등재 및 학명이 명확하지 않거나 중복 등재되어 있는 식품원료 등의 목록 정비 필요

2) 지중해담치(Mytilus galloprovincialis), 곳체다슬기(Semisulcospira gottschei), 가시이마쏙(Austinogebia wuhsienweni) 수산물 3품목을 「식품의 기준 및 규격」의 [별표 1] 2. 동물성원료의 식품에 사용할 수 있는 원료 목록에 추가

3) Brevibacterium linens 등 미생물 7종을 [별표 2] 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료의 목록에 추가하고, Zymomonas mobilis 미생물 1종의 제한적 사용조건을 주류 및 레반 제조로 확대

4) 대두의 이명과 단삼의 학명 수정

5) 식품에 사용가능한 원료의 품목 확대로 다양한 제품 개발 등 식품산업 활성화에 기여

바. 동물용의약품 잔류허용기준 적용 대상 개정[안 제2. 3. 8) ①]

1) 과학의 발달 등으로 안전성에 관한 자료가 확보됨에 따라 동물용의약품의 식품 중 잔류허용기준 적용 대상 개정 필요

2) “식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질”의 대상물질명과 잔류물의 정의 명확화

3) 안전성 등의 문제로 국내 사용이 허가되지 않은 겐티안 바이올렛 등 동물용의약품 5종을 식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질에 추가

4) “식품 중 검출되어서는 아니 되는 물질”의 적용 대상을 명확히하여 국민에게 안전한 식품 공급

사. 농산물 중 농약 잔류허용기준 신설[안 별표 4 중 (46) 메틸브로마이드]

1) 「농약관리법」에 신규 등록된 농약의 안전관리를 위한 잔류허용기준 신설 필요

2) 메틸브로마이드의 농약 잔류허용기준 신설

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 신설 하여 국민에게 안전한 식품 공급

아. 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준 개정[안 별표 5 중 (10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신, (11) 레바미졸, (16) 벤질페니실린, (33) 이버멕틴, (38) 클로산텔, (40) 타일로신, (43) 틸미코신, (44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸, (54) 노르플록사신, (55) 오플록사신, (56) 페플록사신, (105) 프라지콴텔, (116) 클로술론]

1) 「약사법」에 의해 동물에 사용이 허가된 동물용의약품의 안전관리를 위한 잔류허용기준 개정 필요

2) 디히드로스트렙토마이신 등 13종 동물용의약품의 잔류허용기준 개정

3) 안전성 등의 문제가 있는 동물용의약품 3종(노르플록사신, 오플록사신, 페플록사신)을 식품 중 검출되어서는 아니되는 물질 목록으로 추가함에 따라 현행 잔류허용기준을 삭제

4) 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

자. 일반시험법 개정 등 [안 제7. 4. 4.1 4.1.2 라, 제7. 4. 4.3 사. 6), 제7. 4. 4.26 가 5), 제7. 6. 6.9 6.9.3 6.9.3.4, 제7. 8. 8.3 8.3.14, 제7. 8. 8.3 8.3.15, 제7. 8. 8.3 8.3.24, 제7. 8. 8.3 8.3.48, 제7. 8. 8.3 8.3.49, 제7. 8. 8.3 8.3.50, 제7. 8. 8.3 8.3.55, 제7. 8. 8.3 8.3.69, 제7. 9. 9.16, 제7. 10. 10.1 10.1.5, 제7. 10. 10.1 10.1.11, 제7. 10. 10.1 10.1.12, 제7. 10. 10.1 10.1.13, 제7. 10. 10.1 10.1.14]

1) 시험결과의 정확성 제고 및 기준 신설 및 개정에 따른 시험법 마련 필요

2) 버터와 아이스크림류의 미생물 시험을 위한 시험용액 제조방법 개선

3) 액란제품의 살모넬라 검사에 분자생물학적 시험법 활용이 가능하도록 개정

4) 식품 중 동물용의약품 잔류허용기준 개정에 따라 관련 시험법 8종 개정

5) 식품 중 우루시올 확인시험법 개정

6) 승인된 유전자변형식품의 VCO01981-5(옥수수) 등 18품목에 대한 정성 및 정량시험법 추가

7) 과학적인 시험법 개정으로 검사 신뢰도를 제고함으로서 국민에게 안전한 식품 공급

차. 타법령의 개정사항 반영 등 용어 및 문구정비[안 제1. 2. 9), 제1. 4. 2), 제2. 1. 1) (16), 제2. 3. 2) (1), 제2. 3. 9) (2) ⑨, 제4. 1. 1), 제4. 1. 4) (4), 제4. 2. 2-1 3) (1), 제4. 2. 2-2 3) (1), 제4. 12. 12-2 5) (6), 제4. 17. 7-1 3) (3), 제7. 2. 2.1.1 2.1.1.1 나. 2), 제7. 2. 2.1.2 다. 2) 다), 제7. 4. 4.4 4.4.1 24), 제7. 4. 4.4 4.4.2 8), 제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 1), 제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 2), 제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 3), 제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 4), 제7. 5. 5.3 5.3.2 나, 제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.2 가, 제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.4 가, 제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.5 가, 제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.7 마. 1), 제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.5 마. 1), 제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.25 마. 1), 제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.27 마. 1), 제7. 8. 8.1 4), 제7. 8. 8.2 8.2.2 8.2.2.1 8.2.2.1.1 8), 제7. 8. 8.3 8.3.23 8.3.23.2 1), 제7. 8.3.116 6) 라, 별표 6 중 (19), (59), (66), (80)]

1) 허용외 타르색소의 기준·규격 적용범위 신설

2) ｢정착성 수산동식품 생산해역의 등급설정 기준｣(해양수산부 고시)이 ｢패류 생산해역 수질의 위생기준｣으로 변경되어(‘18.5.29) 생식용 굴을 생산할 수 있는 해역의 수질기준에 대한 관련고시 명칭 및 수질기준 개정

3) 이물 규격 적용대상을 명확히 하도록 문구 개정

4) 식물성유지류 중 설정되지 않은 규격에 대한 시험방법 항목 삭제

5) ‘식품첨가물공전’의 마요네즈에 대한 안식향산 등 보존료 사용기준 반영

6) 알가공품 제조시 물세척하지 않은 식용란을 사용하는 경우에만 세척하여 사용도록 문구 개정

7) ‘계란’을 ｢축산물 위생관리법｣에서 사용하는 ‘달걀’로 용어 개정

3. 의견 제출

「식품의 기준 및 규격」 일부개정고시(안)에 대하여 의견이 있는 단체 또는 개인은 2019년 1월 30일까지 다음 사항을 기재한 의견서를 식품의약품안전처장(우편번호 : 28159, 주소 : 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명2로 187 오송보건의료행정타운 식품의약품안전처, 참조 : 식품기준과, 전화 043-719-2420, 팩스 043-719-2400)에게 제출하여 주시기 바랍니다.

가. 예고사항에 대한 항목별 의견(찬․반 여부와 그 이유)

나. 성명(단체의 경우 단체명과 그 대표자의 성명), 주소 및 전화번호

다. 기타 참고사항

식품의약품안전처 고시 제2018-00호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2018-91호, ‘18. 11. 14.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2018년  0월  00일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 2. 9) ∼ 11)를 각각 10) ∼ 12)으로 하고, 9)를 다음과 같이 신설한다.

9) 이 고시에서 정하고 있는 “허용외 타르색소”란 상기 제1. 2. 8)에서 정한 타르색소 중 「식품첨가물의 기준 및 규격」에서 해당 식품유형에 허용되지 않은 타르색소를 말한다.

제1. 4. 2) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제2. 1. 1) (16) 중 “「정착성 수산동식물 생산해역의 등급설정 기준」(해양수산부 고시)에 따라 청정해역의 수질기준에”를 “「패류 생산해역 수질의 위생기준」(해양수산부 고시)에 따라 지정해역 수준의 수질 위생기준에”으로 한다.

제2. 1. 2) (7) 중 ②를 다음과 같이 한다.

② ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’로 분류된 원료는 명시된 사용 조건을 준수하여야 하며, 별도의 사용 조건이 정하여지지 않은 원료는 다음의 사용기준에 따른다.

㉮ 식품 제조 시 사용되는 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’는 원료의 중량을 기준으로 50% 미만(배합수 제외)을 사용하여야 한다.

㉯ 식품 제조 시 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’를 2가지 이상 혼합할 경우 혼합되는 총량은 원료의 중량을 기준으로 50% 미만(배합수 제외) 사용하여야 한다.

㉰ 다만, 최종 소비자에게 판매되지 아니하고 제조업소에 공급되는 원료용 제품을 제조하고자 하는 경우에는 위의 ㉮, ㉯ 항을 적용받지 아니할 수 있다.

㉱ 다류, 음료수, 주류 및 향신료 제조 시 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’ 에 속하는 식물성원료가 1가지인 경우에는 원료의 중량을 기준으로 100%까지 (배합수 제외) 사용할 수 있다.

제2. 3. 2) 중 (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 식품은 다음의 이물을 함유하여서는 아니된다.

① 원료의 처리과정에서 그 이상 제거되지 아니하는 정도 이상의 이물

② 오염된 비위생적인 이물

③ 인체에 위해를 끼치는 단단하거나 날카로운 이물

다만, 다른 식물이나 원료식물의 표피 또는 토사, 원료육의 털, 뼈 등과 같이 실제에 있어 정상적인 제조․가공상 완전히 제거되지 아니하고 잔존하는 경우의 이물로서 그 양이 적고 위해 가능성이 낮은 경우는 제외한다.

제2. 3. 8) 중 ①을 다음과 같이 한다.

① 관련법령에서 안전성 및 유효성에 문제가 있는 것으로 확인되어 제조 또는 수입 품목허가를 하지 아니하는 동물용의약품(대사물질 포함)은 검출되어서는 아니 된다. 이에 해당되는 주요 물질은 아래와 같으며, 아래에 명시하지 않은 물질에 대해서도 관련법령에 근거하여 본 항을 적용할 수 있다.

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
	물질명	잔류물의 정의
1	니트로푸란계(Nitrofurans)
	- 푸라졸리돈(Furazolidone)	3-Amino-2-oxazolidinone(AOZ)
	- 푸랄타돈(Furaltadone)	3-Amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone (AMOZ)
	- 니트로푸라존(Nitrofurazone)	- Semicarbazide(SEM) : 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함, 갑각류 제외)의 가식부위에 한함 - Nitrofurazone : 갑각류에 한함
	- 니트로푸란토인(Nitrofurantoine)	1-Aminohydantoin(AHD)
	- 니트로빈(Nitrovin)	Nitrovin
2	카바독스(Carbadox)	Quinoxaline-2-carboxylic acid (QCA)
3	올라퀸독스(Olaquindox)	3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid (MQCA)
4	클로람페니콜(Chloramphenicol)	Chloramphenicol
5	클로르프로마진(Chlorpromazine)	Chlorpromazine
6	클렌부테롤(Clenbuterol)	Clenbuterol
7	콜치신(Colchicine)	Colchicine
8	답손(Dapsone)	Dapsone, monoacetyl dapson의 합을 dapsone으로 함
9	디에틸스틸 베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)	Diethylstilbestrol
10	메드록시프로게스테론 아세테이트 (Medroxyprogesterone acetate, MPA)	Medroxyprogesterone acetate
11	티오우라실(Thiouracil)	2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl- 2-thiouracil 및 6-phenyl- 2-thiouracil의 합을 thiouracil로함
12	겐티안 바이올렛 (GentianViolet, Crystal violet)	Gentian violet과 Leuco -gentian violet의 합을 Gentian violet으로 함
13	말라카이트 그린 (Malachite green)	Malachite green과 Leuco-malachite green의 합을 malachite green으로 함
14	메틸렌 블루 (Methylene Blue)	Methylene blue와 Azure B의 합을 Methylene Blue로 함
15	디메트리다졸(Dimetridazole)	Dimetridazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl- 5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Dimetridazole로 함
16	이프로니다졸(Ipronidazole)	Ipronidazole과 1-methyl-2-(2'-hydroxyisopropyl) -5-nitroimidazole (Ipronidazole-OH)의 합을 Ipronidazole로 함
17	메트로니다졸(Metronidazole)	Metronidazole과 1-(2-hydroxyethyl)-2 -hydroxymethyl -5-nitroimidazole(Metronidazole-OH)의 합을 Metronidazole로 함
18	로니다졸(Ronidazole)	Ronidazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl -5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Ronidazole로 함
19	노르플록사신(Norfloxacin)	Norfloxacin
20	오플록사신(Ofloxacin)	Ofloxacin
21	페플록사신(Pefloxacin)	Pefloxacin
22	피리메타민(Pyrimethamine)	Pyrimethamine
23	반코마이신(Vancomycin)	Vancomycin

* 주1. 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공식품에 한한다.

제2. 3. 9) (2) ⑨ 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제2. 4. 5) 중 “냉장제품은”을 “이 고시에서 별도로 보관온도를 정하고 있지 않은 냉장제품은”으로 한다.

제2. 4. 6) 중 “즉석섭취편의식품류는”을 “즉석섭취식품과 도시락은”으로 한다.

제2. 4. 13) 중 “달걀을 세척하는 경우”를 “달걀을 물로 세척하는 경우”로 한다.

제4. 1. 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제4. 1. 4) (4) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제4. 2. 2-1 3) (1) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제4. 2. 2-2 3) (1) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제4. 4. 4-6 4) (3) 중 “전분 또는 곡분을”을 “곡분, 전분 등의 전분질원료를”으로 한다.

제4. 4. 4-7 1) 중 “올리고당류를”을 “올리고당류, 벌꿀류 등을”으로 한다.

제4. 4. 7. 7-1 6) 중 (4), (6), (7)을 삭제하고, 종전 (5) 및 (8) ∼ (10)을 각각 (4) 및 (5) ∼ (7)로 한다.

제4. 7. 7-2 3) 중 (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 원료유지는 탈검, 탈산, 탈색, 탈취의 정제공정을 거치거나 이와 동등이상의 복합정제공정을 거쳐야 한다. (다만, 원료우지 및 원료돈지는 제외)

제4. 12. 12-1 3) (2) 중 “과일 또는 과즙을 주원료로 하여 제조한 발효식초에”를 “발효식초에”로 한다.

제4. 12. 12-2 4) 중 (1) 및 (4)를 각각 (4) 및 (1)로 하고, (1) 중 “혼합하여”를 “혼합하여 수분함량이 8% 이하가 되도록”으로 한다.

제4. 12. 12-2 5) 중 (1)을 삭제하고, (2) ∼ (5)를 각각 (1) ∼ (4)로 한다.

제4. 12. 12-2 5) 중 (6)을 (5)로 하고, 다음을 신설한다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서, 마요네즈에 한한다.)

제4. 14. 14-9 5) 중 (2)를 다음과 같이 한다.

(2) 메탄올(mg/mL) : 1.0 이하(다만, 곡류를 주원료로 한 제품은 0.5 이하)

제4. 16. 16-5 4) 중 (3)을 다음과 같이 한다.

(3) 갈비가공품 : 식육의 갈비부위(뼈가 붙어 있는 것에 한한다)를 정형한 것에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 양념한 것이거나 갈비부위를 그대로 또는 양념하여 훈연하거나 가열처리한 것을 말한다.

제4. 17. 17-1 3) (3) 중 “세척하지”를 “물로 세척하지”로 한다.

제7. 2. 2.1.1 2.1.1.1 나. 2) 중 “생계란”을 “생달걀”로 한다.

제7. 2. 2.1.2 다. 2) 다) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 4. 4.1 4.1.2 라. 중 “검사를”을 “검사 등을”으로 한다.

제7. 4. 4.3 사. 6)을 다음과 같이 한다.

6) 버터와 아이스크림류 : 검체 일정량(10∼25g)을 멸균용기에 취해 40℃이하의 온탕에서 15분 내에 용해시킨 후 희석액을 가하여 100∼250mL로 한 것을 시험용액으로 한다.

제7. 4. 4.4 4.4.1 24) 중 “계란액”을 “달걀액”으로 한다.

제7. 4. 4.4 4.4.2 8) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제7. 4. 4.26 가. 5)를 다음과 같이 한다.

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 살모넬라 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 살모넬라로 동정되면 검출로 판정한다.

제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 2) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 3) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 5. 5.3 5.3.2 가. 4) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제7. 5. 5.3 5.3.2 나. 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 6. 6.9 6.9.3 6.9.3.4를 다음과 같이 한다.

6.9.3.4 살모넬라

제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.11 살모넬라 시험법에 따라 시험한다. 다만, 액란제품의 경우 4.11 살모넬라 시험법 또는 4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법 가. 살모넬라 시험법에 따라 시험한다.

제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.2 가. 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.4 가. 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.5 가. 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.1 7.3.1.7 마. 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.5 마. 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.25 마. 1) 중 “계란”을 각각 “달걀”로 한다.

제7. 7. 7.3 7.3.2 7.3.2.27 마. 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 8. 8.1 4) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 8. 8.2 8.2.2 8.2.2.1 8.2.2.1.1 8) 표3 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 8. 8.3 8.3.14∼8.3.15를 다음과 같이 한다.

8.3.14 레바미졸(Levamisole), 트리클로르폰(Trichlorfon)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 10% 초산 함유 아세토니트릴(가금류고기는 아세토니트릴)로 추출한 후 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 각 물질의 표준원액 100 mg/L 농도로부터 메탄올로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 10% 초산(acetic acid) 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 초산 100 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 20 mM 개미산암모늄(ammonium formate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.2% 개미산(formic acid) 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 2 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 10% 초산 함유 아세토니트릴(가금류고기는 아세토니트릴) 10 mL을 가하여 15분간 진탕하고, 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 옮겨 아세토니트릴 포화헥산 10 mL을 가하여 10분간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 하층액을 취하여 40℃ 수욕상에서 질소농축한다. 잔류물에 메탄올 용액 2 mL(소고기, 갑각류, 어류는 메탄올 용액 4 mL)을 가하여 재분산하고, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼: C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 20 mM 개미산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4	5	95
8	5	95
10	90	10
11	90	10

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 0.5 kV

(4) Collision gas: Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
레바미졸 (Levamisole)	4.34	204.3	205.2	91.11	34
				123.15	24
				178.16	20
트리클로르폰 (Trichlorfon)	4.78	257.4	258.0	79.02	28
				109.12	18
				221.09	10

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 레바미졸(4.34분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(2) 트리클로르폰(4.78분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

레바미졸: 0.01 mg/kg(소고기·돼지고기·가금류고기·유 0.005 mg/kg)

트리클로르폰: 0.01 mg/kg(돼지고기·가금류고기·알·어류 0.005 mg/kg)

8.3.15. 겐티안 바이올렛(Gentian violet), 말라카이트 그린(Malachite green), 메틸렌 블루(Methylene blue) 동시시험법

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 1% 초산으로 처리 후 1% 초산 함유 아세토니트릴로 추출하고 무수황산나트륨(Na2SO4)과 C18, PSA(Primary secondary amine)으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1,000 mg/L이 되게 한다. (류코겐티안 바이올렛은 5% DMSO(Dimethyl suloxide) 함유 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.)

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액을 100 mg/L 농도로부터 50% 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 1% 초산 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 초산 10 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 1% 초산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량 플라스크에 초산 10 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 초산암모늄, 0.1% 개미산 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에 초산암모늄 0.7708 g과 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

각각의 시료를 균질화하여 2 g을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취하고 1% 초산 수용액 1 mL를 넣은 후 강하게 진탕한다. 1% 초산 함유 아세토니트릴 용액 10 mL을 가하고 무수황산나트륨  2 g을 넣어 5분간 진탕한 후 4,700 G, 4℃에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 C18 100 mg, PSA (primary secondary amine) 100 mg이 담겨진 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 5분간 진탕한다. 4,700 G, 4℃에서 10분간 원심분리 한 뒤, 추출액 중 1 mL을 취하여 0.2 μm 멤브레인 필터(PTFE membrane filter)로 여과하여 유리바이알에 담아 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Imtakt Cadenza CD-C18 UP, 2.0 mmｘ 150 mm, 3 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄, 0.1% 개미산 함유 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
1	95	5
5	10	90
8	10	90
8.1	95	5
12	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI (Positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision gas : 아르곤(Ar)

(4) 분석대상물질의 조건

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
겐티안 바이올렛 (Gentian violet)	6.1	372.5	372.1	235.1	55
				340.2	55
				356.2	39
류코겐티안 바이올렛 (Leucogentian violet)	7.9	373.5	374.1	238.2	28
				239.2	35
				358.3	32
류코말라카이트 그린 (Leucomalachite green)	7.9	330.5	331.0	223.1	55
				239.2	31
				316.2	21
말라카이트 그린 (Malachite green)	5.5	329.5	329.1	165.2	55
				208.2	34
				313.2	36
메틸렌 블루 (Methylene blue)	4.6	284.4	284.0	240.1	33
				252.1	52
				268.1	34
아주르 B (Azure B)	4.4	270.4	269.9	212.1	52
				228.1	34
				254.1	33

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율이 허용범위(± 20∼30%) 이내에서 일치하여야 한다주1). 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1.  생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준용액 크로마토그램

그림 1. 아주르 B (4.4분), 메틸렌 블루 (4.6분), 말라카이트 그린 (5.6분), 겐티안 바이올렛 (6.1분), 류코말라카이트 그린 (7.9분), 류코겐티안 바이올렛 (7.9분) 표준품의 크로마토그램 (0.001 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

말라카이트 그린: 0.002 mg/kg

류코말라카이트 그린: 0.002 mg/kg

메틸렌 블루: 0.002 mg/kg

아주르 B : 0.002 mg/kg

겐티안 바이올렛: 0.002 mg/kg

류코겐티안 바이올렛 : 0.002 mg/kg

제7. 8. 8.3 8.3.23 8.3.23.2 1) 중 “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 8. 8.3.24를 다음과 같이 한다.

8.3.24 스피라마이신(Spiramycin), 타일로신(Tylosin), 키타사마이신(Kitasamycin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 메탄올/아세토니트릴(25:75, v/v)용액(가금류고기, 돼지고기는 100% 아세토니트릴)으로 추출하고 아세토니트릴 포화헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액 100 mg/L 농도로부터 메탄올로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 가금류고기와 돼지고기를 제외한 식품

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 메탄올/아세토니트릴(25:75, v/v)용액 10 mL를 가하여 30초간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 포화헥산 10 mL를 가한다. 10분간 진탕한 후 하층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 40℃ 수욕상에서 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 가금류고기, 돼지고기

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. ⓐ 100% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 10분간 진탕한 후, 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다. ⓑ 100% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 10분간 진탕한 후, 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 무수황산마그네슘 1 g을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한다. 아세토니트릴 포화 헥산 10 mL을 가한 후 10분간 진탕하고 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액(헥산층)을 제거한다.  하층(아세토니트릴층)의 약 1/2을 새로운 15 mL 원심분리관으로 옮긴 후 40℃ 수욕상에서 2.5 mL가 될 때까지 질소농축한 다음 나머지 하층을 옮겨 시료용액이 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	85	15
11	50	50
11.1	85	15
16	85	15

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피라마이신 (Spiramycin)	4.46	842.5	843.9	83.0	50
				141.9	28
				174.0	30
타일로신 (Tylosin)	7.93	915.5	916.8	88.1	70
				101.1	45
				174.1	35
키타사마이신 (Kitasamycin)	8.63	771.4	772.6	83.0	50
				109.1	40
				174.1	30

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 스피라마이신(4.71분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

(2) 타일로신(7.93분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

(3) 키타사마이신(8.63분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample) 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

스피라마이신: 0.05 mg/kg(알 0.005 mg/kg)

타일로신: 0.001 mg/kg(어류 0.005 mg/kg, 소고기․알 0.05 mg/kg)

키타사마이신: 0.005 mg/kg(소고기․알․갑각류 0.05 mg/kg)

제7. 8. 8.3.48을 다음과 같이 한다.

8.3.48. 클로산텔(Closantel), 클로술론(Clorsulon), 니트록시닐 (Nitroxynil) 동시시험법

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 개미산 암모늄이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(5:1, v/v)으로 추출하고 무수황산마그네슘(MgSO4)와 PSA(Primary secondary amine)로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 200 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액 200 mg/L 농도로부터 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 200 mM 개미산 암모늄: 100mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 200 mM 개미산암모늄 0.1 mL과 물 2 mL을 가하여 1분간 균질화한다. 아세토니트릴 10 mL을 가하여 10분간 진탕하고 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취한다. 900 mg 무수황산마그네슘과 150 mg PSA를 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 상층액을 합한 후 10분간 진탕하고 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취한 뒤, 50℃ 수욕상에서 4 mL가 되도록 질소농축한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 5% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4.	5	95
8	5	95
10	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 1.5 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
클로산텔 (Closantel)	5.92	663.1	661	127	-50
				279	-42
				344	-34
클로술론 (Clorsulon)	4.73	380.6	378	142	-26
				242	-22
				342	-10
니트록시닐 (Nitroxynil)	4.77	290.0	289	116	-34
				127	-26
				162	-20

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 클로산텔(5.92분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(2) 클로술론(4.73분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(3) 니트록시닐(4.77분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

클로산텔 : 0.01 mg/kg

클로술론 : 0.01 mg/kg

니트록시닐 : 0.01 mg/kg

제7. 8. 8.3 8.3.49 타일로신(Tylosin) ∼ 8.3.50 트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate)을 삭제한다.

제7. 8. 8.3 8.3.51 ∼ 8.3.54를 각각 8.3.49 ∼ 8.3.52로 한다.

제7. 8. 8.3 8.3.55 키타사마이신(Kitasamycin)을 삭제한다.

제7. 8. 8.3 8.3.56 ∼ 8.3.68을 각각 8.3.53 ∼ 8.3.65로 한다.

제7. 8. 8.3 8.3.69 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon을 삭제한다.

제7. 8. 8.3 중 8.3.70 ∼ 8.3.120을 각각 8.3.66 ∼ 8.3.116로 한다.

제7. 8. 8.3 8.3.116(종전 8.3.120) 6) 라. 중  “계란”을 “달걀”로 한다.

제7. 9. 9.16을 다음과 같이 한다.

9.16 우루시올

가. 시험법의 적용범위

옻나무를 원료로 사용한 식품에 적용한다.

나. 분석원리

식품 내에 존재하는 우루시올을 아세토니트릴로 추출한 후 dSPE (dispersive SPE)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 우루시올 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 μg/mL가 되게 한 다음 -70°C에서 차광 보관한다.

4) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 조제한 용액은 물질의 안정성 문제로 -70°C에서 30일 동안 차광 보관 및 사용한다.

표1. 우루시올 표준품 정보

성분명	CAS No.	분자식	화학구조
우루시올 Ⅰ (C15:0)	492-89-7	C21H36O2
우루시올 Ⅱ (C15:1)	35237-02-6	C21H34O2
우루시올 Ⅲ (C15:2)	83258-37-1	C21H32O2
우루시올 Ⅴ (C15:3)	83543-37-7	C21H30O2
라콜 (C17:0)	5862-27-1	C23H40O2

5) 추출용액(50 mM 아세트산 암모늄(ammonium acetate) 버퍼 (pH 4.1) + 0.1 M EDTA) : 500 mL 용량플라스크에 아세트산 암모늄 1,927 mg을 적당량의 물에 녹여 표시선을 맞추고(정용하고) pH가 4 정도 되는지 확인한다. 여기에 EDTA 14.6 g을 넣고 충분히 녹을 때까지 1시간 초음파 처리한다. EDTA가 완전히 녹지 않으므로 상온에서 보관하며 상층액만 사용하고, 필요하다면 원심분리 후 사용한다.

6) 정제용 시약(dSPE 카트리지) : QuEChERS 정제용 또는 이와 동등한 것

가) 물추출물 등 액상검체 : PSA(Primary secondary amine):C18:황산마그네슘이 1:1:6의 비율(6.25 mg:6.25 mg:37.5 mg)로 혼합된 시약

나) 장류 등 고상검체 : PSA:황산마그네슘이 1:6(50 mg:300 mg)의 비율로 혼합된 시약

7) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다(정용한다).

8) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

균질화된 시료 2g(된장의 경우 1g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하고 추출용액 5 mL를 가한 후 교반기(vortex mixer)로 1분간 혼합한다. 아세토니트릴 5 mL과 염화나트륨 1 g을 가하고, 교반기로 1분간 추출한 다음, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제

15 mL 원심분리관에 정제용 시약(dSPE 카트리지) 50 mg(액상검체) 또는 350 mg(고상검체)을 취하고 분리된 상층액 전량을 넣는다. 교반기로 1분간 혼합하고, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한 뒤, 상층액 전량을 새로운 15 mL 원심분리관에 옮긴다. 40°C 수용액상에서 질소건고한 후 , 메탄올 1 mL를 가하고 교반기로 1분간 혼합한 후 5분간 초음파 처리하여 용해시킨다. 이 액을 4℃, 13,500 G에서 3분간 원심분리한 후, 상층액을 최종 시험용액으로 한다.

바.  시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18 (2.0  × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼온도 : 40°C

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상A(%)	이동상B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
3.0	0	100
10.0	0	100
10.5	20	80
15	20	80

라) 유속: 0.25 mL/min

마) 주입량 : 10 μL

2) 질량분석기 측정조건

가) Ionization : ESI negative-ion mode

나) Ion source temperature : 350℃

다) Ion spray voltage: -4.5 kV

라) Curtain gas : 6 psi

마) Collision gas(N2) : 10 psi

바) Ion source gas 1 : 10 psi

사) Ion source gas 2 : 20 psi

표2. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 MRM 조건

연번	성분명 (Compound)	머무름시간 (분)	분자량 (g/mol)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	Urushiol Ⅰ	8.98	320.5	319.1	122.2 136.1	-48 -46
2	Urushiol Ⅱ	8.41	318.5	317.1	122.0 135.0	-42 -56
3	Urushiol Ⅲ	8.00	316.5	315.3	122.0 135.2	-44 -50
4	Urushiol Ⅴ	7.65	314.5	313.3	135.1 122.0	-48 -44
5	Laccol	9.82	348.6	347.4	121.9 135.0	-52 -60

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

우루시올의 특성(산화반응에 따른 폴리머 형성 등)을 고려하여 다음의 Matrix- matched standard(MMS) 조제법에 따라 처리한 혼합표준용액을 농도별로 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상의 정량이온의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(Matrix-matched calibration curve)을 작성한다.

가) Matrix-matched standard(MMS) 조제법

음성검체(Blank sample) 2g(된장의 경우 1g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하고 추출용액 5 mL를 가한 후 교반기(vortex mixer)로 1분간 혼합한다. 아세토니트릴 5 mL와 염화나트륨 1 g을 첨가하고, 교반기로 1분간 추출한 다음, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한다. 15 mL 원심분리관에 정제용 시약(dSPE 카트리지) 50 mg(액상검체) 또는 350 mg(고상검체)을 취하고 분리된 상층액 전량을 넣는다. 교반기로 1분간 혼합하고, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한 뒤, 상층액 전량을 새로운 15 mL 원심분리관에 옮긴다. 각 검량선 농도[표 3]에 맞는 혼합표준용액 0.2 mL(된장의 경우 0.1mL)을 가하고, 40°C 수용액상에서 질소건고한다. 메탄올 1 mL을 가하고 교반기로 1분간 혼합한 후 5분간 초음파 처리하여 용해시킨다. 이 액을 4℃, 13,500 G에서 3분간 원심분리한 후, 상층액을 최종 표준용액으로 한다.

표3. Matrix-matched standard 조제에 사용한 표준용액 농도 및 부피

검량선 농도	혼합표준용액 농도	첨가 부피
10 ng/mL	100 ng/mL	0.2 mL (된장의 경우 0.1mL)
20 ng/mL	200 ng/mL
30 ng/mL	300 ng/mL
40 ng/mL	400 ng/mL
50 ng/mL	500 ng/mL

4) 혼합표준용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준용액의 크로마토그램

5) 정량한계는 우루시올Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ, 라콜 각각에 대하여 10 μg/kg을 적용한다.

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 표준용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온으로 시험용액의 우루시올을 확인한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 정량이온에 대한 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 단, 이때 우루시올 함량은 우루시올Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ, 라콜의 합으로 한다.

우루시올의 함량(μg/kg)	=	C	x	D

1) 계산

C  : 검량선에서 구한 우루시올의 함량(μg/kg)

D  : 희석배수

제7. 10. 10.1 10.1.5 다. 2) 표 1. 중 *를 다음과 같이 신설한다.

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

제7. 10. 10.1 10.1.5 다. 2) 표 2. 중 다음을 신설한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
구조 유전자	VCO-01981-5 (85 bp)	VCO-01981-5 primer F	5'-CCA CTG AAC GTC ACC AAG AAG A-3'
		VCO-01981-5 primer R	5'-GCC GCT ACT CGA GGG ATT TA-3'
	VCO-01981-5 (85 bp)	VCO-01981-5 primer F	5'-CCA CTG AAC GTC ACC AAG AAG A-3'
		VCO-01981-5 primer R	5'-GCC GCT ACT CGA GGG ATT TA-3'
		VCO-01981-5 probe	5'-FAM-CAG TAC TCA AAC ACT GAT AG-MGB-3'

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

제7. 10. 10.1 10.1.5 라. ① 중 “MZHG0JG(이상 옥수수)”를 “MZHG0JG, VCO01981-5(이상 옥수수)”로 한다.

제7. 10. 10.1 10.1.5 라. ② 중 “MON87403(이상 옥수수)”를 “MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)”로 한다.

제7. 10. 10.1 10.1.5 라. ③ 중 “MON87403(이상 옥수수)”를 “MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)”로 한다.

제7. 10. 10.1 10.1.5 라. ④ 중 “MON87403(이상 옥수수)”를 “MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)”로 한다.

제7. 10. 10.1 10.1.11을 다음과 같이 한다.

10.1.11 유전자변형 면화

면화씨(cotton seed) 또는 그 가공식품에 대하여 실시간 PCR 장치를 사용하여 유전자변형 면화를 검출하기 위한 정성 및 정량분석법이다.

가. DNA의 추출

10.1.3 DNA의 추출․정제법에 따라 2회 반복 추출하여 얻은 DNA 용액을 사용한다.

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브

유전자변형 면화 분석에 사용되는 프라이머와 프로브는 표 9와 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브를 사용할 수도 있다.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 9의 프라이머와 프로브를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 조성은 표 10과 같다. 다만, PCR 반응액 조성은 프라이머와 프로브 또는 실시간 PCR 기기에 따라 다를 수 있으므로 시약이나 기기의 사용 매뉴얼을 참고하여 적용한다. 각 PCR 반응 시에는 음성대조군으로서 주형 DNA 대신 멸균증류수를 사용한 것(NTC, no template control)을, 양성대조군으로 비유전자변형(non-GMO) DNA를 함유한 것(동일 작물로서 0%(w/w) 표준시료에서 추출한 DNA 등) 과 검출하고자 하는 재조합 DNA를 함유한 것(동일 작물로서 분석 대상 GMO를 포함하는 표준시료에서 추출한 DNA 등)을 시료와 함께 PCR 시험을 한다. PCR에서 생길 수 있는 오차를 감소시키기 위해 하나의 DNA 시료액에 대하여 3 반복 시험(3 웰(well) 분량의 PCR 반응액을 잉여분을 고려하여 한번에 조제하여 동일 플레이트에서 시험)을 실시하여 측정한다.

표 9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성 유전자	면화 (76 bp)	acp1 primer1-5'	5'-ATT GTG ATG GGA CTT GAG GAA GA-3'	150
		acp1 primer2-3'	5'-CTT GAA CAG TTG TGA TGG ATT GTG-3'	150
		acp1 probe-Taq	5'-FAM-ATT GTC CTC TTC CAC CGT GAT TCC GAA -TAMRA-3'	50
구조 유전자	531 1) (72 bp)	531 primer1-5'	5'-TCC CAT TCG AGT TTC TCA CGT-3'	150
		531 primer2-3'	5'-AAC CAA TGC CAC CCC ACT GA-3'	150
		531 probe-Taq	5'-FAM-TTG TCC CTC CAC TTC TTC TC-TAMRA-3'	50
	1445 (87 bp)	1445 primer1-5'	5'-GGA GTA AGA CGA TTC AGA TCA AAC AC-3'	150
		1445 primer2-3'	5'-ATC GAC CTG CAG CCC AAG CT-3'	150
		1445 probe-Taq	5'-FAM-ATC AGA TTG TCG TTT CCC GCC TTC AGT TT-TAMRA-3'	50
	15985 (82 bp)	15985 primer1-5'	5'-GTT ACT AGA TCG GGG ATA TCC-3'	150
		15985 primer2-3'	5'-AAG GTT GCT AAA TGG ATG GGA-3'	150
		15985 probe-Taq	5'-FAM-CCG CTC TAG AAC TAG TGG ATC TGC ACT GAA-TAMRA-3'	50
	MON88913 (94 bp)	MON88913 primer1-5'	5'-GGC TTT GGC TAC CTT AAG AGA GTC-3'	500
		MON88913 primer2-3'	5'-CAA ATT ACC CAT TAA GTA GCC AAA TTA C-3'	500
		MON88913 probe-Taq	5'-FAM-AAC TAT CAG TGT TTG ACT ACA T- MGBNFQ 2)-3'	100
	LLCotton25 (79 bp)	KVM156 1-5'	5'-CAA GGA ACT ATT CAA CTG AG-3'	400
		KVM155 2-3'	5'-CAG ATT TTT GTG GGA TTG GAA TTC-3'	400
		TM018 probe-Taq	5'-FAM-CTT AAC AGT ACT CGG CCG TCG ACC GC-TAMRA-3'	200
	281/3006 (111 bp)	281 f1-5'	5'-CTC ATT GCT GAT CCA TGT AGA TTT C-3'	350
		281 r2-3'	5'-GGA CAA TGC TGG GCT TTG TG-3'	450
		281s2 probe-Taq	5'-FAM-TTG GGT TAA TAA AGT CAG ATT AGA GGG AGA CAA-TAMRA-3'	175
	GHB614 (120 bp)	SHA007-5‘	5'-CAA ATA CAC TTG GAA CGA CTT CGT-3'	400
		SHA008-3'	5'-GCA GGC ATG CAA GCT TTT AAA-3'	400
		TM072-Taq	5'-FAM-CTC CAT GGC GAT CGC TAC GTT CTA GAA TT-TAMRA-3'	200
	T304-40 (79 bp)	T304-40-5'	5'-AGC GCG CAA ACT AGG ATA AAT T-3'	400
		T304-40-3'	5'-CCT AGA TCT TGG GAT AAC TTG AAA AGA-3'	400
		T304-40-Taq	5'-FAM-TCG CGC GCG GTG TCA TCT ATC TC-TAMRA-3'	200
	GHB119 (90 bp)	GHB119-5'	5'-CCA GTA CTA AAA TCC AGA TCA TGC A-3'	400
		GHB119-3'	5'-GAA ATT GCG TGA CTC AAA TTC C-3'	400
		GHB119-Taq	5'-FAM-CCT GCA GGT CGA CGG CCG AGT AC-TAMRA-3'	200
	COT102 (101 bp)	COT102_3_89F	5'-TCT CCG CTC ATG ATC AGA TTG TC-3'	600
		COT102_3_181R	5'-CAG TAA CAG TAC AGT CGG TGT AGG G-3'	600
		COT102_3_115T	5'-FAM-TCC CGC CTT CAG TTT AAA CTA TCA GTG TTT AAT-TAMRA-3'	150
	MON88701 (84 bp)	MON88701 primer1	5'-CAT ACT CAT TGC TGA TCC ATG TAG A-3'	300
		MON88701 primer2	5'-AGT GTT AAA CAA GTT ATG TTC TAG AGC-3'	300
		MON88701 probe	5'-FAM-TTC CCG GAC ATG AAG CCT TAA TTC AAT-TAMRA-3'	250
	DAS81910-7 (120 bp)	1706-f2	5'-AAG CTT AGG TGA TTT CGA TGA TG-3'	300
		1706-r3	5'-GAC CTC AAT TGC GAG CTT TC-3'	300
		1706-p3	5'-FAM-CAC ACC AAA AGT TAG GCC CG-TAMRA-3'	150

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

1) 면화 531 검출용 PCR 검사 결과 양성인 경우 별도로 15985 PCR 검사 결과를 확인하여 15985 양성인 경우 “15985 검출”로 판정하고 15985 음성인 경우 “531 검출”로 판정한다.

2) MGBNFQ : Minor groove binding non-fluorescent quencher

표 10. 유전자변형 면화 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	150 nM ~ 600 nM	0.375~1.5
Probe (10 μM)	50 nM ~ 350 nM	0.125~0.875
주형 DNA (20 ng/μL)	100 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1)Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석)
실시간 PCR은 기기에 플레이트나 캐필러리를 장착하고 분석 프로그램을 작동시켜 시료의 정보를 입력한 후 장치의 덮개 온도(cover temperature)가 105℃ 정도인 것이 확인되면 반응을 개시한다. 96 웰(well) 플레이트 방식의 PCR 반응 조건은 표 11, 12와 같으며, PCR 반응 종료 후 실험결과를 해석한다. PCR 반응 조건은 사용하는 실시간 PCR 기기에 따라 최적 조건으로 변형하여 사용할 수 있으며, 기기 제조사에 별도 문의하여 적용한다.

표 11. 유전자변형 면화 검사에 사용되는 실시간-PCR 반응 조건(531 제외)

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	45 cycles
	60℃	1분	Yes

표 12. 유전자변형 면화 531 검사에 사용되는 실시간-PCR 반응 조건

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	45 cycles
	55℃	1분	Yes

라. 정성분석결과의 판정

PCR 결과를 해석하기 위하여 다음과 같은 절차를 수행한다. ㉮ PCR이 완료되면 PCR 반응 횟수(PCR cycle)에 대해 형광 시그널의 증가량(ΔRn)을 표시한 유전자 증폭곡선에서 3 cycles부터 15 cycles까지를 baseline의 범위로 지정하며, ㉯ 분석하고자 하는 유전자의 양성대조군의 증폭곡선이 지수함수적으로 증가하는 부분의 가운데에 threshold line(Th. line)이 위치하도록 하고(이때 선택된 Th. line은 NTC에서 나타날 수 있는 비특이적 증폭곡선과 교차하지 않아야 함), ㉰ 분석하고자 하는 시료의 Ct 값(설정된 Th. line과 시료의 증폭 곡선과의 교차점에서 구해진 PCR cycle)을 구한다. ㉱ 다른 유전자의 양성대조군 증폭곡선들에 대해서도 각각 ㉯ - ㉰항의 작업을 반복하여 Ct 값을 구한다. 이때 NTC의 경우 모든 웰(well)에서 Ct 값이 45여야 한다. 추출 DNA 시료액 별로 3 반복 시험한 결과, 2개 이상의 웰(well)에서 Ct 값이 45 미만이면서 지수함수적인 증폭이 확인되는 경우 해당 DNA 시료액이 양성이라고 판정한다.
하나의 시료에 대한 2회 반복 추출 DNA의 PCR 결과, 하나 이상의 추출 DNA에서 내재성 유전자와 재조합유전자가 양성인 경우 ‘유전자변형 면화 검출’로 판정한다. 2회 반복 추출 DNA에서 모두 내재성 유전자는 양성이지만 모든 재조합유전자가 음성인 경우 ‘불검출’로 판정한다. 다만, 2회 반복 추출 DNA에서 모두 내재성 유전자가 음성인 경우에는 DNA 추출 과정부터 다시 반복 시험한다. 반복시험에서도 동일한 결과인 경우 ‘검사불능’으로 판정한다(표 13).

표 13. 결과 판정의 흐름도(예시)

사례	추출 DNA	결과 분석		GMO 여부 판정
		내재성유전자	재조합유전자
사례 1	추출 1	+	+	검출
	추출 2	+	+
사례 2	추출 1	+	+	검출
	추출 2	+	-
사례 3	추출 1	+	+	검출
	추출 2	-	/
사례 4	추출 1	+	-	불검출
	추출 2	+	-
사례 5	추출 1	+	-	불검출
	추출 2	-	/
사례 6	추출 1	-	/	검사 불능*
	추출 2	-	/

+ : 목적 유전자의 증폭이 확인됨

- : 목적 유전자의 증폭이 확인되지 않음

/ : 실험이 불필요함

* 사례 6의 경우 DNA 추출 1회를 추가로 실시하여 PCR을 한다.

마. 실시간 PCR 장치에 의한 정량분석 및 분석결과의 판정

유전자변형 면화의 혼입 판별을 위한 정량분석 및 분석결과의 판정은 10.1.6 정량시험에 따른다.

제7. 10. 10.1 10.1.12를 다음과 같이 한다.

10.1.12 유전자변형 카놀라

카놀라 또는 그 가공식품에 대하여 실시간 PCR 장치를 사용하여 유전자변형 카놀라를 검출하기 위한 정성 및 정량분석법이다.

가. DNA의 추출

10.1.3 DNA의 추출․정제법에 따라 2회 반복 추출하여 얻은 DNA 용액을 사용한다.

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

유전자변형 카놀라 검출에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)는 표 14와 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브(probe)를 사용할 수도 있다.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 14의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 15와 같다. 다만, PCR 반응액 조성은 프라이머와 프로브(probe) 또는 실시간 PCR 기기에 따라 다를 수 있으므로 시약이나 기기의 사용 매뉴얼을 참고하여 적용한다. 각 PCR 반응 시에 사용하여야 하는 음성대조군과 양성대조군 등 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 나. 시약 및 시액 2) 실시간 PCR용 반응액의 조제에 따른다.

표 14. 유전자변형 카놀라의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성 유전자	카놀라 (101 bp)	BncruA 1-5'	5'-GGC CAG GGT TTC CGT GAT-3‘	200
		BncruA 2-3'	5'-CCG TCG TTG TAG AAC CAT TGG-3‘	200
		BncruA-Taq	5'-FAM-AGT CCT TAT GTG CTC CAC TTT CTG GTG CA-TAMRA-3‘	200
구조 유전자	T45 (123 bp)	KVM172-5'	5'-CAA TGG ACA CAT GAA TTA TGC-3‘	400
		MDB599-3'	5'-GAC TCT GTA TGA ACT GTT CGC-3‘	400
		TM026 probe-Taq	5'-FAM-TAG AGG ACC TAA CAG AAC TCG CCG T-TAMRA-3‘	200
	GT73 (108 bp)	GT73 primer1-5'	5'-CCA TAT TGA CCA TCA TAC TCA TTG CT-3‘	150
		GT73 primer2-3'	5'-GCT TAT ACG AAG GCA AGA AAA GGA-3‘	150
		GT73 pribe-Taq	5'-FAM-TTC CCG GAC ATG AAG ATC ATC CTC CTT-TAMRA-3‘	50
	Ms8 (130 bp)	KVM085-5'	5'-GTT AGA AAA AGT AAA CAA TTA ATA TAG CCG G-3‘	400
		HCA048-3'	5'-GGA GGG TGT TTT TGG TTA TC-3‘	400
		TM011probe-Taq	5'-FAM-AAT ATA ATC GAC GGA TCC CCG GGA ATT C-TAMRA-3‘	200
	Rf3 (139 bp)	DPA165-5'	5'-CAT AAA GGA AGA TGG AGA CTT GAG-3‘	400
		KVM084-3'	5'-AGC ATT TAG CAT GTA CCA TCA GAC A-3‘	400
		TM010 probe-Taq	5'-FAM-CGC ACG CTT ATC GAC CAT AAG CCC A-TAMRA-3‘	200
	MON88302 (101 bp)	88302QF	5'-TCC TTG AAC CTT ATT TTA TAG TGC ACA-3‘	450
		88302QR	5'-TCA GAT TGT CGT TTC CCG CCT TCA-3‘	450
		88302QP	5'-FAM-TAG TCA TCA TGT TGT ACC ACT TCA AAC ACT-TAMRA-3‘	200
	DP-073496-4 (84 bp)	09-0-2824	5'-GTT CTT CTC TTC ATA GCT CAT TAC AGT TTT-3‘	600
		09-0-2825	5'-CAA ACC TCC ATA GAG TTC AAC ATC TTA A-3‘	600
		09-QP83 probe	5'-FAM-TTA GTT AGA TCA GGA TAT TCT TG-MGB*-3‘	250

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 15. 유전자변형 카놀라 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	150 nM ~ 600 nM	0.375~1.5
Probe (10 μM)	50 nM ~ 250 nM	0.125~0.625
주형 DNA (40 ng/μL)	200 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1)Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성 및 정량분석)

카놀라 PCR 반응 조건은 표 16과 같으며, 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석) 및 10.1.6 정량시험에 따른다.

표 16. 유전자변형 카놀라 검사에 사용되는 실시간 PCR 반응 조건

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	45 cycles
	60℃	1분	Yes

라. 분석결과의 판정

유전자변형 카놀라에 대한 분석결과의 판정은 10.1.11 유전자변형 면화 라. 정성분석결과의 판정 및 10.1.6 정량시험 사. 결과의 판정에 따른다.

제7. 10. 10.1 10.1.13을 다음과 같이 한다.

10.1.13 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)

사탕무, 알팔파 또는 그 가공식품에 대하여 실시간 PCR 장치를 사용하여 유전자변형 사탕무와 알팔파를 검출하기 위한 정성 및 정량분석법이다.

가. DNA의 추출

10.1.3 DNA의 추출․정제법에 따르며, 알팔파의 경우 10.1.3.3 알팔파 DNA 추출법에 따라 2회 반복 추출하여 얻은 DNA 용액을 사용한다.

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브

유전자변형 사탕무와 알팔파 검출에 사용되는 프라이머와 프로브는 표 17과 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브를 사용할 수도 있다.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 17의 프라이머와 프로브를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 18, 19와 같다. 다만, PCR 반응액 조성은 프라이머와 프로브 또는 실시간 PCR 기기에 따라 다를 수 있으므로 시약이나 기기의 사용 매뉴얼을 참고하여 적용한다. 각 PCR 반응 시에 사용하여야 하는 음성대조군과 양성대조군 등 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 나. 시약 및 시액 2) 실시간 PCR용 반응액의 조제에 따른다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	GruA3 F-5'	5'-GAC CTC CAT ATT ACT GAA AGG AAG-3'	150
		GruA3 R-3'	5'-GAG TAA TTG CTC CAT CCT GTT CA-3'	150
		GruD1 probe-Taq	5'-FAM-CTA CGA AGT TTA AAG TAT GTG CCG CTC-TAMRA-3'	100
	알팔파 (127 bp)	pef1-85F-5'	5'-TAC GTC CAA TCC CAA CGC C-3'	450
		pef1-211R-3'	5'-GGC CTT TTG CTG GTA ATC TAC AAA C-3'	450
		pef1-110P-Taq	5'-FAM-ACC GTG ACT GCA GCA TCT CTG GCA-TAMRA-3'	210
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	H7PLT1-5'	5'-TGG GAT CTG GGT GGC TCT AAC T-3'	400
		ZRH7-R2-3'	5'-AAT GCT GCT AAA TCC TGA G-3'	400
		ZRH7-probe-Taq	5'-FAM-AAG GCG GGA AAC GAC AAT CT -TAMRA-3'	200
	알팔파 J101 (121 bp)	J101-F12-5'	5'-CTG ATC TTG TGT CAT AGT TTC AAA CAC TG-3'	450
		J101-R11-3'	5'-GCT TTG GAC TGA GAA TTA GCT TCC A-3'	600
		J101-P11-Taq	5'-FAM-AAC TGA AGG CGG GAA ACG ACA ATC TG-TAMRA-3'	200
	알팔파 J163 (105 bp)	J163-F1-5'	5'-GAG GCT TTG GAC TGA GAA TTA GCT T-3'	450
		J163-R3-3'	5'-CAA GGT CAT CCA AAC TGA AGT GTT C-3'	450
		J163-P1-Taq	5'-FAM-CAC TCG AGC AGG ACC TGC AGA AGC TT-TAMRA-3'	180
	알팔파 KK179 (88 bp)	KK179 primer1	5'-GAA GCT AGC TTG ATG GGG ATC AGA-3'	450
		KK179 primer2	5'-AAA GTA ACT AGG CTA AAG TAA GAT ATC GAA GA-3'	450
		KK179 probe	5'-FAM-AAG AGG TTT TGA AGG CGG GAA ACG ACA-TAMRA-3'	100

표 17. 유전자변형 사탕무, 알팔파의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 18.  유전자변형 사탕무 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머 (각 10 μM)	150 nM ~ 400 nM	0.375 ~ 1
Probe (10 μM)	100 nM ~ 200 nM	0.25 ~ 0.5
주형 DNA (10 ng/μL)	50 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1)Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

표 19.  유전자변형 알팔파 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머 (각 10 μM)	450 nM ~ 600 nM	1.125 ~ 1.5
Probe (10 μM)	100 nM ~ 210 nM	0.25 ~ 0.525
주형 DNA (20 ng/μL)	100 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1)Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성 및 정량분석)

사탕무의 PCR 반응조건은 표 20과 같고 알팔파의 PCR 반응조건은 표 21과 같으며, 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석) 및 10.1.6 정량시험에 따른다.

표 20. 유전자변형 사탕무 검사에 사용되는 실시간 PCR 반응 조건

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	50 cycles
	60℃	1분	Yes

표 21. 유전자변형 알팔파 검사에 사용되는 실시간 PCR 반응 조건

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	45 cycles
	60℃	1분	Yes

라. 분석결과의 판정

유전자변형 사탕무 및 알팔파에 대한 분석결과의 판정은 10.1.11 유전자변형 면화 라. 정성분석결과의 판정 및 10.1.6 정량시험 사. 결과의 판정에 따른다. 다만, 사탕무의 경우 PCR cycle 수가 50이므로 모든 NTC의 Ct 값이 50이어야 하며, 추출 DNA 시료액 별로 3 반복 시험한 결과, 2개 이상의 웰(well)에서 Ct 값이 50 미만이면서 지수함수적인 증폭이 확인되는 경우 해당 DNA 시료액이 양성이라고 판정한다.

제7. 10. 10.1 10.1.14를 다음과 같이 한다.

10.1.14 미승인 유전자변형 밀

밀 또는 그 가공식품에 대하여 PCR 또는 실시간 PCR 장치를 사용하여 제초제 내성 미승인 유전자변형 밀을 검출하기 위한 정성분석방법이다.

가. DNA의 추출

10.1.3 DNA의 추출․정제법에 따라 2회 반복 추출하여 얻은 DNA 용액을 사용한다.

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

미승인 유전자변형 밀 검출에 사용하는 프라이머와 프로브(probe)는 표 22와 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브(probe)를 사용할 수도 있다.

2) 반응액의 조제

표 22의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 23〜25와 같다. 다만, PCR 반응액 조성은 프라이머와 프로브(probe) 또는 PCR 기기에 따라 다를 수 있으므로 시약이나 기기의 사용 매뉴얼을 참고하여 적용한다.

표 22. 미승인 유전자변형 밀 검사용 프라이머와 프로브(probe)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성유전자	밀 (102 bp)	WACC-KF WACC-KR	5'-GGA GGC ATG CTT CGC TGT CT-3' 5'-CTG CTG CCA TTC CAT TGT TC-3'	400 400
	(94 bp)	WACC-Rf WACC-KR WACC-p	5'-GCT TCG CTG TCT AAG GTT GT-3' 5'-CTG CTG CCA TTC CAT TGT TC-3' 5'-FAM-CGG CAA AAC ACC AAT TCA CA-TAMRA-3'	500 500 300
구조유전자	M71800 (156 bp)	M71800-KF M71800-KR	5'-CTC CGA TGA AGT GTG AGT AG-3' 5'-CCC CAT TTG GAC GTG AAT GT-3'	400 400
	(90 bp)	M71800-Rf M71800-Rr M71800-p	5'-CTT CTC TCT CTT TGA ATC TCA ATA C-3' 5'-CCA TTT GGA CGT GAA TGT AGA CAC-3' 5'-FAM-CCC TCT CTA ATT CGG AAA TC-TAMRA-3'	500 500 500

표 23. 밀 내재유전자 및 미승인 유전자변형 밀 검사용 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Gold Taq polymerase(5 U/μL)	0.5U	0.1
PCR Buffer(10X)	1X	2.5
MgCl2(25mM)	1.5 mM	1.5
dNTPs(2.5mM)	200 μM	2.0
프라이머(각 25 μM)	각 400 nM	각 0.4
주형 DNA(20 ng/μL)	50 ng	2.5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	15.6
전체량		25

표 24. 밀 내재유전자 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix(2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 25 μM)	각 500 nM	각 0.5
프로브(10 μM)	300 nM	0.75
주형 DNA(20 ng/μL)	50 ng	2.5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	8.25
전체량		25

표 25. 미승인 유전자변형 밀 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix(2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 25 μM)	각 500 nM	각 0.5
프로브(10 μM)	500 nM	1.25
주형 DNA(20 ng/μL)	50 ng	2.5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	7.75
전체량		25

다. 시험 조작

미승인 유전자변형 밀 검사를 위한 PCR 반응조건은 표 26∼27과 같다.

표 26. 미승인 유전자변형 밀 검사용 PCR 반응 조건

	온도	시간	cycle 수
초기변성 (Initial denaturation)	95℃	5분	1 cycle
변성 (denaturation) 결합 (annealing) 신장 (extension)	95℃ 59℃ 72℃	30초 30초 30초	40 cycles
최종신장 (elongation)	72℃	7분	1 cycle

표 27. 미승인 유전자변형 밀 검사용 실시간 PCR 반응 조건

	온도	시간	결과수집	cycle 수
전 반응 (Pre-PCR incubation)	50℃	2분	No	1 cycle
초기 변성 (Initial denaturation)	95℃	10분	No	1 cycle
증폭 (Amplification)	95℃	15초	No	45 cycles
	59℃	1분	Yes

라. 분석결과의 판정

1) PCR에 따른 결과의 판정

10.1.5 정성시험 마. 전기영동에 따른 결과의 판정에 따라 아가로스겔(agarose gel) 또는 폴리아크릴아마이드겔(polyacrylamide gel)을 이용한 전기영동 등으로 PCR 증폭 결과를 확인하며, 바. 분석 결과의 판정 및 처리에 따라 결과를 판정한다.
2회 반복 추출 DNA에 대한 PCR 결과, 하나 이상의 추출 DNA에서 확인시험에 의해 내재성유전자와 도입된 재조합유전자 특이 증폭산물이 모두 확인된 경우 ‘미승인 유전자변형 밀 검출’로 판정하고, 2회 반복 추출 DNA에 대하여 내재성유전자의 증폭산물은 모두 확인되나 도입유전자 특이 증폭산물이 확인되지 않은 경우에는 ‘불검출’로 판정한다.
다만, 2회 반복 추출 DNA에서 모두 내재성유전자의 증폭산물이 확인되지 않은 경우에는 DNA 추출 과정부터 다시 반복시험하고, 반복시험 후에도 동일하게 내재성유전자의 증폭산물이 확인되지 않는 경우 ‘검사불능’으로 판정한다.

2) 실시간 PCR에 따른 결과의 판정

10.1.11 유전자재조합 면화 라. 분석결과의 판정에 따르며, 추출 DNA 시료액 별로 3 반복 시험한 결과, 2개 이상의 웰(well)에서 Ct 값이 45 미만이면서 지수함수적인 증폭이 확인되는 경우 해당 DNA 시료액이 양성이라고 판정한다.

[별표 1] 1. 중 A가014300을 삭제한다.

[별표 1] 1. 중 A가043100을 다음과 같이 한다.

A가043100	단삼	Dan-shen	Salvia miltiorrhiza Bunge	씨앗

[별표 1] 1. 중 A가045200을 다음과 같이 한다.

A가045200	대두	콩, 백태, 청태, 노란콩, 검정콩, 흑두(黑豆), 서리태, Soybean, Black Beans	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗

[별표 1] 2. 중 A나002050을 다음과 같이 신설한다.

A나002050	가시이마쏙	Chinese mud shrimp	Austinogebia wuhsienweni / Upogebia wuhsienweni	-

[별표 1] 2. 중 A나011350을 다음과 같이 신설한다.

A나011350	곳체다슬기	Martens	Semisulcospira gottschei	-

[별표 1] 2. 중 A나072150을 다음과 같이 신설한다.

A나072150	지중해담치	-	Mytilus galloprovincialis	-

[별표 2] 3. 중 B다003100을 다음과 같이한다.

B다003100	Zymomonas mobilis	Achromobacter anaerobium, Pseudomonas lindneri, Saccharomonas lindneri, Thermobacterium mobile, Zymomonas anaerobia	Zymomonas mobilis	주류 및 레반(Levan) 제조에 한함

[별표 2] 3. 중 B다003200 ∼ B다003800을 다음과 같이 신설한다.

B다003200	Brevibacterium linens		Brevibacterium linens	유가공품 제조에 한함
B다003300	Corynebacterium ammoniagenes	-	Corynebacterium ammoniagenes	유가공품 제조에 한함
B다003400	Dekkera bruxellensis	-	Dekkera bruxellensis	주류 제조에 한함
B다003500	Gluconacetobacter hanseni	-	Gluconacetobacter hanseni	식초 제조에 한함
B다003600	Lachancea thermotolerans	-	Lachancea thermotolerans	주류 제조에 한함
B다003700	Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis	-	Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis	유가공품 제조에 한함
B다003800	Leuconostoc carnosum	-	Leuconostoc carnosum	발효육류 제조에 한함

[별표 4] (46) 메틸브로마이드(Methylbromide) 중 다음 항목을 신설한다.

인과류	20

[별표 5] (10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin /Streptomycin) 중 “닭근육 0.6”을, “가금근육 0.6”으로 하고, “닭간 0.6”을 “가금간 0.6”으로 하며, “닭지방 0.6”을 “가금지방 0.6”으로 하고, “닭신장 1.0”을 “가금신장 1.0”으로 하며, 다음 항목을 신설한다.

염소근육	0.5

염소간	0.6

염소지방	0.6

염소신장	1.0

말근육	0.5

말간	0.6

말지방	0.6

말신장	1.0

[별표 5] (11) 레바미졸(Levamisole) 중 다음 항목을 신설한다.

유	0.01

[별표 5] (16) 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G, Procaine benzylpenicillin) 중 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.05

양간	0.05

양신장	0.05

염소근육	0.05

염소간	0.05

염소신장	0.05

말근육	0.05

말간	0.05

말신장	0.05

[별표 5] (33) 이버멕틴(Ivermectin) 중 “소간 0.1”을 “소간 0.8”로 하고, “소지방 0.04”를 “소지방 0.4”로 하며 다음 항목을 신설한다.

소근육	0.03

소신장	0.1

염소근육	0.03

염소간	0.8

염소지방	0.4

염소신장	0.1

말근육	0.03

말간	0.8

말지방	0.4

말신장	0.1

[별표 5] (38) 클로산텔(Closantel) 중 다음 항목을 신설한다.

돼지근육	2.0

돼지간	2.0

돼지지방	2.0

돼지신장	5.0

유	0.05

[별표 5] (40) 타일로신(Tylosin) 중 "◎ 잔류물의 정의 : Tylosin"을 “◎ 잔류물의 정의 : Tylosin A"로 하고, 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.1

양간	0.1

양지방	0.1

양신장	0.1

염소근육	0.1

염소간	0.1

염소지방	0.1

염소신장	0.1

[별표 5] (43) 틸미코신(Tilmicosin) 중 다음 항목을 신설한다.

닭근육	0.15

닭간	2.4

닭지방/피부	0.25

닭신장	0.6

[별표 5] (44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel/Fenbendazole /Oxfendazole) 중 다음 항목을 신설한다.

사슴근육	0.1

사슴간	0.5

사슴지방	0.1

사슴신장	0.1

닭근육	0.05

닭간	0.5

닭지방	0.05

닭신장	0.05

알	1.3

[별표 5] (54) 노르플록사신 ∼ (56) 페플록사신을 삭제한다.

[별표 5] (57) ∼ (104)를 각각 (54) ∼ (101)로 한다.

[별표 5] (105) 프라지콴텔(Praziquantel)을 (102) 프라지콴텔(Praziquantel)로 하고, 그 내용 중 “조피볼락 0.02”를 “어류 0.02”로 하며, 다음 항목을 신설한다.

말근육	0.3

말간	4

말지방	0.2

말신장	4

[별표 5] (106) ∼ (115)를 각각 (103) ∼ (112)로 한다.

[별표 5] (116) 클로술론(Clorsulon)을 (113) 클로술론(Clorsulon)으로 하고, 그 내용 중 다음 항목을 신설한다.

양근육	0.035

양간	0.1

양신장	0.2

염소근육	0.035

염소간	0.1

염소신장	0.2

유	0.02

[별표 5] (117) ∼ (194)를 각각 (114) ∼ (191)로 한다.

[별표 6] (19) 중 “계란”을 “달걀로 한다.

[별표 6] (59) 중 “계란”을 “달걀로 한다.

[별표 6] (68) 중 “계란”을 “달걀로 한다.

[별표 6] (80) 중 “계란”을 “달걀로 한다.

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1조제1항에도 불구하고 다음 각 호의 구분에 따른 개정규정은 다음 각 호에서 정한 날부터 시행한다.

1. 고시 후 1년이 경과한 날

가. 제2. 3. 8) ①의 개정규정

나.  [별표 5] 중 (54) 노르플록사신, (55) 오플록사신, (56) 페플록사신의 개정규정

2. 고시 후 6개월이 경과한 날

가. [별표 5] 중 (10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신, (11) 레바미졸, (16) 벤질페니실린, (33) 이버멕틴, (38) 클로산텔, (40) 타일로신, (43) 틸미코신, (44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸, (105) 프라지콴텔, (116) 클로술론의 개정규정

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

현  행

개  정(안)

제1. 총칙

1. (생  략)

제1. 총칙

1. (현행과 같음)

2. 기준 및 규격의 적용

1) ～ 8) (생  략)

<신 설>

9) ～ 11) (생  략)

3. (생  략)

4. 식품원료 분류

1) (생  략)

2) 동물성 원료

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(생략)	(생 략)
	-	(생략)	(생 략)
	-	알류	계란, 오리알, 메추리알 등
(생 략)	(생 략)	(생략)	(생 략)
		(생략)	(생 략)
		(생략)	(생 략)
	-	(생략)	(생 략)
	(생 략)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
(생 략)	-	(생 략)	(생 략)
	-	-	(생 략)

2. 기준 및 규격의 적용

1) ～ 8) (현행과 같음)

9) 이 고시에서 정하고 있는 “허용외 타르색소”란 상기 제1. 2. 8)에서 정한 타르색소 중 「식품첨가물의 기준 및 규격」에서 해당 식품유형에 허용되지 않은 타르색소를 말한다.

10) ～ 12) (현행 9)～11)과 같음)

3. (현행과 같음)

4. 식품원료 분류

1) (현행과 같음)

2) 동물성 원료

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	-	알류	달걀, 오리알, 메추리알 등
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	-	-	(현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) 원료 등의 구비요건

(1) ～ (15) (생  략)

(16) 생식용 굴은「정착성 수산동식물 생산해역의 등급설정 기준」(해양수산부 고시)에 따라 청정해역의 수질기준에 적합한 해역에서 생산된 것이거나 자연정화* 또는 인공정화** 작업을 통해 청정해역의 기준에 적합하도록 처리된 것이어야 한다.

(이하 생략)

(17) ～ (23) (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) 원료 등의 구비요건

(1) ～ (15) (생  략)

(16) --------- 「패류 생산해역 수질의 위생기준」(해양수산부 고시)에 따라 지정해역 수준의 수질 위생기준에---- -----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

--------------.

(이하 현행과 같음)

(17) ～ (23) (현행과 같음)

2) 식품원료판단기준

(1) ∼ (6) (생  략)

(7) 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료

① (생  략)

② (생  략)

㉮ ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’로 명시되어 있는 동‧식물 등은 가공전 원료의 중량을 기준으로 원료배합시 50% 미만(배합수 제외한다) 사용하여야 한다.

㉯ ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’에 속하는 원료를 혼합할 경우, 원료의 가공 전 중량을 기준으로 총량이 제품의 50% 미만(배합수는 제외한다)이어야 한다.

<신 설>

㉰ 다만, 다류, 음료수, 주류 및 향신료 제조 시에는 제품의 구성원료 중 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’에 속하는 식물성원료가 1 가지인 경우에는 ‘식품에 사용할 수 있는 원료’로 사용할 수 있다.

2) 식품원료판단기준

(1) ∼ (6) (현행과 같음)

(7) 식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료

① (현행과 같음)

② (현행과 같음)

㉮ 식품 제조 시 사용되는 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’는 원료의 중량을 기준으로 50% 미만(배합수 제외)을 사용하여야 한다.

㉯ 식품 제조 시 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’를 2가지 이상 혼합할 경우 혼합되는 총량은 원료의중량을 기준으로 50% 미만(배합수 제외) 사용하여야 한다.

㉰ 다만, 최종 소비자에게 판매되지 아니하고 제조업소에 공급되는 원료용 제품을 제조하고자 하는 경우에는 위의 ㉮, ㉯ 항을 적용받지 아니할 수 있다.

㉱ 다류, 음료수, 주류 및 향신료 제조 시 ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’ 에 속하는 식물성원료가 1가지인 경우에는 원료의 중량을 기준으로 100%까지 (배합수 제외) 사용할 수 있다.

2. (생  략)

2. (현행과 같음)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) (생  략)

2) 이물

(1) 식품은 원료의 처리과정에서 ① 그 이상 제거되지 아니하는 정도 이상의 이물,  ② 오염된 비위생적인 이물, ③ 인체에 위해를 끼치는 단단하거나 날카로운 이물을 함유하여서는 아니 된다. 다만, 다른 식물이나 원료식물의 표피 또는 토사, 원료육의 털, 뼈 등과 같이 실제에 있어 정상적인 제조․가공상 완전히 제거되지 아니하고 잔존하는 경우의 이물로서 그 양이 적고 위해 가능성이 낮은 경우는 제외한다.

(2) (생  략)

3) ～ 7) (생  략)

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) (현행과 같음)

2) 이물

(1) 식품은 다음의 이물을 함유하여서는 아니된다.

① 원료의 처리과정에서 그 이상 제거되지 아니하는 정도 이상의 이물

② 오염된 비위생적인 이물

③ 인체에 위해를 끼치는 단단하거나 날카로운 이물

다만, 다른 식물이나 원료식물의 표피 또는 토사, 원료육의 털, 뼈 등과 같이 실제에 있어 정상적인 제조․가공상 완전히 제거되지 아니하고 잔존하는 경우의 이물로서 그 양이 적고 위해 가능성이 낮은 경우는 제외한다.

(2) (현행과 같음)

3) ～ 7) (현행과 같음

8) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류동물용의약품 기준적용

① (생  략)

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
1	니트로푸란{푸라졸리돈(Furazolidone), 푸랄타돈(Furaltadone), 니트로푸라존(Nitrofurazone), 니트로푸란토인(Nitrofurantoine), 니트로빈(Nitrovin) 등} 제제 및 대사물질 ◎ 잔류물의 정의 : 3-amino-2-oxazolidinone(AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl- 2-oxazolidinone(AMOZ), semicarbazide(SEM)*2, nitrofurazone*3, 1-aminohydantoin(AHD), nitrovin
2	클로람페니콜(Chloramphenicol) ◎ 잔류물의 정의 : Chloramphenicol
3	말라카이트 그린(Malachite green) 및 대사물질 ◎ 잔류물의 정의 : Malachite green과 Leucomalachite green의 합을 malachite green으로 함
4	디에틸스틸베스트롤(Diethylstilbestrol, DES) ◎ 잔류물의 정의 : Diethylstilbestrol
5	디메트리다졸(Dimetridazole) ◎ 잔류물의 정의 : Dimetridazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl-5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Dimetridazole로 함
6	클렌부테롤(Clenbuterol) ◎ 잔류물의 정의 : Clenbuterol
7	반코마이신(Vancomycin) ◎ 잔류물의 정의 : Vancomycin
8	클로르프로마진(Chlorpromazine) ◎ 잔류물의 정의 : Chlorpromazine
9	티오우라실(Thiouracil) ◎ 잔류물의 정의 : 2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl- 2-thiouracil 및 6-phenyl-2-thiouracil의 합을 thiouracil로함
10	콜치신(Colchicine) ◎ 잔류물의 정의 : Colchicine
11	피리메타민(Pyrimethamine) ◎ 잔류물의 정의 : Pyrimethamine
12	메드록시프로게스테론 아세테이트 (Medroxyprogesterone acetate, MPA) ◎ 잔류물의 정의 : Medroxyprogesterone acetate
13	카바독스(Carbadox) ◎ 잔류물의 정의 : Quinoxaline-2- carboxylic acid (QCA)
14	답손(Dapsone) ◎ 잔류물의 정의 : Dapsone, monoacetyl dapson의 합을 dapsone으로 함
15	올라퀸독스(Olaquindox) ◎ 잔류물의 정의 : 3-methyl quinoxaline- 2-carboxylic acid (MQCA)
16	로니다졸(Ronidazole) ◎ 잔류물의 정의 : Ronidazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl-5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Ronidazole로 함
17	메트로니다졸(Metronidazole) ◎ 잔류물의 정의 : Metronidazole과 1-(2-hydroxyethyl)-2-hydroxymethyl-5-nitroimidazole (Metronidazole-OH)의 합을 Metronidazole로 함
18	이프로니다졸(Ipronidazole) ◎ 잔류물의 정의 : Ipronidazole과 1-methyl-2- (2'-hydroxyisopropyl) -5-nitroimidazole (Ipronidazole-OH)의 합을 Ipronidazole로 함

*주1. 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공식품에 한한다.

*주2. 니트로푸라존의 대사물질인 세미카바자이드(semicarbazide, SEM)는 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함, 갑각류 제외)의 가식부위에 한하여 적용한다.

*주3. 갑각류에 한해 적용한다.

8) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류동물용의약품 기준적용

① (현행과 같음)

번호	식품*1 중 검출되어서는 아니 되는 물질
	물질명	잔류물의 정의
1	니트로푸란계(Nitrofurans)
	- 푸라졸리돈(Furazolidone)	3-Amino-2-oxazolidinone(AOZ)
	- 푸랄타돈(Furaltadone)	3-Amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone (AMOZ)
	- 니트로푸라존(Nitrofurazone)	- Semicarbazide(SEM) : 비가열 축산물 및 동물성 수산물(단순절단 포함, 갑각류 제외)의 가식부위에 한함 - Nitrofurazone : 갑각류에 한함
	- 니트로푸란토인(Nitrofurantoine)	1-Aminohydantoin(AHD)
	- 니트로빈(Nitrovin)	Nitrovin
2	카바독스(Carbadox)	Quinoxaline-2-carboxylic acid (QCA)
3	올라퀸독스(Olaquindox)	3-methyl quinoxaline-2-carboxylic acid (MQCA)
4	클로람페니콜(Chloramphenicol)	Chloramphenicol
5	클로르프로마진(Chlorpromazine)	Chlorpromazine
6	클렌부테롤(Clenbuterol)	Clenbuterol
7	콜치신(Colchicine)	Colchicine
8	답손(Dapsone)	Dapsone, monoacetyl dapson의 합을 dapsone으로 함
9	디에틸스틸 베스트롤(Diethylstilbestrol, DES)	Diethylstilbestrol
10	메드록시프로게스테론 아세테이트 (Medroxyprogesterone acetate, MPA)	Medroxyprogesterone acetate
11	티오우라실(Thiouracil)	2-thiouracil, 6-methyl-2-thiouracil, 6-propyl- 2-thiouracil 및 6-phenyl- 2-thiouracil의 합을 thiouracil로함
12	겐티안 바이올렛 (GentianViolet, Crystal violet)	Gentian violet과 Leuco -gentian violet의 합을 Gentian violet으로 함
13	말라카이트 그린 (Malachite green)	Malachite green과 Leuco-malachite green의 합을 malachite green으로 함
14	메틸렌 블루 (Methylene Blue)	Methylene blue와 Azure B의 합을 Methylene Blue로 함
15	디메트리다졸(Dimetridazole)	Dimetridazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl- 5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Dimetridazole로 함
16	이프로니다졸(Ipronidazole)	Ipronidazole과 1-methyl-2-(2'-hydroxyisopropyl) -5-nitroimidazole (Ipronidazole-OH)의 합을 Ipronidazole로 함
17	메트로니다졸(Metronidazole)	Metronidazole과 1-(2-hydroxyethyl)-2 -hydroxymethyl -5-nitroimidazole(Metronidazole-OH)의 합을 Metronidazole로 함
18	로니다졸(Ronidazole)	Ronidazole과 2-hydroxymethyl-1-methyl -5-nitroimidazole(HMMNI)의 합을 Ronidazole로 함
19	노르플록사신(Norfloxacin)	Norfloxacin
20	오플록사신(Ofloxacin)	Ofloxacin
21	페플록사신(Pefloxacin)	Pefloxacin
22	피리메타민(Pyrimethamine)	Pyrimethamine
23	반코마이신(Vancomycin)	Vancomycin

*주1. 축산물 및 동물성 수산물과 그 가공식품에 한한다

② ∼ ⑤  (생  략)

(2) ∼ (3)  (생  략)

9) 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

① ∼ ⑧ (생  략)

⑨ 알 : 가금류로부터 생산된 계란, 오리알, 메추리알 등으로 껍질을 제거한 부위를 말한다.

10) ∼ 18)  (생  략)

② ∼ ⑤  (현행과 같음)

(2) ∼ (3)  (현행과 같음)

9) 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

① ∼ ⑧ (현행과 같음)

⑨ 알 : 가금류로부터 생산된 달걀, 오리알, 메추리알 등으로 껍질을 제거한 부위를 말한다.

10) ∼ 18)  (현행과 같음)

4. 보존 및 유통기준

1) ～ 4) (생  략)

5) 냉장제품은 0〜10℃에서 냉동제품은 -18℃이하에서 보관 및 유통하여야 한다.

6) 즉석섭취편의식품류는 제조된 식품을 가장 짧은 시간내에 소비자에게 공급하도록 하고 운반 및 유통 시에는 냉장, 온장, 실온 및 일정한 온도 관리를 위하여 온도 조절이 가능한 설비 등을 이용하여야 하며 이때 냉장은 0〜10℃, 온장은 60℃이상을 유지할 수 있어야 한다.

7) ∼ 12) (생  략)

13) 달걀을 세척하는 경우 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(100～200 ppm 차아염소산나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균효력이 있는 방법)로 세척하여야 하고, 세척한 달걀은 냉장으로 보존․유통하여야 한다.

14) ∼ 30) (생  략)

4. 보존 및 유통기준

1) ～ 4) (현행과 같음)

5) 이 고시에서 별도로 보관온도를 정하고 있지 않은 냉장제품은 -------------.

6) 즉석섭취식품과 도시락은 ---

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

-----------------------------

7) ∼ 12) (현행과 같음)

13) 달걀을 물로 세척하는 경우 --

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-----------------------------

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-----------------------------

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--------------.

14) ∼ 30) (현행과 같음)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) 정의

과자류, 빵류 또는 떡류라 함은 곡분, 설탕, 계란, 유제품 등을 주원료로 하여 가공한 과자, 캔디류, 추잉껌, 빵류, 떡류를 말한다.

2) ∼ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 빵류

밀가루 또는 기타 곡분, 설탕, 유지, 계란 등을 주원료로 하여 이를 발효시키거나 발효하지 않고 반죽한 것 또는 크림, 설탕, 계란 등을 주원료로 하여 반죽하여 냉동한 것과 이를 익힌 것으로서 식빵, 케이크, 카스텔라, 도넛, 피자, 파이, 핫도그, 티라미스, 무스케익 등을 말한다.

(5) (생  략)

5) ∼ 6) (생  략)

2. 빙과류

2-1 아이스크림류

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) 계란을 사용할 경우에는 사용 전에 계란표면을 세척･소독하여야 한다.

(2) ∼ (5) (생  략)

4) ∼ 6) (생  략)

2-2 아이스크림믹스류

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) 계란을 사용할 경우에는 사용 전에 계란표면을 세척･소독하여야 한다.

(2) ∼ (4) (생  략)

4) ∼ 6) (생  략)

3. (생  략)

4. 당류

4-1 ∼ 4-5 (생  략)

4-6 엿류

1) ∼ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 덱스트린

전분 또는 곡분을 산이나 효소로 가수분해시켜 얻은 생성물을 가공한 것을 말한다.

5) ∼ 6) (생  략)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) 정의

과자류, 빵류 또는 떡류라 함은 곡분, 설탕, 달걀, 유제품 등을 주원료로 하여 가공한 과자, 캔디류, 추잉껌, 빵류, 떡류를 말한다.

2) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

(4) 빵류

밀가루 또는 기타 곡분, 설탕, 유지, 달걀 등을 주원료로 하여 이를 발효시키거나 발효하지 않고 반죽한 것 또는 크림, 설탕, 달걀 등을 주원료로 하여 반죽하여 냉동한 것과 이를 익힌 것으로서 식빵, 케이크, 카스텔라, 도넛, 피자, 파이, 핫도그, 티라미스, 무스케익 등을 말한다.

(5) (현행과 같음)

5) ∼ 6) (현행과 같음)

2. 빙과류

2-1 아이스크림류

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) 달걀을 사용할 경우에는 사용 전에 달걀표면을 세척･소독하여야 한다.

(2) ∼ (5) (현행과 같음)

4) ∼ 6) (현행과 같음)

2-2 아이스크림믹스류

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) 달걀을 사용할 경우에는 사용 전에 달걀표면을 세척･소독하여야 한다.

(2) ∼ (4) (현행과 같음)

4) ∼ 6) (현행과 같음)

3. (현행과 같음)

4. 당류

4-1 ∼ 4-5 (현행과 같음)

4-6 엿류

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 덱스트린

곡분, 전분 등 전분질원료를 --

-------------------------

-----------------.

5) ∼ 6) (현행과 같음)

4-7 당류가공품

1) 정의

당류가공품이라 함은 설탕류, 포도당, 과당류, 엿류, 당시럽류, 올리고당류를 주원료로 하여 가공한 것을 말한다. 다만, 따로 기준 및 규격이 정하여져 있는 것은 그 기준․규격에 의한다.

2) ∼ 6) (생  략)

5. ∼ 6. (생  략)

4-7 당류가공품

1) 정의

------------------------

-------------------------

올리고당류, 벌꿀류 등을 ----

-------------------------

-------------------------

----------------------.

2) ∼ 6) (현행과 같음)

5. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 식용유지류

7-1 식물성유지류

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (생  략)

(4) 조지방

제7. 일반시험법  6.3.1.2 조지방에 따라 시험한다.

(5) (생  략)

(6) 타르색소

제7. 일반시험법 3.4 착색료에 따라 시험한다.

(7) 보존료

제7. 일반시험법 3.1 보존료에 따라 시험한다.

(8) ∼ (10) (생  략)

7. 식용유지류

7-1 식물성유지류

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ∼ (3) (현행과 같음)

<삭  제>

(4) (현행 (5)와 같음)

<삭  제>

<삭  제>

(5) ∼ (7) (현행 (8)～(10)과 같음)

7-2 동물성유지류

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조・가공기준

(1) 식용우지와 식용돈지는 탈검, 탈산, 탈색, 탈취의 정제공정을 거치거나 이와 동등이상의 복합정제공정을 거쳐야 한다.

(2) (생  략)

4) ∼ 6) (생  략)

7-3 ∼ 11. (생  략)

7-2 동물성유지류

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조・가공기준

(1) 원료유지는 탈검, 탈산, 탈색, 탈취의 정제공정을 거치거나 이와 동등이상의 복합정제공정을 거쳐야 한다. (다만, 원료우지 및 원료돈지는 제외)

(2) (현행과 같음)

4) ∼ 6) (현행과 같음)

7-3 ∼ 11. (현행과 같음)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조・가공기준

(1) (생  략)

(2) 참나무속(Quercus spp.) 나무로 만든 오크칩(바)은 과일 또는 과즙을 주원료로 하여 제조한 발효식초에 착향의 목적으로 사용할 수 있으나, 최종제품의 완성 전에 제거하여야 한다. 단, 오크칩(바)에 가열(로스팅) 이외의 어떠한 화학적 처리도 하여서는 아니 된다.

4) ∼ 6) (생  략)

12. 조미식품

12-1 식초

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조・가공기준

(1) (현행과 같음)

(2)  --------------------------

-------------------- 발효식초에 -----------------

-----------------------

----------------------,

-----------------------

----------. -----------

-----------------------

-----------------------

--------.

4) ∼ 6) (현행과 같음)

12-2 소스류

1) ∼ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) 소스

(2) ∼ (3) (생  략)

(4) 복합조미식품

식품에 당류, 식염, 향신료, 단백가수분해물, 효모 또는 그 추출물, 식품첨가물 등을 혼합하여 분말, 과립 또는 고형상 등으로 가공한 것으로 식품에 특유의 맛과 향을 부여하기 위해 사용하는 것을 말한다.

5) 규격

(1) (생  략)

(2) ∼ (5) (생  략)

(6) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	(생 략)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	(생 략)
	(생 략)
<신 설>

6) (생  략)

12-3 ∼ 13. (생  략)

12-2 소스류

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(4) (현행 1)과 같음)

(2) ∼ (3) (현행과 같음)

(1) 복합조미식품

-------------------------

-------------------------

--------------------- 혼합하여 수분함량이 8% 이하가 되도록 ---------------------

-------------------------

---------------------.

5) 규격

<삭  제>

(1) ∼ (4) (현행 (2)～(5)와 같음)

(5) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	(현행과 같음)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	(현행과 같음)
	(현행과 같음)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서, 마요네즈에 한한다.)

6) (현행과 같음)

12-3 ∼ 13. (현행과 같음)

14. 주류

14-1 ∼ 14-8 (생  략)

14-9 일반증류주

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) (생  략)

(2) 메탄올(mg/mL) : 0.5 이하(다만, 용설란(Agave teuilana)을 주원료로 한 제품에 한하여 1.0 이하)

(3) (생  략)

6) ∼ 15. (생  략)

14. 주류

14-1 ∼ 14-8 (현행과 같음)

14-9 일반증류주

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) (현행과 같음)

(2) 메탄올(mg/mL) : 1.0 이하(다만, 곡류를 주원료로 한 제품은 0.5 이하)

(3) (현행과 같음)

6) ∼ 15. (현행과 같음)

16. 식육가공품

16-1 ∼ 16-4 (생  략)

16-5 양념육류

1) ∼ 3) (생  략)

4) 식품유형

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 갈비가공품 : 식육의 갈비부위(뼈가 붙어 있는 것에 한한다)를 정형하여 식품 또는 식품첨가물을 가하여 양념하고 훈연하거나 열처리한 것을 말한다.

(4) (생  략)

5) ∼ 6) (생  략)

16-6 (생  략)

17. 알가공품류

17-1 알가공품

1) ∼ 2) (생  략)

3) 제조·가공기준

(1) ∼ (2) (생  략)

(3) 세척하지 않은 식용란을 사용하는 경우에는 30℃이상이면서 품온보다 5℃이상의 깨끗한 물(100 ～ 200 ppm 차아염소산나트륨 함유 또는 이와 동등 이상의 살균 효력이 있는 방법)로 세척하여야 한다.

(4) ∼ (12) (생  략)

4) ∼ 23. (생  략)

16. 식육가공품

16-1 ∼ 16-4 (현행과 같음)

16-5 양념육류

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 식품유형

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 갈비가공품 : 식육의 갈비부위(뼈가 붙어 있는 것에 한한다)를 정형한 것에 식품 또는 식품첨가물을 가하여 양념한 것이거나 갈비부위를 그대로 또는 양념하여 훈연하거나 가열처리한 것을 말한다.

(4) (현행과 같음)

5) ∼ 6) (현행과 같음)

16-6 (생  략)

17. 알가공품류

17-1 알가공품

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 제조·가공기준

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 물로 세척하지 ----------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

-----.

(4) ∼ (12) (현행과 같음)

4) ∼ 23. (현행과 같음)

제5. ∼ 제6. (생  략)

제5. ∼ 제6. (현행과 같음)

제7. 일반시험법

1. (생  략)

2. 식품성분시험법

2.1 일반성분시험법

2.1.1 수분

2.1.1.1 건조감량법

가. (생  략)

나. 감압가열건조법

1) (생  략)

2) 시험방법

(전단 생략). 다만, 국수, 식빵 등은 미리 건조하여 가루로 한 다음 실시한다. 연유, 생계란 등은 해사와 유리봉을 넣은 칭량병을 미리 건조한 다음 실시한다. (이하 생략)

2.1.1.2 ∼ 2.1.1.3 (생  략)

2.1.2 회분

가. ∼ 나. (생  략)

다. 시험방법

1) (생  략)

2) 검체의 전처리

가) ∼ 나) (생  략)

다) 예비 탄화시켜야 할 검체

회화할 때 팽창하는 검체로서 당류 및 당함량이 많은 식품, 정제전분, 계란의 흰자위 및 일부의 어육이 속한다. (이하 생략)

라) (생  략)

2.1.3 ∼ 3. (생  략)

4. 미생물시험법

4.1 일반사항

4.1.1 검체의 채취

4.1.2 확인시험

가. ∼ 다.(생 략)

라. 식품의약품안전처장이 필요하다고 인정하는 경우에는 식중독균 증균배양 후 PCR 등 분자생물학적 시험법을 활용한 스크리닝 시험을 통하여 불검출로 판정할 수 있다. 다만, 유전자가 확인된 경우 분리배양 후 생화학적 검사를 통하여 해당 식중독균으로 동정되면 검출로 판정한다.

4.2 (생  략)

제7. 일반시험법

1. (현행과 같음)

2. 식품성분시험법

2.1 일반성분시험법

2.1.1 수분

2.1.1.1 건조감량법

가. (현행과 같음)

나. 감압가열건조법

1) (현행과 같음)

2) 시험방법

(현행과 같음). -------------

------------------------

--------------- 생달걀---

------------------------

---------------------. (이하 현행과 같음)

2.1.1.2 ∼ 2.1.1.3 (현행과 같음)

2.1.2 회분

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 시험방법

1) (현행과 같음)

2) 검체의 전처리

가) ∼ 나) (생  략)

다) 예비 탄화시켜야 할 검체

------------------------

------------------------

------, 달걀 ------------

--------------. (이하 현행과 같음)

라) (현행과 같음)

2.1.3 ∼ 3. (현행과 같음)

4. 미생물시험법

4.1 일반사항

4.1.1 (현행과 같음)

4.1.2 확인시험

가. ∼ 다. (현행과 같음)

라. -----------------------

------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 검사 등을 ----------------------

----------------------.

4.2 (현행과 같음)

4.3. 시험용액의 제조

가. ∼ 바. (생  략)

사. 실험을 실시하기 직전에 잘 균질화 하고 검사검체에 따라 다음과 같이 시험용액을 제조한다.

1) ∼ 5) (생  략)

6) 버터와 아이스크림류：버터와 아이스크림류는 40℃이하의 온탕에서 15분 내에 용해시켜 10∼25mL를 취한 후 희석액을 가하여 100∼225 mL로 한 것을 시험용액으로 한다.

7) ∼ 9) (생  략)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

1) ∼  23) (생  략)

24) 3% Ogawa 배지

(생  략)

50℃로 냉각시킨 후 계란액(Egg-Homogenate) 200 mL을 넣고 충분히 혼합하여 5 mL씩 멸균시험관에 분주한 다음 85~90℃에서 60분간 가열한다.

25) ∼ 99) (생  략)

4.4.2 시액

1) ∼ 7) (생  략)

8) 난황액

계란을 1시간 가량 0.1% Mercury Chloride(HgCl2)에 담근 후 꺼내 70% ethanol에 30분 가량 담궈 놓는다. 계란을 꺼내 노른자만 취한 후 동량의 멸균생리식염수를 가하여 사용한다.

9) ∼  12) (생  략)

4.5 ∼ 4.25 (생  략)

4.3. 시험용액의 제조

가. ∼ 바. (현행과 같음)

사. ------------------------

------------------------

-----------------------.

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) -------------- : 검체 일정량(10∼25g)을 멸균용기에 취해 40℃이하의 온탕에서 15분 내에 용해시킨 후 희석액을 가하여 100∼250mL로 -------

-------------------.

7) ∼ 9) (현행과 같음)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

1) ∼  23) (현행과 같음)

24) 3% Ogawa 배지

(현행과 같음)

-------------------- 달걀액

--------------------------

--------------------------

--------------------------

---------------.

25) ∼ 99) (현행과 같음)

4.4.2 시액

1) ∼ 7) (현행과 같음)

8) 난황액

달걀을 1시간 가량 0.1% Mercury Chloride(HgCl2)에 담근 후 꺼내 70% ethanol에 30분 가량 담궈 놓는다. 달걀을 꺼내 노른자만 취한 후 동량의 멸균생리식염수를 가하여 사용한다.

9) ∼  12) (현행과 같음)

4.5 ∼ 4.25 (현행과 같음)

4.26. 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. 살모넬라 시험법

1) ∼ 4) (생 략)

5) 결과 확인

PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되는 경우 살모넬라가 검출된 것으로 판정한다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

<신  설>

나. (생 략)

4.26. 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. 살모넬라 시험법

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 결과 확인

(1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경우 살모넬라 불검출로 판정할 수 있다. ------------------

----------------------

----------------------

--.

(2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화학적 검사 등을 통하여 살모넬라로 동정되면 검출로 판정한다.

나. (현행과 같음)

5. 원유·식육·식용란의 시험법

5.1 ∼ 5.3.1 (생  략)

5.3.2 관능검사법

가. 외부검사법

1) 외관

시료에 대해서 먼저 오염도 및 파손의 유무를 검사한다. 신선알 껍질은 광택이 없고 거칠며 오래된 계란은 표면에 광택이 있고 거칠다.

2) 진음

계란을 흔들어 볼 때 신선알은 아주 소리가 없으나 묵은 계란은 진음이 있다.

3) 투시

검란기나 검란상자에 넣고 투시하면 신선알은 내용이 균일하며 홍색을 보이고 기실이 깨끗하게 보이나 묵은 계란은 기실이 보다 넓고 내용이 어둡게 보이며 난황의 자리가 동요되고 특히 부패란은 암흑색을 보인다.

4) 자외선 조사법

계란에 자외선을 조사하면 신선란은 붉은 형광색을 나타내나 수주일 지난 계란은 푸른색의 형광을 나타낸다.

나. 내용검사법

<난황계수>

농후난백

유리판

농후난백

수양난백

수양난백

깨끗한 유리판에 계란의 내용물을 옮기고 그 색깔, 난황의 위치, 배반의 배자 발육유무 및 혈관형성 여부를 관찰한다.(이하 생략)

다. ∼ 라. (생  략)

5.3.3 (생  략)

5. 원유·식육·식용란의 시험법

5.1 ∼ 5.3.1 (현행과 같음)

5.3.2 관능검사법

가. 외부검사법

1) 외관

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-- 달걀 ------------------

-----.

2) 진음

달걀 --------------------

------------------- 달걀--

-----------.

3) 투시

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------- 달걀-------------

-------------------------

-------------------------

---------------.

4) 자외선 조사법

달걀----------------------

-------------------------

------- 달걀 -------------

----------.

나. 내용검사법

<난황계수>

농후난백

유리판

농후난백

수양난백

수양난백

----------- 달걀----------

-------------------------

-------------------------

----------.(이하 현행과 같음)

다. ∼ 라. (현행과 같음)

5.3.3 (현행과 같음)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.8 (생 략)

6.9 식육 및 알가공품

6.9.1 ∼ 6.9.2 (생 략)

6.9.3 알가공품

6.9.3.1 ∼ 6.9.3.3 (생 략)

6.9.3.4 살모넬라

제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.11 살모넬라 시험법에 따라 시험한다.

6.9.4. (생 략)

6.10 ∼ 6.14 (생 략)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 ∼ 6.8 (현행과 같음)

6.9 식육 및 알가공품

6.9.1 ∼ 6.9.2 (현행과 같음)

6.9.3 알가공품

6.9.3.1 ∼ 6.9.3.3 (현행과 같음)

6.9.3.4 살모넬라

-------------------------

4.11 살모넬라 시험법에 따라 시험한다. 다만, 액란제품의 경우 4.11 살모넬라 시험법 또는 4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법 가. 살모넬라 시험법에 따라 시험한다.

6.9.4. (현행과 같음)

6.10 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.3.1.1 (생  략)

7.3.1.2 클로르피리포스(Chlorpyrifos), 다이아지논(Diazinon), 에치온(Ethion), 페니트로치온(Fenitrothion), 메티다치온(Methidathion), 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos), 디크로보스(Dichlovos) 및 펜설포티온(Fensulfothion)

가. 시험법 적용범위

가금류고기, 가금류부산물, 가금류지방, 계란, 닭고기, 닭부산물, 돼지고기, 돼지부산물, 돼지지방, 말고기, 사슴고기, 소부산물, 소지방, 소고기, 양고기, 양부산물, 양지방, 염소고기, 염소부산물, 알, 유, 포유류고기 등에 적용한다.

나. ∼ 마. (생  략)

7.3.1.3 (생  략)

7.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)

가. 시험법 적용범위

가금류고기, 가금류부산물, 계란, 닭고기, 소고기, 알, 양고기, 우유, 유, 포유류고기, 포유류부산물 등에 적용한다.

나. ∼ 아. (생  략)

7.3.1.5 푸루실라졸(Flusilazole), 메카밤(Mecarbam), 메타크리포스(Methacrifos), 메타미도포스(Methamidophos), 모노크로토포스(Monocrotophos), 아세페이트(Acephate), 에디펜포스(Edifenfos), 이소펜포스(Isofenphos), 클로르피리포스메틸(Chlorpyifos-methyl), 터브포스(Terbufos), 트리클로폰(Trichlorfon), 펜치온(Fenthion), 펜토에이트(Phenthoate), 폭심(Phoxim) 및 포스메트(Phosmet)

가. 시험법 적용범위

가금류고기, 가금류지방, 계란, 닭고기, 닭부산물, 닭지방, 돼지고기, 돼지고기지방, 말고기, 소부산물, 소지방, 소고기, 알, 양고기, 양지방, 염소고기, 염소지방, 우유, 유 등에 적용한다.

나. ∼ 아. (생  략)

7.3.1.6 (생  략)

7.3.1.7 아바멕틴 등 27종 동시다성분 시험법

가. ∼ 라. (생  략)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 정확히 달아 50 mL 용량 원심분리관에 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. (이하 생략).

2) (생  략)

바. ∼ 아. (생  략)

7.3.2 단성분 분석법(individual residue method)

7.3.2.1 ∼ 7.3.2.4 (생  략)

7.3.2.5 싸이로마진(Cyromazine)

가. ∼ 라. (생  략)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 잘게 썰거나 갈은 후 20 g을 달아 아세토니트릴․물(9：1)의 혼합용액(동물조직의 경우) 또는 메탄올․물(9：1)의 혼합용액(계란의 경우)을 200 mL를 1분간 균질화한다(계란의 경우에는 10분간 원심분리한다). (이하 생략).

2) (생  략)

바. ∼ 아. (생  략)

7.3.2.6 ∼ 7.3.2.24 (생  략)

7.3.2.25 이미다클로프리드(Imidacloprid)

가. ∼ 라. (생  략)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 50 mL 용량의 원심분리관에 정확히 달아 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 가하여 10분간 격렬하게 진탕한 후 4℃, 4,000 G에서 10분간 원심분리한다.

2) (생  략)

바. ∼ 아. (생  략)

7.3.2.26 (생  략)

7.3.2.27 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

가. ∼ 라. (생  략)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 계란, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 정확히 달아 50 mL 용량 원심분리관에 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 가하여 1분간 격렬하게 진탕한다. (이하 생략).

2) (생  략)

바. ∼ 아. (생  략)

7.3.2.28 (생  략)

7. 식품 중 잔류농약 분석법

7.1 ∼ 7.3.1.1 (생  략)

7.3.1.2 클로르피리포스(Chlorpyrifos), 다이아지논(Diazinon), 에치온(Ethion), 페니트로치온(Fenitrothion), 메티다치온(Methidathion), 클로르펜빈포스(Chlorfenvinphos), 디크로보스(Dichlovos) 및 펜설포티온(Fensulfothion)

가. 시험법 적용범위

--------------------------

-----, 달걀 ---------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

----------------------.

나. ∼ 마. (현행과 같음)

7.3.1.3 (현행과 같음)

7.3.1.4 클로르단(Chlordane), 싸이퍼메쓰린(Cypermethrin), 델타메쓰린(Deltamethrin), 에트림포스(Etrimfos), 펜발러레이트(Fenvalerlate), 퍼메쓰린(Permethrin), 포사론(Phosalone), 피리미포스메틸(Pirimiphos methyl), 프로파자이트(Propargite), 빈클로졸린(Vinclozolin)

가. 시험법 적용범위

---------------------, 달걀, ----------------------

------------------------

----------------.

나. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.1.5 푸루실라졸(Flusilazole), 메카밤(Mecarbam), 메타크리포스(Methacrifos), 메타미도포스(Methamidophos), 모노크로토포스(Monocrotophos), 아세페이트(Acephate), 에디펜포스(Edifenfos), 이소펜포스(Isofenphos), 클로르피리포스메틸(Chlorpyifos-methyl), 터브포스(Terbufos), 트리클로폰(Trichlorfon), 펜치온(Fenthion), 펜토에이트(Phenthoate), 폭심(Phoxim) 및 포스메트(Phosmet)

가. 시험법 적용범위

------------------- 달걀, -

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-----------.

나. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.1.6 (현행과 같음)

7.3.1.7 아바멕틴 등 27종 동시다성분 시험법

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

-------------------------

-------------------------

---- 달걀, ---------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

------------------------. (이하 현행과 같음).

2) (현행과 같음)

바. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.2 단성분 분석법(individual residue method)

7.3.2.1 ∼ 7.3.2.4 (현행과 같음)

7.3.2.5 싸이로마진(Cyromazine)

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

-----------------------

-----------------------

-----------------------

-----------------------

------(달걀------)-------

-------------------(달걀

-----------------------

---). (이하 현행과 같음)

2) (현행과 같음)

바. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.2.6 ∼ 7.3.2.24 (현행과 같음)

7.3.2.25 이미다클로프리드(Imidacloprid)

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

-------------------------

-------------------------

--- 달걀------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

---------.

2) (현행과 같음)

바. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.2.26 (현행과 같음)

7.3.2.27 클로르페나피르(Chlorfenapyr)

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 시험용액의 조제

1) 추출

-------------------------

-------------------------

--- 달걀. ----------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

------------------------.

(이하 현행과 같음).

2) (현행과 같음)

바. ∼ 아. (현행과 같음)

7.3.2.28 (현행과 같음)

8. 식품 중 잔류동물용의약품 시험법

8.1 일반사항

1) ∼ 3) (생  략)

4) 검체

(생  략)

식 품	검 체	최소요구량
(생 략)
알류 계란, 오리알 메추리알 등	(생 략)	(생 략)
(생 략)

8.2 정성시험법

8.2.1 ∼ 8.2.1.3 (생  략)

8.2.2 물리·화학적 시험법

8.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

8.2.2.1.1 축산물 중 항균제 동시 다성분 시험법

1) ∼ 7) (생  략)

8) 정량시험

가) ∼ 나) (생  략)

표3. 정량이 가능한 동물용의약품 목록 (단위: mg/kg)

구분		정량한계
계열	동물용의약품	소	돼지	닭	계란	유
( 생 략)

8.2.2.1.2 ∼ 8.2.2.2 (생  략)

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.13  (생   략)

8.3.14 레바미졸(Levamisole)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 액체-액체 역추출법과 고체상 추출법으로 추출하고 칼럼을 이용하여 레바미졸을 분리한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 정량하는 방법이다.

3) 장치

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-APCI)

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：레바미졸 1,000 μg/mL을 메탄올에 녹여 영하 20℃에 보관하며 원액으로 사용한다. 실제 사용할 때는 물로 적절한 농도로 희석하여 사용한다. 내부 표준물질인 메틸레바미졸도 같은 농도로 보관하며 사용한다.

나) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 담아 내부표준물질인 메틸레바미졸의 표준용액 50 μL을 첨가한다. 15초동안 혼합한 후 20 mL 헥산：이소아밀알콜(isoamylalcohol)(95：5)용액을 가한다. 15초동안 혼합하고 10 mL 1 M 수산화나트륨용액을 가한다. 다시 15초 동안 혼합하고 시험관을 초음파장치에 5분동안 놓는다. 5,000 rpm, 10분동안 원심분리한 후에 윗부분의 유기용매층을 15 mL 0.05 M 황산 용액이 담겨져 있는 새로운 시험관에 옮겨 담는다. 다시 한번 10분 동안 원심 분리하여 유기용매에 해당하는 상층액을 제거하고 아래층의 수용액을 취한다.

나) 정제

SCX칼럼(500 mg, 10㏄, strong cation exchange, benzene sulphonic acid)을 vacuum- manifold에 설치한 후에 3 mL 메탄올, 3 mL 물과 1 mL 0.05 M 황산 용액을 미리 흘려 활성화시킨다. 액체상의 추출액을 천천히 칼럼을 통과시킨다. 통과시킨 후 다시 3 mL 물, 1 mL 0.05 M 황산 용액, 그리고 3 mL 메탄올로 씻어준다. 마지막으로 3 mL 농축된 암모니아：메탄올(25：75)로 용출시킨 다음 용출액을 60℃, 질소가스 농축으로 건조시킨다. 잔류물은 액체크로마토그래프 이동상 A 250 μL에 다시 녹여 15초동안 혼합한 후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼：LiChrospher 60 RP-select B (HP사, 4×125 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 A：7.7% 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran)과 0.3% 트리에틸아민을 포함하는 0.1 M 초산암모늄 수용액

(3) 이동상 B：아세토니트릴

프로그램단계	시간	%A	%B
1단계	0～7분	65	35
2단계	9분	50	50
3단계	9～14분	50	50
4단계	15～20분	65	35

(4) 유속：1.0 mL/분

나) 질량분석기(Mass spectrometer) 측정조건

APCI ion source를 갖춘 질량분석기를 이용한다. 처음 2분간의 액체크로마토그래프 칼럼 용출액은 버리고 2분에서 6분동안의 용출액만 질량분석기에 직접 통과되게 한다.

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 100 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 내부표준물질인 메틸레바미졸 피크의 면적 또는 높이와 비교해서 레바미졸에 대한 검량선을 작성한 후 검체 중 레바미졸의 함량을 구한다.

8. 식품 중 잔류동물용의약품 시험법

8.1 일반사항

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 검체

(현행과 같음)

식 품	검 체	최소요구량
(현행과 같음)
알류 달걀, 오리알 메추리알 등	(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)

8.2 정성시험법

8.2.1 ∼ 8.2.1.3 (현행과 같음)

8.2.2 물리·화학적 시험법

8.2.2.1 축산물 중 동물용의약품 동시 다성분 시험법

8.2.2.1.1 축산물 중 항균제 동시 다성분 시험법

1) ∼ 7) (현행과 같음)

8) 정량시험

가) ∼ 나) (현행과 같음)

표3. 정량이 가능한 동물용의약품 목록 (단위: mg/kg)

구분		정량한계
계열	동물용의약품	소	돼지	닭	달걀	유
(현행과 같음)

8.2.2.1.2 ∼ 8.2.2.2 (현행과 같음)

8.3 정량시험법

8.3.1 ∼ 8.3.13  (현행과 같음)

8.3.14 레바미졸(Levamisole), 트리클로르폰(Trichlorfon)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 10% 초산 함유 아세토니트릴(가금류고기는 아세토니트릴)로 추출한 후 아세토니트릴 포화 헥산으로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물: 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액: 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액: 각 물질의 표준원액 100 mg/L 농도로부터 메탄올로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 10% 초산(acetic acid) 함유 아세토니트릴 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 초산 100 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

바) 20 mM 개미산암모늄(ammonium formate) 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

사) 0.2% 개미산(formic acid) 함유 메탄올 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 2 mL을 넣고 메탄올로 표시선까지 채운다.

아) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 10% 초산 함유 아세토니트릴(가금류고기는 아세토니트릴) 10 mL을 가하여 15분간 진탕하고, 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 새로운 50 mL 원심분리관에 옮겨 아세토니트릴 포화헥산 10 mL울 가하여 10분간 진탕한다. 4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 하층액을 취하여 40℃ 수욕상에서 질소농축한다. 잔류물에 메탄올 용액 2 mL(소고기, 갑각류, 어류는 메탄올 용액 4 mL)을 가하여 재분산하고, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼: C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A: 20 mM 개미산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 0.2% 개미산 함유 메탄올 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4	5	95
8	5	95
10	90	10
11	90	10

(3) 유속: 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도: 40℃

(5) 주입량: 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization: ESI(Positive)

(2) Capillary temperature: 350℃

(3) Capillary voltage: 0.5 kV

(4) Collision gas: Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간(분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
레바미졸 (Levamisole)	4.34	204.3	205.2	91.11	34
				123.15	24
				178.16	20
트리클로르폰 (Trichlorfon)	4.78	257.4	258.0	79.02	28
				109.12	18
				221.09	10

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 레바미졸(4.34분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(2) 트리클로르폰(4.78분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

레바미졸: 0.01 mg/kg(소고기·돼지고기·가금류고기 ·유0.005 mg/kg)

트리클로르폰: 0.01 mg/kg(돼지고기·가금류고기·알·어류 0.005 mg/kg)

8.3.15 말라카이트 그린(Malachite Green), 크리스탈 바이올렛(Crystal Violet)

1) 시험법 적용범위

축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체를 아세토니트릴과 디클로로메탄으로 추출하고 감압농축한 후, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-dichloro-5,6-dicyano -1,4-benzoquinone, DDQ)을 이용하여 류코말라카이트 그린(Leuco -malachite green) 및 류코크리스탈 바이올렛(Leuco-crystal violet)을 각각 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛으로 산화시키고 SPE(Solid Phase Extraction) 칼럼으로 정제하여 액체크로마토그래프/가시선흡광검출기로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/가시선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 μg/mL로 하고 갈색유리병에 보관한다.

라) 표준용액：표준원액을 이동상 A에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-dichloro-5,6-dicyano -1,4-benzoquinone, DDQ) 용액：2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, DDQ) 0.227 g을 100 mL 메스플라스크에 취하고 아세토니트릴로 녹여 표시선까지 채워 10 mM DDQ 용액을 만들어 냉장 보관한다. 사용직전에 10 mM DDQ 용액을 아세토니트릴로 10배 희석하여 사용한다.

바) 25% 염산수산화아민 용액(Hydroxylamine hydrochloride, HAH)：염산수산화아민 25 g을 100 mL 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

사) 1 M p-톨루엔설폰산(p-Toluene sulfonic acid, p-TSA) 용액：p-톨루엔설폰산 9.5 g을 50 mL 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다.

아) 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액：7.7 g 초산암모늄을 1 L 메스플라스크에 취하고 물로 녹여 표시선까지 채운다. 초산 8 mL와 1 M p-톨루엔설폰산 5 mL를 넣어 pH 4.5로 조정한다. 이 액은 이동상 A 용액 조제 시 사용한다.

자) 알루미나(충진제 Alumina, 중성) 카트리지 또는 이와 동등한 것

차) 프로필설폰산(충진제 Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지 또는 이와 동등한 것

카) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 5 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액 5 mL, 25% 염산수산화아민(HAH) 용액 1 mL, 1 M p-톨루엔설폰산(p-TSA) 용액 100 μL를 넣어 30초간 강하게 균질화한다. 여기에 아세토니트릴 25 mL를 넣어 30초간 강하게 진탕하고 다시 알루미나(80~200메쉬(mesh)) 10 g을 넣어 15초간 완전히 혼합한 후 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리하고 상등액은 미리 물 50 mL와 디에틸렌글리콜 2 mL를 넣은 250 mL 분액깔때기에 옮긴다. 다시 아세토니트릴 25 mL를 넣어 1분간 강하게 진탕하고 0℃, 2,000 G에서 5분간 원심분리한 후 상등액을 앞의 액과 합한다. 디클로로메탄 25 mL를 넣고 분액깔때기를 30초간 흔들어 섞은 후 정치하여 디클로로메탄층(아래층)을 취한다. 다시 디클로로메탄 25 mL를 넣어 이 과정을 한 번 반복하고 40℃ 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴 3 mL에 녹이고 1 mM 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, DDQ) 용액 3 mL를 넣어 30분간 반응시킨다. 알루미나 카트리지(충진제 1 g) 및 프로필설폰산(Propylsulfonic acid, PRS) 카트리지(충진제 500 mg)를 미리 메탄올 5 mL와 아세토니트릴 5 mL로 활성화시키고, 프로필설폰산 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 넣은 후 알루미나 카트리지를 그 위에 연결한다. 검체를 추출한 액과 추출액이 담겨 있던 플라스크를 아세토니트릴 5 mL로 2회 세척한 액을 알루미나 카트리지에 흡착시키고 감압하여 분당 4 mL로 용출하고 알루미나 카트리지를 제거한다. 프로필설폰산 카트리지를 아세토니트릴 5 mL로 세척하고 감압하여 건조시킨 후 15 mL 원심분리관에 이동상 A 용액 4 mL로 용출한 액을 받아 이동상 A 용액으로 5 mL 눈금에 맞춘 후 0.2 μm 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A(95%)：5 mM p-톨루엔설폰산/0.1 M 초산암모늄완충용액：아세토니트릴(50:50)

(나) 이동상 B(5%)：아세토니트릴

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：618 nm(말라카이트 그린)  588 nm(크리스탈 바이올렛)

7) 정량시험

가) 시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 말라카이트 그린 및 크리스탈 바이올렛의 함량을 각각 구한다.

나) 정량한계：2 μg/kg

8) 확인시험

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)로 정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 확인한다.

가) 액체크로마토그래프 조건

(1) 칼럼：C18(2.0 × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A：0.1% 개미산 수용액

(나) 이동상 B：0.1% 개미산 메탄올용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0.0	80	20
1.5	80	20
6.0	0	100
8.0	0	100
8.5	80	20
10.0	80	20

(3) 유속：0.3 mL/분

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization：ESI(positive)

(2) Capillary Temperature：450℃

(3) Collision gas：질소

Compound	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	Collision Energy (V)
Malachite green	329	313	51
	329	208	51
	329	165	91
Crystal violet	372	356	55
	372	340	75

8.3.15. 겐티안 바이올렛(Gentian violet), 말라카이트 그린(Malachite green),메틸렌 블루(Methylene blue) 동시시험법

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 1% 초산으로 처리 후 1% 초산 함유 아세토니트릴로 추출하고 무수황산나트륨(Na2SO4)과 C18, PSA으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기(LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 각 표준품을 정밀히 달아 메탄올에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다. (류코겐티안 바이올렛은 5% DMSO 함유 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.)

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액을 100 mg/L 농도로부터 50% 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 1% 초산 수용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 초산 10 mL를 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 1% 초산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량 플라스크에 초산 10 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 10 mM 초산암모늄, 0.1% 개미산 수용액: 1,000 mL 용량플라스크에 초산암모늄 0.7708 g과 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

아) 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL를 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

자) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

각각의 시료를 균질화하여 2 g을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취하고 1% 초산 수용액 1 mL를 넣은 후 강하게 진탕한다. 1% 초산 함유 아세토니트릴 용액 10 mL을 가하고 무수황산나트륨  2 g을 넣어 5분간 진탕한 후 4,700 G, 4℃에서 10분간 원심분리 한다. 상층액을 C18 100 mg , PSA (primary secondary amine) 100 mg이 담겨진 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 5분간 진탕한다. 4,700 G, 4℃에서 10분간 원심분리 한 뒤, 추출액 중 1 mL을 취하여 0.2 μm 멤브레인 필터(PTFE membrane filter)로 여과하여 유리바이알에 담아 시험용액으로 사용한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프 측정조건

(1) 칼럼 : C18 (Imtakt Cadenza CD-C18 UP, 2.0 mmｘ 150 mm, 3 µm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 10 mM 초산 암모늄, 0.1% 개미산 함유 수용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
1	95	5
5	10	90
8	10	90
8.1	95	5
12	95	5

(3) 유속 : 0.3 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 2 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI (Positive)

(2) Capillary temperature : 300℃

(3) Collision gas : 아르곤(Ar)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
겐티안 바이올렛 (Gentian violet)	6.1	372.5	372.1	235.1	55
				340.2	55
				356.2	39
류코겐티안 바이올렛 (Leucogentian violet)	7.9	373.5	374.1	238.2	28
				239.2	35
				358.3	32
류코말라카이트 그린 (Leucomalachite green)	7.9	330.5	331.0	223.1	55
				239.2	31
				316.2	21
말라카이트 그린 (Malachite green)	5.5	329.5	329.1	165.2	55
				208.2	34
				313.2	36
메틸렌 블루 (Methylene blue)	4.6	284.4	284.0	240.1	33
				252.1	52
				268.1	34
아주르 B (Azure B)	4.4	270.4	269.9	212.1	52
				228.1	34
				254.1	33

(4) 분석대상물질의 조건

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율이 허용범위(± 20∼30%) 이내에서 일치하여야 한다주1). 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50%	± 20%
> 20%, ≤ 50%	± 25%
> 10%, ≤ 20%	± 30%

나) 표준용액 크로마토그램

그림 1. 아주르 B (4.4분), 메틸렌 블루 (4.6분), 말라카이트 그린 (5.6분), 겐티안 바이올렛 (6.1분), 류코말라카이트 그린 (7.9분), 류코겐티안 바이올렛 (7.9분) 표준품의 크로마토그램 (0.001 mg/L)

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

말라카이트 그린: 0.002 mg/kg

류코말라카이트 그린: 0.002 mg/kg

메틸렌 블루: 0.002 mg/kg

아주르 B : 0.002 mg/kg

겐티안 바이올렛: 0.002 mg/kg

류코겐티안 바이올렛: 0.002 mg/kg

8.3.16 ∼ 8.3.23.1  (생   략)

8.3.23.2 제2법

1) 시험법 적용범위

계란, 메추리알 등 알(卵)류 등에 적용한다.

2) ∼ 7) (생  략)

8.3.24 스피라마이신(Spiramycin)

8.3.24.1 제1법

1) 시험법 적용범위
우유, 산양유 등 유(乳)류 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체에서 클로로포름으로 스피라마이신을 추출하여 디올 카트리지(diol-cartridge)로 정제한 후 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 측정한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 표준원액：스피라마이신 25 mg을 5 mL 메탄올에 녹인 후 물로 25 mL까지 채운다.

나) 표준용액：물로 희석해서 사용하며 4℃에서 보관한다.

다) 디올 카트리지：Chromabond C18ec (500 mg, 45 μm particle size) 또는 이와 동등한 것

라) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

10℃에서 5분동안 원심분리(4,000 G)한 우유수층 1 mL을 유리시험관에 취하여 2 mL 클로로포름을 가하고 3분동안 50 rpm으로 혼합한 후 10℃에서 15분 동안 원심분리(4,000 G)한 다음 클로로포름층 1 mL를 취하여 정제한다.

나) 정제

디올 카트리지를 활성화시키기 위하여 1 mL 아세토니트릴:0.25% 인산(1:2), 1 mL 아세토니트릴:물(19:1), 1 mL THF, 1 mL 아세토니트릴, 1 mL 클로로포름순으로 흘려주고 위의 추출액 1 mL을 넣고 0.5 mL 클로로포름으로 씻어준 후 0.5 mL 물：아세토니트릴(19：1)로 용출한다. 이 용출액을 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：LiChrospher 100RP-18 (HP사, 4×125 mm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상：0.25% 황산:아세토니트릴(78:22)

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：UV 231 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액 50 μL를 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 스피라마이신의 함량을 구한다.

8.3.24.2 제2법

1) 시험법 적용범위

유(乳)를 제외한 축․수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 스피라마이신을 아세토니트릴로 추출하고 헥산으로 지방을 제거한 후 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)로 분석한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물：3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액：스피라마이신 표준품을 정밀히 달아 100 mL 메스플라스크에 취하고 메탄올로 표시선까지 채워 100 μg/mL 농도가 되게 한다.

라) 표준용액：표준원액을 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30)에 적당한 농도로 희석하여 사용한다.

마) 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)：1 L 메스플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 3.9 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

바) 0.025 M 인산완충용액(pH 2.5)：1 L 메스플라스크에 인산이수소나트륨․2수화물(NaH2PO4․2H2O) 2.0 g을 넣고 물 800 mL로 용해시킨 후 물로 표시선까지 채운다. pH는 인산으로 조정한다.

사) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제
균질화한 검체 1 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 아세토니트릴 20 mL를 가하여 20분간 균질화 한다. 균질액을 2,500 G에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 여과지로 여과하여 분액깔때기에 옮긴다. 위의 과정을 2회 반복하여 상층액을 합한 후 아세토니트릴포화헥산 10 mL를 넣고 진탕한다. 층이 분리될 때까지 정치하여 헥산층을 버리고 추출된 용액을 무수황산나트륨에 통과시키고 45℃ 이하의 수욕 중에서 감압하여 농축한다. 잔류물은 0.05 M 인산완충용액(pH 4.5)과 아세토니트릴 혼합액(70:30) 1 mL에 녹인 후 막 여과지(membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：C18(4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A：0.025 M 인산완충용액(pH 2.5)

(나) 이동상 B：이동상 A와 아세토니트릴 혼합액(60:40)

시간(분)	A(%)	B(%)
0.00	60	40
20.00	0	100

(3) 유속：1.0 mL/분

(4) 측정파장：232 nm

7) 정량시험

시험용액 및 표준용액을 위의 조건에 따라 액체크로마토그래프에 주입한다. 얻어진 각 피크의 머무름 시간을 비교하여 피크의 높이 또는 면적으로 검량선을 작성하여 검체 중 스피라마이신의 함량을 각각 구한다.

8.3.16 ∼ 8.3.23.1  (현행과 같음)

8.3.23.2 제2법

1) 시험법 적용범위

달걀, ---------------------

---------.

2) ∼ 7) (현행과 같음)

8.3.24 스피라마이신(Spiramycin), 타일로신(Tylosin), 키타사마이신(Kitasamycin)

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 메탄올/아세토니트릴(25:75, v/v)용액(닭고기, 돼지고기는 100% 아세토니트릴)으로 추출하고 아세토니트릴 포화헥산으로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액 100 mg/L 농도로부터 메탄올로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 아세토니트릴로 표시선까지 채운다.

사) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

가) 가금류고기와 돼지고기를 제외한 식품

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. 메탄올/아세토니트릴(25:75, v/v)용액 10 mL를 가하여 30초간 진탕하고 10분간 초음파 처리한 후 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 취하여 50 mL 원심분리관에 옮기고 아세토니트릴 포화헥산 10 mL를 가한다. 10분간 진탕한 후 하층액을 취하여 15 mL 원심분리관으로 옮긴다. 이를 40℃ 수욕상에서 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) 가금류고기와 돼지고기

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취한다. ⓐ 100% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 10분간 진탕한 후, 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리하여 상층액을 취한다. ⓑ 100% 아세토니트릴 용액 10 mL를 가하여 10분간 진탕한 후, 상온에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 무수황산마그네슘 1 g을 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 ⓐ와 ⓑ의 상층액을 합한다. 아세토니트릴 포화 헥산 10 mL을 가한 후 10분간 진탕하고 4,700 G에서 10분간 원심분리한다. 상층액(헥산층)을 제거한다.  하층(아세토니트릴층)의 약 1/2을 새로운 15 mL 원심분리관으로 옮긴 후 40℃ 수욕상에서 2.5 mL가 될 때까지 질소농축한 다음 나머지 하층을 옮겨 시료용액이 5 mL가 될 때까지 질소농축 한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xbridge, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(나) 이동상 B : 0.1% 개미산 함유 아세토니트릴 용액

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	85	15
11	50	50
11.1	85	15
16	85	15

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Positive)

(2) Capillary temperature : 350℃

(3) Capillary voltage : 3.8 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피라마이신 (Spiramycin)	4.46	842.5	843.9	83.0	50
				141.9	28
				174.0	30
타일로신 (Tylosin)	7.93	915.5	916.8	88.1	70
				101.1	45
				174.1	35
키타사마이신 (Kitasamycin)	8.63	771.4	772.6	83.0	50
				109.1	40
				174.1	30

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 스피라마이신(4.71분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

(2) 타일로신(7.93분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

(3) 키타사마이신(8.63분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample) 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 시험용액 농축액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

스피라마이신: 0.05 mg/kg(알 0.005 mg/kg)

타일로신: 0.001 mg/kg(어류 0.005 mg/kg, 소고기․알 0.05 mg/kg)

키타사마이신: 0.005 mg/kg(소고기․알․갑각류 0.05 mg/kg)

8.3.25 ∼ 8.3.47  (생   략)

8.3.48 클로산텔(Closantel)

1) 시험법 적용범위

축산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

근육 등 가식부위에 존재하는 클로산텔을 아세토니트릴로 추출하고 추출액을 C18 카트리지에 적용하여 정제한 다음 아세토니트릴로 용출하여 액체크로마토그래프에서 역상칼럼으로 분리하고 자외선흡광검출기(UV photometric detector)를 이용하여 정량한다.

3) 장치

액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)

4) 시약 및 시액

가) 표준용액：클로산텔을 메탄올에 녹여 10 ppm으로 조정하여 표준용액으로 사용한다.

나) 기타시약：특급

5) 시험용액의 조제

가) 추출

검체 5 g을 원심분리관에 취하여 아세토니트릴 30 mL을 가한다. 약 30초간 강렬하게 흔든 다음 진탕기에서 15분 가량 진탕한다(300회/분). 원심분리한 다음 상층액을 100 mL 농축플라스크에 취한다. 처음의 원심분리관에 다시 아세토니트릴 10 mL을 가하여 잘 혼합한 후 진탕기에서 약 10분간 진탕한 다음 원심분리하여 상층액을 농축플라스크에 합한다. 진공증발기에서 약 2 mL가 될 때까지 증발건조한 다음 6 mL 원심분리관에 취한다. 농축플라스크에 아세토니트릴 1 mL씩 3회 가하여 잘 닦은 다음 원심분리관에 합하여 증발건조기에서 3 mL가 되도록 증발건조한다. 0.4% 개미산 3 mL을 가하여 혼합한 후 원심분리한다.

나) 정제

역상 C18 카트리지에 메탄올 2 mL과 물 3 mL을 가하여 칼럼을 활성화시킨다. 검체추출과정에서 얻어진 상층액을 칼럼에 가한 후 통과시킨 다음 칼럼을 약 3분간 흡인하여 충분히 말린다. 검체가 담긴 원심분리관에 아세토니트릴 3 mL를 가하여 혼합하여, 원심분리 과정을 거친 후 칼럼에 가한다. 용출액을 12 mL 원심분리관에 취한다. 다시 원심분리관에 아세토니트릴 3 mL를 가하여 혼합하여 원심분리한 후 칼럼에 가하여 용출하여 합한다. Speed Vac(40℃, 260 mbar)에서 건조한 다음 잔류물에 메탄올 500 μL를 가하여 녹인후 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 측정조건

(1) 칼럼：LiChroCART 250-4 LiChrospher 100RP-18 endcapped(4×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 칼럼온도：40℃

(3) 이동상 A：초산완충용액 pH 5.0

(4) 이동상 B：아세토니트릴

시간(분)	0	8.5	15	16
이동상농도(% A)	80	10	10	80
이동상농도(% B)	20	90	90	20

(5) 유속：1 mL/분

(6) 측정파장：UV 370 nm

8.3.25 ∼ 8.3.47  (현행과 같음)

8.3.48. 클로산텔(Closantel), 클로술론(Clorsulon), 니트록시닐 (Nitroxynil) 동시시험법

1) 시험법 적용범위

축·수산물 등에 적용한다.

2) 분석원리

검체 중 분석대상물질을 개미산 암모늄이 포함된 아세토니트릴과 물 혼합용액(5:1, v/v)으로 추출하고 MgSO4와 PSA로 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

3) 측정기기

액체크로마토그래프/질량분석기 (LC-MS/MS)

4) 시약 및 시액

가) 용매：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

나) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

다) 표준원액 : 100 mL 용량플라스크에 표준품을 각각 정밀히 달아 아세토니트릴에 녹여 200 mg/L가 되게 한다. 조제된 표준원액은 냉동 보관한다.

라) 혼합표준용액 : 각 물질의 표준원액 200 mg/L 농도로부터 아세토니트릴로 희석하여 필요한 농도가 되게 한다.

마) 200 mM 개미산 암모늄: 100mL 용량플라스크에 개미산 암모늄 1.26 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

바) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

5) 시험용액의 조제

균질화한 검체 2 g을 50 mL 원심분리관에 취하고 200 mM 개미산암모늄 0.1 mL과 물 2 mL을 가하여 1분간 균질화한다. 아세토니트릴 10 mL을 가하여 10분간 진탕하고 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한 후, 상층액을 취한다. 900 mg MgSO4와 150 mg PSA를 미리 넣어 둔 50 mL 원심분리관에 상층액을 합한 후 10분간 진탕하고 -4℃에서 4,700 G로 10분간 원심분리한다. 상층액을 15 mL 원심분리관에 취한 뒤, 50℃ 수욕상에서 4 mL가 되도록 질소농축한다. 농축액을 1분간 진탕한 후, 0.2 μm 멤브레인 필터(PVDF membrane filter)로 여과하여 시험용액으로 한다.

6) 시험조작

가) 액체크로마토그래프의 측정조건

(1) 칼럼 : C18(Xselect, 2.1 mm ｘ 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상

(가) 이동상 A : 5% 초산 함유 10 mM 초산암모늄 용액

(나) 이동상 B : 아세토니트릴

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	90	10
2.1	90	10
4.	5	95
8	5	95
10	90	10

(3) 유속 : 0.25 mL/분

(4) 칼럼온도 : 40℃

(5) 주입량 : 5 μL

나) 질량분석기 조건

(1) Ionization : ESI(Negative)

(2) Capillary temperature : 500℃

(3) Capillary voltage : 1.5 kV

(4) Collision gas : Ar(아르곤)

(5) 분석대상 및 개별 조건(MRM 조건)

물질명 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
클로산텔 (Closantel)	5.92	663.1	661	127	-50
				279	-42
				344	-34
클로술론 (Clorsulon)	4.73	380.6	378	142	-26
				242	-22
				342	-10
니트록시닐 (Nitroxynil)	4.77	290.0	289	116	-34
				127	-26
				162	-20

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

7) 정성 및 확인시험

위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 비교하여 일치하여야 한다. 또한 표준용액과 시험용액의 선구이온(Precursor ion) 및 생성이온(Product ion)이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(Ion ratio)을 비교하여 그 비율은 주1)과 일치하여야 한다. 확인시험의 경우, 음성검체(Blank sample)에 측정물질을 첨가한 것을 검체와 동일하게 전처리하여 얻은 표준용액으로서 비교한다.

주1. 생성이온간 반응세기의 비율 허용범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위
> 50 %	≤ 20 %
> 20 %, ≤ 50 %	≤ 25 %
> 10 %, ≤ 20 %	≤ 30 %

나) 표준품 크로마토그램

(1) 클로산텔(5.92분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(2) 클로술론(4.73분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

(3) 니트록시닐(4.77분)

소고기	돼지고기
닭고기	달걀
우유	새우
넙치	장어

8) 정량시험

가) 정량

조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위하여 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성검체(Blank sample)를 2 g씩 준비한 후 공시료를 포함하여 5개 이상의 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다. 확인시험과 똑같은 조건에서 공시료를 포함하여 각 농도별 첨가시료에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 크로마토그램으로부터 정량이온(Quantitative ion)의 각 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 산출된 시험용액 중 검출농도, 검체량과 최종 시험용액의 부피를 고려하여 정량한다.

나) 정량한계

클로산텔 : 0.01 mg/kg

클로술론 : 0.01 mg/kg

니트록시닐 : 0.01 mg/kg

8.3.49 타일로신(Tylosin)

8.3.50 트리클로르폰(Trichlorfon, Metrifonate)

8.3.51 ∼ 8.3.54  (생   략)

8.3.55 키타사마이신(Kitasamycin)

8.3.56 ∼ 8.3.68  (생   략)

8.3.69 니트록시닐(Nitroxynil), 클로술론(Clorsulon)

8.3.70 ∼ 8.3.119 (생  략)

8.3.120

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험조작

가) ∼ 다) (생  략)

라) 표준품의 크로마토그램

닭고기 (7.15분)

계란 (7.15분)

그림. 표준용액의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

마) (생  략)

7) ∼ 8) (생  략)

<삭   제>

<삭   제>

8.3.49 ∼ 8.3.52  (현행 8.3.51 ∼ 8.3.54과 같음)

<삭   제>

8.3.53 ∼ 8.3.65  (현행 8.3.56 ∼ 8.3.68과 같음)

<삭   제>

8.3.66 ∼ 8.3.115 (현행 8.3.70 ∼ 8.3.119와 같음)

8.3.116

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험조작

가) ∼ 다) (현행과 같음)

라) 표준품의 크로마토그램

닭고기 (7.15분)

달걀 (7.15분)

그림. 표준용액의 크로마토그램(각 0.01 mg/L)

마) (현행과 같음)

7) ∼ 8) (현행과 같음)

9. 식품 중 유해물질

9.1 ∼ 9.15 (생  략)

9. 식품 중 유해물질

9.1 ∼ 9.15 (현행과 같음)

9.16 우루시올 확인시험

가. 시험법 적용범위
옻나무를 원료로 사용한 식품에 적용한다.

나. 분석원리
식품 내에 존재하는 우루시올을 에탄올로 교반추출한 후 액체크로마토그래프를 이용하여 분석한다. 또한, 액체크로마토그래프-질량분석기를 이용하여 우루시올 성분을 재확인한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(UV photometric detector) 및 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)를 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 용매：특급 또는 이와 동등한 것

2) 물：증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액：우루시올(I, II) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 μg/mL가 되도록 한다.

4) 표준용액：표준원액을 각각 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

<신  설>

5) 기타시약：특급 또는 이와 동등한 것

<신  설>

<신  설>

<신  설>

마. 시험용액의 조제

검체 20 g을 취하여 에탄올(95%) 100 mL를 첨가한 후 3시간 이상 교반추출한다. 이를 부흐너깔때기로 흡인여과 후 에탄올로 잔사(residue) 및 용기를 세척하여 여액을 모아 40℃ 이하의 수욕 중에서 감압농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 2 mL에 녹여 0.2 μm 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.1×100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

- A : 0.1% 트리플루오로초산 용액

- B : 아세토니트릴

Time	A(%)	B(%)
0.0	90	10
5.0	90	10
20.0	5	95
27.0	5	95
29.0	90	10
30.0	90	10

다) 유속：0.2 mL/min

라) 검출기：자외선흡광검출기

(UV photometric detector)(276 nm)

마) 컬럼온도：60℃

바) 시험용액주입량：10 µL

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

<신  설>

3) 표준품의 크로마토그램

<신  설>

4) 정량한계 : 1.0 mg/kg(우루시올 I과 II의 합으로써)

<신  설>

사. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 우루시올 함량은 I 및 II의 합으로 계산한다.

1) 계산

우루시올 함량(mg/kg) = C × V/M × D

C : 검량선에서 구한 우루시올 I 및 II의 각 농도(μg/mL)

V : 최종부피(mL)

M : 시료 채취량(g)

D : 희석배수

아. 확인시험

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 측정조건

가) 칼럼 : C18(2×100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

- A : 0.1% 포름산 용액

- B : 메탄올

Time	A(%)	B(%)
0.0	70	30
1.1	70	30
5.0	0	100
13.0	0	100
13.1	70	30
20.0	70	30

다) 유속：0.2 mL/min

라) 이온화모드 : ESI(negative)

마) 컬럼온도：40℃

바) 시험용액주입량：2 µL

사) 분자량 범위 : 100∼500 m/z

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

성분	머무름 시간(분)	Precursor ion(m/z)	Fragment ion(m/z)	Collision energy(eV)
우루시올 I	10.6	319.2	121.9	44
			135.1	54
우루시올 II	11.7	347.2	121.9	48
			134.9	54

나) 표준품의 크로마토그램

우루시올 I

319.2→121.9

우루시올 I

319.2→135.1

우루시올 II

347.2→121.9

우루시올 II

347.2→134.9

9.17 (생  략)

9.16 우루시올

가. 시험법 적용범위
(현행과 같음)

나. 분석원리
식품 내에 존재하는 우루시올을 아세토니트릴로 추출한 후 dSPE

(dispersive SPE)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액 : 우루시올 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 μg/mL가 되게 한 다음 -70°C에서 차광 보관한다.

4) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 조제한 용액은 물질의 안정성 문제로 -70°C에서 30일 동안 차광 보관 및 사용한다.

표1. 우루시올 표준품 정보

성분명	CAS No.	분자식	화학구조
우루시올 Ⅰ (C15:0)	492-89-7	C21H36O2
우루시올 Ⅱ (C15:1)	35237-02-6	C21H34O2
우루시올 Ⅲ (C15:2)	83258-37-1	C21H32O2
우루시올 Ⅴ (C15:3)	83543-37-7	C21H30O2
라콜 (C17:0)	5862-27-1	C23H40O2

5) 추출용액(50 mM 아세트산 암모늄(ammonium acetate) 버퍼 (pH 4.1) + 0.1 M EDTA) : 500 mL 용량플라스크에 아세트산 암모늄 1,927 mg을 적당량의 물에 녹여 표시선을 맞추고(정용하고) pH가 4 정도 되는지 확인한다. 여기에 EDTA 14.6 g을 넣고 충분히 녹을 때까지 1시간 초음파 처리한다. EDTA가 완전히 녹지 않으므로 상온에서 보관하며 상층액만 사용하고, 필요하다면 원심분리 후 사용한다.

6) 정제용 시약(dSPE 카트리지) : QuEChERS 정제용 또는 이와 동등한 것

가) 물추출물 등 액상검체 : PSA(Primary secondary amine):C18:황산마그네슘이 1:1:6의 비율(6.25 mg:6.25 mg:37.5 mg)로 혼합된 시약

나) 장류 등 고상검체 : PSA:황산마그네슘이 1:6(50 mg:300 mg)의 비율로 혼합된 시약

7) 0.1% 개미산(Formic acid) 용액 : 1,000 mL 용량플라스크에 개미산 1 mL을 넣고 물로 표시선까지 채운다(정용한다).

8) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

균질화된 시료 2g(된장의 경우 1g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하고 추출용액 5 mL를 가한 후 교반기(vortex mixer)로 1분간 혼합한다. 아세토니트릴 5 mL와 염화나트륨 1 g을 가하고, 교반기로 1분간 추출한 다음, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제

15 mL 원심분리관에 정제용 시약(dSPE 카트리지) 50 mg(액상검체) 또는 350 mg(고상검체)을 취하고 분리된 상층액 전량을 넣는다. 교반기로 1분간 혼합하고, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한 뒤, 상층액 전량을 새로운 15 mL 원심분리관에 옮긴다. 40°C 수용액상에서 질소건고한 후, 메탄올 1 mL를 가하고 교반기로 1분간 혼합한 후 5분간 초음파 처리하여 용해시킨다. 이 액을 4℃, 13,500 G에서 3분간 원심분리한 후, 상층액을 최종 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 측정조건

가) 칼럼 : C18(2.0×150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼온도 : 40°C

다) 이동상

(1) 이동상 A : 0.1% 개미산 용액

(2) 이동상 B : 메탄올

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상A(%)	이동상B(%)
0.0	20	80
1.0	20	80
3.0	0	100
10.0	0	100
10.5	20	80
15	20	80

라) 유속: 0.25 mL/min

마) 주입량 : 10 μL

<삭 제>

2) 질량분석기 측정조건

가) Ionization : ESI negative-ion mode

나) Ion source temperature : 350℃

다) Ion spray voltage: -4.5 kV

라) Curtain gas : 6 psi

마) Collision gas(N2) : 10 psi

바) Ion source gas 1 : 10 psi

사) Ion source gas 2 : 20 psi

표2. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 MRM 조건

연번	성분명 (Compound)	머무름시간 (분)	분자량 (g/mol)	선구이온 (Precursor ion,m/z)	생성이온 (Product ion,m/z)	충돌에너지 (Collision Energy, eV)
1	Urushiol Ⅰ	8.98	320.5	319.1	122.2 136.1	-48 -46
2	Urushiol Ⅱ	8.41	318.5	317.1	122.0 135.0	-42 -56
3	Urushiol Ⅲ	8.00	316.5	315.3	122.0 135.2	-44 -50
4	Urushiol Ⅴ	7.65	314.5	313.3	135.1 122.0	-48 -44
5	Laccol	9.82	348.6	347.4	121.9 135.0	-52 -60

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며 그 외 이온들은 정성이온임

※ 각 생성이온(Product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함

3) 검량선 작성

우루시올의 특성(산화반응에 따른 폴리머 형성 등)을 고려하여 다음의 Matrix- matched standard(MMS)조제법에 따라 처리한 혼합표준용액을 농도별로 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 주입한다. 얻어진 크로마토그램 상의 정량이온의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(Matrix-matched calibration curve)을 작성한다.

가) Matrix-matched standard(MMS) 조제법

음성검체(Blank sample) 2g(된장의 경우 1g)을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하고 추출용액 5 mL를 가한 후 교반기(vortex mixer)로 1분간 혼합한다. 아세토니트릴 5 mL과 염화나트륨 1 g을 첨가하고, 교반기로 1분간 추출한 다음, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한다. 15 mL 원심분리관에 정제용 시약(dSPE 카트리지) 50 mg(액상검체) 또는 350 mg(고상검체)을 취하고 분리된 상층액 전량을 넣는다. 교반기로 1분간 혼합하고, 4℃, 2,700 G에서 10분간 원심분리한 뒤, 상층액 전량을 새로운 15 mL 원심분리관에 옮긴다. 각 검량선 농도[표 3]에 맞는 혼합표준용액 0.2 mL(된장의 경우 0.1mL)을 가하고, 40°C 수용액상에서 질소건고한다. 메탄올 1 mL을 가하고 교반기로 1분간 혼합한 후 5분간 초음파 처리하여 용해시킨다. 이 액을 4℃, 13,500 G에서 3분간 원심분리한 후, 상층액을 최종 표준용액으로 한다.

표3. Matrix-matched standard 조제에 사용한 표준용액 농도 및 부피

검량선 농도	혼합표준용액 농도	첨가 부피
10 ng/mL	100 ng/mL	0.2 mL (된장의 경우 0.1mL)
20 ng/mL	200 ng/mL
30 ng/mL	300 ng/mL
40 ng/mL	400 ng/mL
50 ng/mL	500 ng/mL

4) 혼합표준용액의 크로마토그램

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준용액의 크로마토그램

5) 정량한계는 우루시올Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ, 라콜 각각에 대하여 10 μg/kg을 적용한다.

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 표준용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온으로 시험용액의 우루시올을 확인한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액 크로마토그램 상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 정량이온에 대한 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 단, 이때 우루시올 함량은 우루시올Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ, 라콜의 합으로 한다.

우루시올의 함량(μg/kg)	=	C	x	D

1) 계산

C  : 검량선에서 구한 우루시올의 함량(μg/kg)

D  : 희석배수

<삭  제>

9.17 (현행과 같음)

10. 식품표시 관련 시험법

10.1 유전자변형식품의 시험법

(생  략)

10.1.1 ∼ 10.1.4 (생 략)

10.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (생  략)

다. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (생  략)

표 1. 유전자변형 콩의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
(생 략)

<신 설>

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 hmg (79 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NOS (151 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	Bt11 (127 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	GA21 (133 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	T25 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON810 (113 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NK603 (143 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NK603 (108 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	TC1507 (103 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	TC1507 (58 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON863 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON863 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON88017 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON88017 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR604 (142 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR604 (76 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON89034 (112 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR162 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR162 (92 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (147 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (80 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	3272 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	3272 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87460 (85 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87460 (82 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	5307 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	5307 (107 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87427 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87427 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (144 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (98 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP004114-3 (118 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP004114-3 (90 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87411 (112 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87411 (109 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON 87419 (184 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87419 (97bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON 87403 (175 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87403 (88bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MZHG0JG (154 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MZHG0JG (81 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>

<신 설>

표 3. ∼ 표 4. (생  략)

라. 시험조작(PCR)

(본문 생략)

① 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인된 경우 : RRS,　MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, SYHTOH2,  DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, Bt11, GA21, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, DP098140-6, 3272, MON87460, 5307, MON87427, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419, MON87403, MZHG0JG(이상 옥수수)

② 35S 프로모터 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP098140-6, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419, MON87403(이상 옥수수)

③ NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), GA21, MIR604, MIR162, DP098140-6, 3272, 5307, DAS-40278-9, MON87419, MON87403(이상 옥수수)

④ 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인되지 않은 경우 : MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS-81419-2, MON87751(이상 콩), DP098140-6, DAS-40278-9, MON87419,  MON87403(이상 옥수수)

1) ∼ 3) (생  략)

마. ∼ 바. (생  략)

10.1.6 ∼ 10.1.10 (생  략)

10.1.11 유전자변형 면화

면화씨(cotton seed) 또는 그 가공식품에 대하여 실시간 PCR 장치를 사용하여 해충 저항성 또는 제초제 내성 유전자변형 면화를 검출하기 위한 정성분석법이다.

가. (생  략)

나. 시약 및 시액

1) (생  략)

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 9의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 조성은 표 10, 11, 12, 13, 14, 15와 같다.(이하 생략)

표 9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	<신설>
내재성 유전자	면화 (76 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
구조 유전자	531 * (72 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	1445 (87 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	15985 (82 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	MON88913 (94 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	5'-FAM-AAC TAT CAG TGT TTG ACT ACA T- MGBNFQ**-3'	<신설>
	LLCotton25 (79 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	281/3006 (111 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	GHB614 (120 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	T304-40 (79 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	GHB119 (90 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	COT102 (101 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	MON88701 (84 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	DAS81910-7 (120 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>

<신 설>

*  (생  략)

** (생  략)

표 10. 면화의 내재성 유전자와 면화 531, 1445, 15985 검사용 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	각 150 nM	각 0.375
Probe (5 μM)	50 nM	0.25
주형 DNA(50 ng/μL)	100 ng	2
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	9.5
전체량		25

표 11. ∼ 표 15. (생 략)

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석)
실시간 PCR은 기기에 플레이트나 캐필러리를 장착하고 분석 프로그램을 작동시켜 시료의 정보를 입력한 후 장치의 덮개 온도(cover temperature)가 105℃ 정도인 것이 확인되면 반응을 개시한다. 96 웰(well) 플레이트 방식의 PCR 반응 조건은 표 16, 17과 같으며, PCR 반응 종료 후 실험결과를 해석한다. PCR 반응 조건은 사용하는 실시간 PCR 기기에 따라 최적 조건으로 변형하여 사용할 수 있으며, 기기 제조사에 별도 문의하여 적용한다.

표 16. ∼ 표 17. (생 략)

라. 분석결과의 판정

(생  략)(표 18).

표 18. (생 략)

<신  설>

10.1.12 유전자변형 카놀라

(생 략)

가. (생 략)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

유전자변형 카놀라 검출에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)는 표 19와 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브(probe)를 사용할 수도 있다.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 19의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 20, 21, 22와 같다. (이하 생략)

표 19. 유전자변형 카놀라의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	<신설>
내재성 유전자	카놀라 (101 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
구조 유전자	T45 (123 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	GT73 (108 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	Ms8 (130 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	Rf3 (139 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	MON88302 (101 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	DP-073496-4 (84 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>

<신 설>

표 20. 카놀라 내재유전자 검사용 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	각 200 nM	각 0.5
Probe (10 μM)	200 nM	0.5
주형 DNA(50 ng/μL)	100 ng	2
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	9
전체량		25

표 21. 카놀라 T45, Ms8, Rf3 검사용 PCR 반응액 조성

(생 략)

표 22. 카놀라 GT73, MON88302, DP-073496-4 검사용 PCR 반응액 조성

(생 략)

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성 및 정량분석)

카놀라 PCR 반응 조건은 표 23과 같으며, 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석) 및 10.1.6 정량시험에 따른다.

표 23. (생 략)

라. 분석결과의 판정

10.1.11 유전자변형 면화 라. 분석결과의 판정 및 10.1.6 정량시험 사. 결과의 판정에 따른다.

10.1.13 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)

사탕무, 알팔파(alfalfa) 또는 그 가공식품에 대하여 실시간 PCR 장치를 사용하여 제초제 내성 유전자변형 사탕무와 알팔파(alfalfa)를 검출하기 위한 정성분석방법이다.

가. (생 략)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

유전자변형 사탕무와 알팔파(alfalfa) 검출에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)는 표 24와 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브(probe)를 사용할 수도 있다.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 24의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 25, 26, 27, 28, 29, 30과 같다. (이하 생략)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	<신설>
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	알팔파 (127 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	알팔파 J101 (121 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	알팔파 J163 (105 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	알팔파 KK179 (88 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>

표 24. 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)

<신 설>

표 25. 사탕무 내재유전자 검사용 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	각 150 nM	각 0.375
Probe (10 μM)	100 nM	0.25
주형 DNA(25 ng/μL)	50 ng	2
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	9.5
전체량		25

표 26. (생  략)

표 27. 알팔파(alfalfa) 내재유전자 검사용 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	각 450 nM	각 1.125
Probe (10 μM)	210 nM	0.525
주형 DNA(50 ng/μL)	100 ng	2
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가	7.725
전체량		25

<신 설>

표 28. ∼ 표 30. (생  략)

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석)

사탕무의 PCR 반응조건은 표 31과 같고 알팔파(alfalfa)의 PCR 반응조건은 표 32와 같으며, 그 외 사항은 10.1.11 유전자변형 면화 다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성분석)에 따른다.

표 31. ∼ 표 32. (생  략)

라. 분석결과의 판정

10.1.11 유전자변형 면화 라. 분석결과의 판정에 따른다. 다만, 사탕무의 경우 PCR cycle 수가 50이므로 모든 NTC의 Ct 값이 50이어야 하며, 추출 DNA 시료액 별로 3 반복 시험한 결과, 2개 이상의 웰(well)에서 Ct 값이 50 미만이면서 지수함수적인 증폭이 확인되는 경우 해당 DNA 시료액이 양성이라고 판정한다.

10.1.14 미승인 유전자변형 밀

(생  략)

가. (생  략)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

미승인 유전자변형 밀 검출에 사용하는 프라이머와 프로브(probe)는 표 33과 같으며, 이와 동등한 결과를 얻을 수 있는 프라이머와 프로브(probe)를 사용할 수도 있다.

2) 반응액의 조제

표 33의 프라이머와 프로브(probe)를 사용하면서 PCR 반응액의 총량을 25 μL로 할 경우 PCR 반응액 조성은 표 34〜36과 같다. 다만, PCR 반응액 조성은 프라이머와 프로브(probe) 또는 PCR 기기에 따라 다를 수 있으므로 시약이나 기기의 사용 매뉴얼을 참고하여 적용한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	<신설>
내재성유전자	밀 (102 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	(94 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
구조유전자	M71800 (156 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
	(90 bp)	(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>
		(생 략)	(생 략)	<신설>

표 33. 미승인 유전자변형 밀 검사용 프라이머와 프로브(probe)

표 34. ∼ 표 36. (생 략)

다. 시험 조작

미승인 유전자변형 밀 검사를 위한 PCR 반응조건은 표 37∼38과 같다.

표 37. ∼ 표 38. (생  략)

라. (생  략)

10.2 ∼ 10.5 (생  략)

11. ∼ 12. (생  략)

10. 식품표시 관련 시험법

10.1 유전자변형식품의 시험법

(현행과 같음)

10.1.1 ∼ 10.1.4 (현행과 같음)

10.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 시약 및 시액

1) ∼ 2) (현행과 같음)

표 1. 유전자변형 콩의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
(현행과 같음)

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 hmg (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NOS (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	Bt11 (127 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GA21 (133 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	T25 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON810 (113 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (143 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (108 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (103 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (58 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (142 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (76 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON89034 (112 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (92 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (147 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (80 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (85 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (82 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (107 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (144 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (98 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP004114-3 (118 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP004114-3 (90 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87411 (112 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87411 (109 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON 87419 (184 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87419 (97bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON 87403 (175 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87403 (88bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MZHG0JG (154 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MZHG0JG (81 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	VCO-01981-5 (85 bp)	VCO-01981-5 primer F	5'-CCA CTG AAC GTC ACC AAG AAG A-3'
		VCO-01981-5 primer R	5'-GCC GCT ACT CGA GGG ATT TA-3'
	VCO-01981-5 (85 bp)	VCO-01981-5 primer F	5'-CCA CTG AAC GTC ACC AAG AAG A-3'
		VCO-01981-5 primer R	5'-GCC GCT ACT CGA GGG ATT TA-3'
		VCO-01981-5 probe	5'-FAM-CAG TAC TCA AAC ACT GAT AG-MGB-3'

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 3. ∼ 표 4. (현행과 같음)

라. 시험조작(PCR)

(본문 생략)

① ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

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----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

------------- MZHG0JG, VCO01981-5(이상 옥수수)

② ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)

③ ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

------------ MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)

④ ----------------------

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----------------------

----------------------

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----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

MON87403, VCO01981-5(이상 옥수수)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

마. ∼ 바. (현행과 같음)

10.1.6 ∼ 10.1.10 (현행과 같음)

10.1.11 유전자변형 면화

-------------------------

-------------------------

-------- 유전자변형 면화를 검출하기 위한 정성 및 정량분석법--------------------.

가. (현행과 같음)

나. 시약 및 시액

1) (현행과 같음)

2) ----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

------- 표 10과 -------

-----. (이하 현행과 같음)

표 9. 유전자변형 면화의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성 유전자	면화 (76 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	50
구조 유전자	531 1) (72 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	50
	1445 (87 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	50
	15985 (82 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	50
	MON88913 (94 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	5'-FAM-AAC TAT CAG TGT TTG ACT ACA T- MGBNFQ 2)-3'	100
	LLCotton25 (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	281/3006 (111 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	350
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	175
	GHB614 (120 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	T304-40 (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	GHB119 (90 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	COT102 (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	600
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	600
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
	MON88701 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	300
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	300
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	250
	DAS81910-7 (120 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	300
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	300
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

1)  (현행과 같음)

2)  (현행과 같음)

표 10. 유전자변형 면화 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	150 nM ~ 600 nM	0.375~1.5
Probe (10 μM)	50 nM ~ 350 nM	0.125~0.875
주형 DNA (20 ng/μL)	100 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1) Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

<삭  제>

다. ---------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

표11, 12와 -------------

-----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

----------------------

---------------------.

표 11. ∼ 표 12. (현행 표 16. ∼ 표 17.과 같음)

라. 정성분석--------

(현행과 같음)(표 13).

표 13. (현행 표 18.과 같음)

마. 실시간 PCR 장치에 의한 정량분석 및 분석결과의 판정

유전자변형 면화의 혼입 판별을 위한 정량분석 및 분석결과의 판정은 10.1.6 정량시험에 따른다.

10.1.12 유전자변형 카놀라

(현행과 같음)

가. (현행과 같음)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

-----------------------

-----------------------

-------- 표 14  --------

-----------------------

-----------------------

---------.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 14------------------

-----------------------

-----------------------

-------------------- 표

15 ----. (이하 현행과 같음)

표 14. 유전자변형 카놀라의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성 유전자	카놀라 (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
구조 유전자	T45 (123 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	GT73 (108 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	50
	Ms8 (130 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	Rf3 (139 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	MON88302 (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	DP-073496-4 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	600
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	600
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	250

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 15. 유전자변형 카놀라 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머(각 10 μM)	150 nM ~ 600 nM	0.375~1.5
Probe (10 μM)	50 nM ~ 250 nM	0.125~0.625
주형 DNA (40 ng/μL)	200 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1) Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

<삭  제>

<삭  제>

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성 및 정량분석)

------------------- 표 16

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

--------.

표 16. (현행 표 23과 같음)

라. 분석결과의 판정

유전자변형 카놀라에 대한 분석결과의 판정은 10.1.11 유전자변형 면화 라. 정성분석결과의 판정 및 10.1.6 정량시험 사. 결과의 판정에 따른다

10.1.13 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)

-------------------------

-------------------------

------------- 유전자변형 사탕무와 알팔파를 검출하기 위한 정성 및 정량---------------

--------.

가. (현행과 같음)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

-----------------------

-----------------------

----------------- 표17과

-----------------------

-----------------------

---------------------.

2) 실시간 PCR용 반응액의 조제

표 17 ------------------

-----------------------

-----------------------

-------------------- 표 18, 19와 --------. (이하 현행과 같음)

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성유전자	사탕무 (121 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	150
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	100
	알팔파 (127 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	210
구조유전자	사탕무 H7-1 (110 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	알팔파 J101 (121 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	600
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	200
	알팔파 J163 (105 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	180
	알팔파 KK179 (88 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	450
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	100

표 17. 유전자변형 사탕무, 알팔파(alfalfa)의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브(probe)

* 후대교배종은 후대교배종을 구성하는 이벤트의 프라이머/프로브를 사용하여 검사한다.

표 18.  유전자변형 사탕무 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머 (각 10 μM)	150 nM ~ 400 nM	0.375 ~ 1
Probe (10 μM)	100 nM ~ 200 nM	0.25 ~ 0.5
주형 DNA (10 ng/μL)	50 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1) Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

<삭  제>

표 19. 유전자변형 알팔파 검사용 실시간 PCR 반응액 조성

성 분	최종 농도(well)	1회 분량(μL)
Universal Master Mix (2 X)1)	1 X	12.5
프라이머 (각 10 μM)	450 nM ~ 600 nM	1.125 ~ 1.5
Probe (10 μM)	100 nM ~ 210 nM	0.25 ~ 0.525
주형 DNA (20 ng/μL)	100 ng	5
멸균증류수	반응 총액이 25 μL가 되도록 첨가
전체량		25

1) Universal Master Mix 또는 이와 동등한 시약을 사용할 수 있다.

<삭 제>

다. 시험 조작(실시간 PCR 장치에 의한 정성 및 정량분석)

--------------------표 20

------------------------

---------- 표 21과 ------

------------------------

------------------------

----------------------.

표 20. ∼ 표 21. (현행 표 31. ∼ 표 32.와 같음)

라. 분석결과의 판정

유전자변형 사탕무 및 알팔파에 대한 분석결과의 판정은 10.1.11 유전자변형 면화 라. 정성분석결과의 판정 및 10.1.6 정량시험 사. 결과의 판정에 따른다. ---

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

-----.

10.1.14 미승인 유전자변형 밀

(현행과 같음)

가. (현행과 같음)

나. 시약 및 시액

1) 프라이머와 프로브(probe)

-----------------------

------------------------

---- 표 22와 ------------

------------------------

------------------------

----------------.

2) 반응액의 조제

표 22------------------

------------------------

------------------------

------------------- 표 23∼25와 -----------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

----------.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열	농도 (nM)
내재성유전자	밀 (102 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
	(94 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	300
구조유전자	M71800 (156 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	400
	(90 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	500
		(현행과 같음)	(현행과 같음)	500

표 22. 미승인 유전자변형 밀 검사용 프라이머와 프로브(probe)

표 23. ∼ 표 25. (현행 표 34. ∼ 표 36.과 같음)

다. 시험 조작

-----------------------

----------------- 표 26∼

27-----.

표 26. ∼ 표 27. (현행 표 37. ∼ 표 38. 과 같음)

라. (현행과 같음)

10.2 ∼ 10.5 (현행과 같음)

11. ∼ 12. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호	품 목 명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014200	(생 략)
A가014300	대두	백태, 청태, 노란콩, 검정콩, 흑두(黑豆), 서리태, Black Beans	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗
A가014400 〜 A가043000	(생 략)
A가043100	단삼	Dan-Shen	Salvia multiorrhiza Bunge	씨앗
A가043200 〜 A가045100	(생 략)
A가045200	대두	콩, Soy bean	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗
A가045300 〜 A가367400	(생 략)

2. 동물성

품목 번호	품 목 명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나002000	(생 략)
<신 설>
A나002100 〜 A나011300	(생 략)
<신 설>
A나011400 〜 A나072100	(생 략)
<신 설>
A나072200 〜 A나095600	(생 략)

3.～4. (생  략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호		품 목 명		이명 또는 영명		학명 또는 특성		사용부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014200		(현행과 같음)
(삭제 : A가045200으로 통합)
A가014400 〜 A가043000		(현행과 같음)
A가043100	단삼		Dan-Shen		Salvia miltiorrhiza Bunge		씨앗
A가043200 〜 A가045100		(현행과 같음)
A가045200		대두		콩, 백태, 청태, 노란콩, 검정콩, 흑두(黑豆), 서리태, Soy bean, Black Beans		Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.		잎, 씨앗
A가045300 〜 A가367400		(현행과 같음)

2. 동물성

품목 번호	품 목 명	이명 또는 영명		학명 또는 특성		사용부위 (생약명)
A나000100 〜 A나002000	(현행과 같음)
A나002050	가시이마쏙	Chinese mud shrimp		Austinogebia wuhsienweni / Upogebia wuhsienweni		-
A나002100 〜 A나011300	(현행과 같음)
A나011350	곳체다슬기	Martens	Semisulcospira gottschei		-
A나011400 〜 A나072100	(현행과 같음)
A나072150	지중해 담치	-		Mytilus galloprovincialis		-
A나072200 〜 A나095600	(현행과 같음)

3.～4. (현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”

1. ∼ 2. (생  략)

3. 미생물

고유번호	품목명	이명 또는 영명			학명 또는 특성		사용 조건
B다000100 ∼ B다003000	(생 략)
B다003100	Zymomonas mobilis		(생 략)	(생 략)		주류 제조에 한함
<신 설>
(생 략)

4. (생 략)

[별표 3] (생  략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”

1. ∼ 2. (현행과 같음)

고유번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
B다000100 ∼ B다003000	(현행과 같음)
B다003100	Zymomonas mobilis	(현행과 같음)	(현행과 같음)	주류 및 레반(Levan) 제조에 한함
B다003200	Brevibacterium linens		Brevibacterium linens	유가공품 제조에 한함
B다003300	Corynebacterium ammoniagenes	-	Corynebacterium ammoniagenes	유가공품 제조에 한함
B다003400	Dekkera bruxellensis	-	Dekkera bruxellensis	주류 제조에 한함
B다003500	Gluconacetobacter hanseni	-	Gluconacetobacter hanseni	식초 제조에 한함
B다003600	Lachancea thermotolerans	-	Lachancea thermotolerans	주류 제조에 한함
B다003700	Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis	-	Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis	유가공품 제조에 한함
B다003800	Leuconostoc carnosum	-	Leuconostoc carnosum	발효육류 제조에 한함
(현행과 같음)

3. 미생물

4. (현행과 같음)

[별표 3] (현행과 같음)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (45) (생   략)

(46) 메틸브로마이드(Methylbromide)

(생   략)

<신    설>

(47) ∼ (498) (생   략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (45) (현행과 같음)

(46) 메틸브로마이드(Methylbromide)

(현행과 같음)

인과류	20

(47) ∼ (498) (현행과 같음)

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (9)  (생   략)

(10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin /Streptomycin) :항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

닭근육	0.6

닭간	0.6

닭지방	0.6

닭신장	1.0

(11) 레바미졸(Levamisole) : 구충제

(생  략)

<신  설>

(12) ∼ (15)  (생   략)

(16) 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G, Procaine benzylpenicillin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(17) ∼ (32)  (생   략)

(33) 이버멕틴(Ivermectin) : 구충제

<신  설>

소간	0.1

소지방	0.04

<신  설>

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(34) ∼ (37)  (생   략)

(38) 클로산텔(Closantel) : 구충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(39)   (생   략)

(40) 타일로신(Tylosin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Tylosin

(생   략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(41) ∼ (42)   (생   략)

(43) 틸미코신(Tilmicosin) : 항균제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel /Fenbendazole/Oxfendazole) : 구충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(45) ∼ (53)  (생   략)

(54) 노르플록사신

(55) 오플록사신

(56) 페플록사신)

(57) ∼ (104)  (생   략)

(105) 프라지콴텔(Praziquantel) : 구충제

(생  략)

조피볼락	0.02

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(106) ∼ (115)  (생   략)

(116) 클로술론(Clorsulon) : 구충제

(생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

<신  설>

(117) ∼ (194)  (생   략)

[별표 5] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) ∼ (9)  (현행과 같음)

(10) 디히드로스트렙토마이신/스트렙토마이신(Dihydrostreptomycin /Streptomycin) :항균제

(현행과 같음)

염소근육	0.5

염소간	0.6

염소지방	0.6

염소신장	1.0

말근육	0.5

말간	0.6

말지방	0.6

말신장	1.0

가금근육	0.6

가금간	0.6

가금지방	0.6

가금신장	1.0

(11) 레바미졸(Levamisole) : 구충제

(생  략)

유	0.01

(12) ∼ (15)  (현행과 같음)

(16) 벤질페니실린(Benzylpenicillin, Penicillin G, Procaine benzylpenicillin) : 항균제

(생  략)

양근육	0.05

양간	0.05

양신장	0.05

염소근육	0.05

염소간	0.05

염소신장	0.05

말근육	0.05

말간	0.05

말신장	0.05

(17) ∼ (32)  (현행과 같음)

(33) 이버멕틴(Ivermectin) : 구충제

소근육	0.03

소간	0.8

소지방	0.4

소신장	0.1

(현행과 같음)

염소근육	0.03

염소간	0.8

염소지방	0.4

염소신장	0.1

말근육	0.03

말간	0.8

말지방	0.4

말신장	0.1

(34) ∼ (37)  (현행과 같음)

(38) 클로산텔(Closantel) : 구충제

(현행과 같음)

돼지근육	2.0

돼지간	2.0

돼지지방	2.0

돼지신장	5.0

유	0.05

(39)  (현행과 같음)

(40) 타일로신(Tylosin) : 항균제

◎ 잔류물의 정의 : Tylosin A

(현행과 같음)

양근육	0.1

양간	0.1

양지방	0.1

양신장	0.1

염소근육	0.1.

염소간	0.1

염소지방	0.1

염소신장	0.1

(41) ∼ (42)  (현행과 같음)

(43) 틸미코신(Tilmicosin) : 항균제

(현행과 같음)

닭근육	0.15

닭간	2.4

닭지방/피부	0.25

닭신장	0.6

(44) 페반텔/펜벤다졸/옥스펜다졸(Febantel /Fenbendazole/Oxfendazole) : 구충제

(현행과 같음)

사슴근육	0.1

사슴간	0.5

사슴지방	0.1

사슴신장	0.1

닭근육	0.05

닭간	0.5

닭지방	0.05

닭신장	0.05

알	1.3

(45) ∼ (53)  (현행과 같음)

< 삭   제 >

< 삭   제 >

< 삭   제 >

(54) ∼ (101)  (현행 (57) ∼ (104)과 같음)

(102) 프라지콴텔(Praziquantel) : 구충제

(현행과 같음)

어류	0.02

말근육	0.3

말간	4

말지방	0.2

말신장	4

(103) ∼ (112)  (현행 (106) ∼ (115)과 같음)

(113) 클로술론(Clorsulon) : 구충제

(현행과 같음)

양근육	0.035

양간	0.1

양신장	0.2

염소근육	0.035

염소간	0.1

염소신장	0.2

유	0.02

(114) ∼ (191)  (현행 (117) ∼ (194)과 같음)

[별표 6] 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) ∼ (18) (생   략)

(19) 빈클로졸린(Viclozolin)

(생  략)

계란	0.05

(생  략)

(20) ∼ (58) (생  략)

(59) 플루실라졸(Flusilazole)

(생  략)

계란	0.01

(생  략)

(60) ∼ (67) (생  략)

(68) 디설포톤(Disulfoton)

(생  략)

계란	0.02

(생  략)

(69) ∼ (79) (생  략)

(80) 페코나졸(Penconazole)

(생  략)

계란	0.05

(생  략)

(81) ∼ (99) (생   략)

[별표 6] 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) ∼ (18) (생   략)

(19) 빈클로졸린(Viclozolin)

(현행과 같음)

달걀	0.05

(현행과 같음)

(20) ∼ (58) (현행과 같음)

(59) 플루실라졸(Flusilazole)

(현행과 같음)

달걀	0.01

(현행과 같음)

(60) ∼ (67) (현행과 같음)

(68) 디설포톤(Disulfoton)

(현행과 같음)

달걀	0.02

(현행과 같음)

(69) ∼ (79) (현행과 같음)

(80) 페코나졸(Penconazole)

(현행과 같음)

달걀	0.05

(현행과 같음)

(81) ∼ (99) (현행과 같음)

[별표 7] (생  략)

[별표 7] (현행과 같음)

신․ 구조문 대비표